Comparison of Results

La cromatografía liquida de alta performance es una técnica de separación basada en una fase estacionaria sólida y en una fase móvil líquida. La separación en este caso se logra por procesos de adsorción. El tiempo de elución de cada principio activo depende de su naturaleza química, la composición y la velocidad de flujo de la fase móvil y la composición y el área de la fase estacionaria, que en este caso consiste en una columna rellena con material L1 (Octadecilsilano unido químicamente a sílice porosa).Siendo esta metodología de uso rutinario en la Industria Farmacéutica, se hace necesario demostrar que cumple con los parámetros de validación establecidos y que nos permitirá obtener los resultados previstos.6, 7, 9, 14

Selectividad

Se trabajó tanto el placebo, la solución estándar y el placebo más estándar, no encontrándose picos que interfieran con el pico cromatográfico de la prednisona, es decir no hubo picos que eluyan al mismo tiempo de retención, comprobándose que los excipientes o productos de degradación no influyen sobre el analito de interés.

Para los productos de degradación sometidos a ciertas condiciones, la Asociación Española de Farmacéuticos de la Industria (A.E.F.I) hace mención que se puede lograr una degradación del 10 % al 20 %. Con la finalidad de

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evaluar la degradación o la interferencia de los excipientes, es de sumo interés superponer los distintos cromatogramas obtenidos.6

En hidrólisis básica obtuvimos picos cromatográficos, pero en diferentes tiempos de retención en comparación con el de la prednisona (analito estándar), es así que este último eluyó a un tiempo de retención de 2, 48 minutos a diferencia de del producto de degradación que fue a los 2,31 minutos, no interfiriendo con éste, como se puede observar en la Fig. N° 5. Cabe mencionar que al someter la muestra a luz natural, el área del pico se ve disminuida por lo cual es la recomendación de proteger de la luz al estándar de prednisona.

Linealidad:

Estadísticamente lo correcto hubiese sido analizar las muestras de forma aleatoria, no obstante, se estableció como criterio práctico analizarlas en sentido creciente de concentración con la finalidad de minimizar posibles errores en el equipo. Además se trabajó a diferentes pesos, ya que así se elimina el posible error sistemático que se podría arrastrar de una sola pesada y realizando diluciones.6

Así como podemos observar en el cuadro N° 2, resultados de la Linealidad del sistema (Estándares), se obtuvo un coeficiente de correlación lineal de r= 0,999 para el rango de 50% a 150% siendo el valor aceptable de acuerdo a lo especificado. Si bien es cierto el valor obtenido esta en el limite inferior

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especificado (r  0,999); sin embargo la bibliografía hace mención que este último es una información limitada y no justifica por si sola la linealidad, siendo el factor de determinación (r2_{) el que aporta una mayor significación estadística}

ya que expresa la proporción de la variación total de respuesta. 6

Entonces en el caso encontramos r2 _{ 0,997 (0,999), por lo cual se comprobó}

la relación lineal entre la concentración del analito y el área obtenida. Con una probabilidad elevada, que la variación del área se deba a la variación de la concentración.

El coeficiente de variación de los factores de respuesta fue de f= 1,31%; el cual es menor de 2% por lo tanto se tuvo una sensibilidad de calibrado a las concentraciones analizadas y el valor t exp. para un valor de = 0,01; fue de109,503; siendo mayor que t tabla = 3,012.

Para la Linealidad del método se trabajó a 3 concentraciones diferentes: 80%, 100% y 120%, obteniéndose un coeficiente de correlación lineal de r= 0,999 y r2_{= 0,999 ( 0,997), presentando por lo tanto una correlación lineal entre la}

concentración del analito y el área obtenida. El coeficiente de variación de los factores de respuesta fue de f=1,65 %; cumpliendo con lo especificado, como lo muestra el cuadro N° 4.

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La pendiente, en ambos casos, es significativamente distinta de cero para un grado de significación  igual a 0,01 ya que t exp, obtenido (73,499) es mayor que t tabla.

Del análisis del Coeficiente de variación de los factores respuesta se deduce que existe una relación lineal, entre la respuesta y la concentración, ya que en ambos casos, el valor obtenido es menor al 2,0%.6

Precisión:

Ésta no debe ser confundida con la exactitud, pues la precisión viene a ser el grado de concordancia (grado de dispersión) entre una serie de medidas a partir de la misma muestra homogénea, pero no necesariamente indica cercanía al valor verdadero. Es decir que podemos obtener mediciones muy precisas pero poco exactas; sin embargo para que un método sea exacto se requiere que sea preciso.6, 10

Los coeficientes de variación obtenidos tanto para la repetibilidad del método, repetibilidad del sistema y precisión intermedia se encontraron por debajo de los valores máximos permitidos, los cuales fueron de 0,08 %; 0,07%; y 0,13 %; respectivamente, lo cual nos asegura que el método y el equipo empleado, cumplen con los parámetros en estudio.

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En el cuadro N° 8 podemos notar que el porcentaje de recuperación media fue del 100,15 % para el rango de 99,5 a 100,5 %, con una desviación estándar relativa de 1,42 %, la cual es menor de 3,9 % y nos indica que la dispersión de los resultados es aceptable.

Para el test de Student, se tiene un t de las tablas de 3,355; para  = 0,01 y un t experimental de 0,314162 menor al t de tabla por lo tanto no existe diferencia significativa entre la recuperación media y la cantidad añadida del analito, es decir que el porcentaje de recuperación de analito es muy cercano al 100%. Es decir el valor obtenido es próximo al valor verdadero o al aceptado

convencionalmente como verdadero.6

Los resultados obtenidos nos permiten evidenciar que el método analítico nos lleva o nos permite asegurar resultados con alta confiabilidad, por lo cual quedo demostrado experimentalmente la utilidad del mismo en los análisis rutinarios realizados en Laboratorios Unidos S.A.

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