Chapter Overview

Hojas y tallos de la muestra botánica Mishico (Bidens andicola)

Hojas, tallos y flor de la muestra botánica Mishico (Bidens andicola)

Hojas y tallos del Mishico recolectados

Trituración de las hojas y tallos secos del Mishico

Trituración de las hojas y tallos secos del Mishico

Maceración de las hojas y tallos pulverizados y tamizado

Filtrado del macerado de Mishico

Concentración del extracto etanólico de Mishico, con el uso

del Rotavapor

Esterilización de los materiales empleados para la preparación

de soluciones a diferentes concentraciones

Soluciones a concentraciones empleadas: 100%, 75%, 50% y

25% del Mishico.

Pesado del Agar Muller Hinton, para su preparación y plaqueado

Preparación del Agar Muller Hinton

Medio de cultivo Agar Muller Hinton esterilizado

Agar Muller Hinton Resultado de los halos de inhibición obtenidos sobre cepas

Resultado de los halos de inhibición obtenidos sobre cepas de E. coli

Resultado de los halos de inhibición obtenidos sobre cepas de E. coli

Resultado de los halos de inhibición obtenidos sobre cepas de Staphylococcus aureus

Resultado de los halos de inhibición obtenidos sobre cepas de Staphylococcus aureus

“EVALUACIÓN DEL EFECTO ANTIBACTERIANO “in vitro” DEL EXTRACTO ETANÓLICO DEL MISHICO (Bidens andicola) SOBRE Staphylococcus aureus Y Escherichia coli, JULIACA, AGOSTO 2018 –

OCTUBRE 2018”

"EVALUATION OF THE ANTIBACTERIAL EFFECT" in vitro "OF THE ETHANOLIC EXTRACT OF MISHICO (Bidens andicola) ON

Staphylococcus aureus and Escherichia coli, JULIACA, AUGUST 2018 - OCTOBER 2018”

CHURA. S.

Objetivo: Evaluar el efecto antibacteriano “in vitro” del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) sobre Staphylococcus aureus y Escherichia coli. Material y Métodos: El extracto etanólico es obtenido por el método de maceración, la identificación cualitativa de los metabolitos secundarios por el método de Cromatografía de capa fina. Se preparó cuatro concentraciones del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) al 100%, 75%, 50% y 25% evaluando su efecto antibacteriano “in vitro” sobre las Cepas de Staphylococcus aureus y Escherichia coli, mediante el método modificado de Pozos en Agar y comparando su efectividad con los antibióticos control positivo Vancomicina 30ug y Amikacina 30ug respectivamente y control negativo Etanol 70°; el número de repeticiones para cada grupo fue 10. Resultados: En la composición fitoquímica cualitativa del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola), se halló la presencia de terpenos, flavonoides, cumarinas, taninos y saponinas terpenoidales; el Staphylococcus aureus fue sensible a las concentraciones de 100%, 75% y 50% del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) al comparar los halos de inhibición según escala de Durafford, y la Vancomicina 30ug, a excepción del Escherichia coli, siendo esta resistente a las cuatro concentraciones empleadas del extracto, al comparar los halos de inhibición según la escala de Durafford y la Amikacina 30ug. Conclusiones: El extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) al 100%, 75% y 50% es efectivo sobre cepas de Staphylococcus aureus, al igual que la Vancomicina de 30ug. En el caso del E. coli el extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola), no es efectiva en ninguna de las concentraciones empleadas a diferencia de la Amikacina de 30ug que si muestra efecto antibacteriano.

Palabras clave: Bidens andicola, Efecto antibacteriano, Escherichia coli, Staphylococcus aureus.

ABSTRACT

Objective: To evaluate the antibacterial effect "in vitro" of the ethanolic extract of Mishico (Bidens andicola) on Staphylococcus aureus and Escherichia coli. Material and Methods: The ethanolic extract is obtained by the maceration method, the qualitative identification of the secondary metabolites by the thin layer chromatography method. Four concentrations of the ethanolic extract of the Mishico (Bidens andicola) were prepared in 100%, 75%, 50% and 25% evaluating their antibacterial effect "in vitro" on the Staphylococcus aureus and Escherichia coli strains, by means of the modified method of Wells in Agar and comparing its effectiveness with the positive control antibiotics Vancomycin 30ug and Amikacin 30ug respectively and negative control Ethanol 70 °; the number of repetitions for each group was 10. Results: In the qualitative phytochemical composition of the ethanolic extract of Mishico (Bidens andicola), the presence of terpenes, flavonoids, coumarins, tannins and terpenoidal saponins was found; Staphylococcus aureus was sensitive to the concentrations of 100%, 75% and 50% of the ethanolic extract of the Mishico (Bidens andicola) when comparing the halos of inhibition according to the Durafford scale, and Vancomycin 30ug, with the exception of Escherichia coli, being this resistant to the four concentrations used of the extract, when comparing the inhibition zones according to the Durafford scale and the Amikacin 30ug. Conclusions: The 100%, 75% and 50% Misteric extract (Bidens andicola) is effective on strains of Staphylococcus aureus, as well as Vancomycin 30ug. In the case of E. coli, the ethanolic extract of the Mishico (Bidens andicola) is not effective in any of the concentrations used, unlike the Amikacin of 30ug, which does have an antibacterial effect.

Key words: Bidens andicola, Antibacterial effect, Escherichia coli, Staphylococcus aureus.

INTRODUCCIÓN

En este trabajo de investigación se planteó como objetivo evaluar una de las propiedades medicinales atribuidas a la planta de nombre tradicional Mishico (Bidens andicola), esta cuenta con diversas propiedades medicinales, como son las propiedades analgésicas, antinflamatorias, antibacteriana, efecto antioxidante y fotoprotectora; pero en esta investigación se evalúo su actividad antibacteriana sobre dos bacterias las cuales son S. aureus y E. coli, ambas bacterias son seleccionadas debido a las infecciones que estas causan, infecciones que a su vez están relacionadas con los usos medicinales tradicionales de la planta Mishico, además estas bacterias son de importancia clínica. La Región Puno cuenta con una gran diversidad de plantas medicinales, muchas de ellas no cuentan con estudios científicos que puedan probar su eficacia y seguridad, por lo cual surge la necesidad de realizar este trabajo de investigación en cuanto a la seguridad y eficacia de la planta Mishico, empleando el método de pozos en agar el cual es recomendado por la OMS, además de usar controles positivos siendo estos la Vancomicina y Amikacina.

Hipótesis: El extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) si presenta efecto antibacteriano “in vitro” sobre Staphylococcus aureus y Escherichia coli. Juliaca, agosto 2018 – octubre 2018.

Objetivo: Evaluar el efecto antibacteriano “in vitro” del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) sobre Staphylococcus aureus y Escherichia coli. Juliaca, agosto 2018 – octubre 2018.

Conclusión: El extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) presenta efecto antibacteriano in vitro sobre cepas de Staphylococcus aureus, excepto en cepas de Escherichia coli.

MATERIAL Y MÉTODOS

El tipo de investigación es experimental, prospectivo y transversal con una línea de investigación en el área de farmacognosia y microbiología, siendo el nivel de investigación aplicativa. La recolección de la planta Mishico (Bidens andicola) se hizo en el distrito de Limbani, la identificación taxonómica de la Planta se realizó en el Laboratorio de Taxonomía Vegetal de la Escuela Profesional de Ingeniería Agronómica de la Universidad Nacional del Altiplano de Puno, por el método de maceración se obtiene el extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola), para lo cual se emplea las hojas y tallos seguidamente se realiza la identificación de los metabolitos secundarios por el método de cromatografía de capa fina; a partir del extracto etanólico al

100% se realiza la preparación de las concentraciones al 75%, 50% y 25%, posterior a ello se llevó a cabo la evaluación del efecto antibacteriano por el método de pozos en agar sobre la bacteria Staphylococcus aureus y Escherichia coli, empleando como control positivo a la Vancomicina 30ug y Amikacina 3oug respectivamente y como control negativo se usa al etanol de 70°.Cada uno de los resultados obtenidos fue recolectado en las fichas de reporte de resultados; empleadas para el trabajo de investigación.

RESULTADOS

Se determinó que las características organolépticas del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) son aspecto líquido, color verde, percibir su olor sui generis, y sabor amargo. (Ver tab. 1)

En la determinación de la composición fitoquímica mediante la cromatografía de capa fina responsable del efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) se determinó que está conformada por terpenos, flavonoides, cumarinas, taninos, saponinas terpenoidales. (Ver tab. 2)

Para evaluar el efecto antibacteriano y certificar la validez de la prueba, se tomó en cuenta los datos referenciales de los halos de inhibición de la Vancomicina 30ug y Amikacina 30ug, así como la escala de Duraffourd. En la evaluación del efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) se determinó que al 100%, 75% y 50% es efectivo sobre cepas de Staphylococcus aureus, al igual que la Vancomicina de 30ug. (Ver tab. 3) En el caso del E. coli el extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola), no es efectiva en ninguna de las concentraciones empleadas a diferencia de la Amikacina de 30ug que si muestra efecto antibacteriano. (Ver tab. 4)

TABLA 7.CARACTERISTICAS ORGANOLÉPTICAS DEL EXTRACTO ETANÓLICO DEL MISHICO (Bidens andicola)

CARACTERISTICAS ORGANOLÉPTICAS EXTRACTO ETANÓLICO

COLOR Verde

OLOR Sui generis

ASPECTO Liquido transparente

SABOR Amargo

TABLA 8. COMPOSICIÓN FITOQUÍMICA DEL EXTRACTO ETANÓLICO DEL MISHICO (Bidens andicola)

ANÁLISIS RESULTADO

DETERMINACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS Metodología CCF - Terpenos - Flavonoides - Cumarinas - Taninos - Saponinas terpenoidales Negativo a alcaloides

TABLA 9. PROMEDIO DE LOS DIÁMETROS DE INHIBICIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO DEL MISHICO (Bidens andicola) SOBRE Staphylococcus aureus, A CONCENTRACIONES DE 100%, 75%, 50% Y 25%, DEL CONTROL POSTIVO (Vancomicina 30ug) Y CONTROL NEGATIVO (Etanol 70°)

MUESTRA Staphylococcus aureus

CONCENTRACIÓN DIÁMETRO PROMEDIO

EN (mm) SENSIBILIDAD EXTRACTO ETANÓLICO VANCOMICINA ETANOL 100% 75% 50% 25% 30ug 70° 23 16.8 15 11.2 19.9 6 Sensible Sensible Sensible Resistente Sensible Resistente

Fuente: Elaboración propia.

TABLA 10 . PROMEDIO DE LOS DIÁMETROS DE INHIBICIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO DEL MISHICO (Bidens andicola) SOBRE Escherichia coli, A CONCENTRACIONES DE 100%, 75%, 50% Y 25%, DEL CONTROL POSTIVO (Amikacina 30ug) Y CONTROL NEGATIVO (Etanol 70°)

MUESTRA Escherichia coli

CONCENTRACIÓN DIÁMETRO PROMEDIO

EN (mm) SENSIBILIDAD EXTRACTO ETANÓLICO AMIKACINA ETANOL 100% 75% 50% 25% 30ug 70° 6 6 6 6 22.1 6 Resistente Resistente Resistente Resistente Sensible Resistente

Fuente: Elaboración propia.

DISCUSIÓN

En cuanto a los resultados obtenidos en la determinación de las características organolépticas se puede apreciar similitud con estos resultados en el trabajo de investigación de Tinajero Robalino Mayra Daniela (Ecuador, 2015) en la que señala que las características organolépticas del extracto etanólico de las partes aéreas de la planta Mishico presenta un aspecto líquido, color verde y olor dulce. (1)

En cuanto a la determinación fitoquímica del extracto etanólico de hojas y tallos del Mishico (Bidens andicola), Rodríguez Quezada, Gamarra Torres y Pérez Azahuanche (Perú-Trujillo, 2011) quienes realizaron la evaluación fitoquímica de hojas y tallos del Bidens andicola HBK “cadillo” hallaron la presencia de esteroides, flavonoides, cardiotónicos y taninos, pudiéndose apreciar similitud con los resultados obtenidos en este trabajo de investigación. (2) López Romo, Estefanía Belén (Ecuador, 2016); en el extracto alcohólico de las partes aéreas del Bidens andicola se identificaron los mismos principios activos hallados en este trabajo (3). Al igual que en el trabajo de Pacheco Pacheco, Diana Sthefany (Ecuador, 2018). (4) Según Huarcaya Huarcaya, Liliana y Sotelo Saravia, Nancy Avelina (Perú-Lima, 2018) en el análisis cualitativo del extracto etanólico de las flores de Bidens andicola H.B.K.”quiquo” determinaron la presencia de metabolitos secundarios tales como: compuestos fenólicos, alcaloides, taninos, esteroides y/o triterpenos y ausencia de flavonoides. (5) A diferencia de Anita Solis Q., Lastenia Cutipa Ch., Leoncio Solís Q., Franco Delle Monache (Perú- Cusco, 1991) quienes determinaron la presencia de flavonoides en las flores del Bidens andicola, pudiendo mencionar que se empleó métodos diferentes.

En la determinación del efecto antibacteriano se determinó que el extracto etanólico del Mishico (Bidens andicola) presenta efecto antibacteriano in vitro sobre Staphylococcus aureus, a excepción del Escherichia coli en donde no hubo efecto antibacteriano.Sin embargo estos resultados no concuerdan con Rodriguez Quezada, Gamarra Torres y Pérez Azahuanche (Perú-Trujillo, 2011), trabajo en donde se determinó efecto inhibitorio sobre Escherichia coli. (2) Cruz Carrillo Anastasia, Rodríguez N. Natalia, Rodríguez Carlos Eduardo (Ecuador, 2010) en su trabajo de investigación señalan que el Bidens pilosa muestra actividad inhibitoria contra Staphylococcus aureus, comprobándose esto mediante los métodos aplicados en este estudio. En cambio, no mostro actividad inhibitoria sobre cepas de E. coli y P. aeruginosa, ante ninguno de los extractos ensayados en todas las pruebas. (6)

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Tinajero Robalino MD. Estudio fitoquímico y evaluación de la actividad fotoprotectora in-vitro del componente flavónico presente en Bidens andicola (ñachag). [tesis de grado]. Riobamba: Escuela Superior Politécnica de Chimborazo; 2015.

2. Rodriguez P, Gamarra O, Pérez F. Evaluación fitoquímica y antibacteriana de Bidens andicola HBK “cadillo”, Alternanthera philoxeroides (C. Mart.) Griseb. “lancetilla” y Celosia sp. “pashquete”. Arnaldoa. 2011; 18(1): p. 63 – 67.

3. López Romo B. Evaluación de la actividad antiinflamatoria y citotoxicidad in vitro de Bidens andicola. [Tesis grado]. Riobamba-Ecuador: Escuela superior politécnica de Chimborazo; 2016.

4. Pacheco Pacheco DS. “Formulación de un protector solar a base de extracto Ñachag (Bidens andicola) y determinación de su calidad”. [Tesis de grado]. Riobamba - Ecuador: Escuela Superior Politécnica de Chimborazo, Facultad de Ciencia - Escuela de Bioquímica y Farmacia; 2018.

5. Huarcaya Huarcaya L, Sotelo Saravia NA. Actividad analgésica y antiinflamatoria del Extracto etanólico de las flores de Bidens andicola H.B.K. “quiquo”. [Tesis de grado]. Lima: Universidad Norbert Wiener; 2018. 6. Cruz Carrillo A, Rodríguez N, Rodríguez CE. Evaluación in vitro del efecto antibacteriano de los extractos de Bidens pilosa, Lantana camara, Schinus molle Y Silybum marianum. Rev. U.D.CA, Actualidad y Divulgación Científica. 2010.