III Variable Modifications

Tabla 9-3: Resultados del rendimiento y análisis organoléptico del extracto de P. manicata.

Parámetro Resultado

Olor Herbáceo

Color Marrón rojizo

Sabor Ligeramente amargo y astringente

Rendimiento 25.52 %

Realizado por: Bryan Hidalgo, 2019.

Tabla 10-3: Resultados del rendimiento y análisis organoléptico del extracto de O. grandiflora.

Parámetro Resultado

Olor Herbáceo

Color Verde oscuro

Sabor Amargo y astringente

Rendimiento 30.24 %

Realizado por: Bryan Hidalgo, 2019.

Después de evaluar las características organolépticas de los extractos secos, se determinó que P. manicata posee un aroma herbáceo, un color marrón rojizo, y un sabor ligeramente amargo y astringente, mientras que el extracto seco de O. grandiflora es de un olor herbáceo, tiene un sabor amargo y astringente y un color verde oscuro.

Las características organolépticas dependen de los metabolitos secundarios contenidos en las plantas, la clorofila y ciertos pigmentos son los responsables del color de los extractos. El olor herbáceo se debe a compuestos volátiles de 6 carbonos, tales como hexanol, hexanal, cis-3- hexenal, entre otros. La astringencia y amargura se debe a la presencia de polifenoles, esto se

relaciona con la presencia de flavonoides y compuestos fenólicos determinados en el tamizaje fitoquímico del extracto alcohólico (Sánchez et al., 2019, pp.1-9).

El rendimiento obtenido en P. manicata fue de 25.52 %, superando en gran medida al establecido por Santamaría (2016, p.48), cuyo rendimiento fue de 0.39%. El rendimiento pudo verse afectado por el método empleado, pues a partir del extracto etanólico concentrado se realizó extracciones sucesivas con hexano, cloroformo, acetato de etilo y etanol, evaluando en este último el rendimiento. Además el secado de la droga vegetal se efectuó a temperatura ambiente y no en una estufa, produciéndose un secado más lento que pudo haber dado lugar a la degradación de metabolitos por acción enzimática.

En esta investigación se obtuvo un rendimiento de 30.24% para O. grandiflora, mientras que en el estudio desarrollado por Cajamarca (2016, p.62), se logró un rendimiento de 21.59%, sin embargo no existe una diferencia significativa como el caso anterior, ya que el método de obtención del extracto fue similar, considerando que no hubo extracciones sucesivas a partir de un extracto inicial.

3.4. Determinación de fenoles totales

La determinación de fenoles totales de las dos especies vegetales se efectuó mediante un método espectrofotométrico, que se basa en una reacción colorimétrica de óxido reducción, donde el agente oxidante es el reactivo de Folin-Ciocalteu.

Para determinar el contenido de fenoles se elaboró una curva de calibración utilizando ácido gálico como estándar, a concentraciones de 20, 40, 60, 80 y 100 ppm, como se observa en la tabla 11-3 y en el gráfico 1-3.

Se obtuvo una ecuación de la recta de 𝑦 = 0.0008𝑥 + 0.0133, con un coeficiente de correlación de R2_{= 0.9992 que indica una buena correlación entre las variables. Las muestras y} los estándares se evaluaron por triplicado.

Tabla 11-3: Resultados de las absorbancias del estándar de ácido gálico. [ ] ppm Absorbancia 20 0.029 40 0.046 60 0.060 80 0.077 100 0.093

Realizado por: Bryan Hidalgo, 2019.

.

Gráfico 1-3: Curva de calibración de las absorbancias del estándar de ácido gálico.

Realizado por: Bryan Hidalgo, 2019.

La concentración de fenoles totales de las especies vegetales se expresó como mg de equivalentes de ácido gálico por gramos de extracto seco (mg EAG/g extracto seco), así como también en porcentaje, que es proporcional a los gramos de equivalentes de ácido gálico que hay en 100 gramos de extracto seco.

Tabla 12-3: Resultados del contenido de fenoles totales del extracto seco de P. manicata.

Sustancia mg EAG /g extracto seco Porcentaje (%)

Extracto seco 240 ± 10 24 ± 1

Realizado por: Bryan Hidalgo, 2019.

y = 0.0008x + 0.0133 R² = 0.9992 0 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,07 0,08 0,09 0,1 0 20 40 60 80 100 120 A b sor b an ci a [ ] ppm

Tabla 13-3: Resultados del contenido de fenoles totales del extracto seco de O. grandiflora.

Sustancia mg EAG /g extracto seco Porcentaje (%)

Extracto seco 208.33 ± 12.58 20.83 ± 1.26

Realizado por: Bryan Hidalgo, 2019.

La cantidad de fenoles totales determinados en el extracto de P. manicata fue de 240 ± 10 mg EAG/g de extracto seco, correspondiente al 24 ± 1%, y de O. grandiflora fue de 208.33 ± 12.58 mg EAG/g de extracto seco, correspondiente al 20.83 ± 1.26 %. Estos compuestos son responsables de la capacidad fotoprotectora, y podrían estar relacionados en cierta medida con la actividad irritativa y genotóxica, sin embargo las pruebas in vitro realizadas corroboraron que no poseen éstas actividades.

Los resultados reflejaron que las dos especies vegetales poseen una cantidad considerable de fenoles totales, pues el porcentaje de fenoles totales de este estudio, fue mayor al reportado en la investigación de P. manicata realizada por Santamaría (2016, p.61), donde se determinó un porcentaje de 14.21 ± 0.19 y al de O. grandiflora determinado en el estudio de Yanza (2017, p.59), donde se obtuvo un valor de 16.004 ± 0.296 %.

Estas diferencias pueden deberse a factores ambientales a los que están expuestos las especies vegetales, tales como la altitud, temperatura e incluso insectos que podrían atacarlas. Cuando las condiciones son hostiles las plantas producen más metabolitos para adaptarse ; por ejemplo a mayor altura existe más radiación solar, las plantas para protegerse producen mayor cantidad de fenoles y flavonoides (Vega, De León y Reyes, 2017, p.7).

3.5. Determinación de flavonoides totales

La determinación de flavonoides totales de las dos plantas se realizó a través de un método espectrofotométrico basado en la formación de un complejo entre los flavonoides y el tricloruro de aluminio (AlCl3), donde la solución se torna rosada después de la reacción.

Se elaboró una curva de calibración para determinar el contenido de flavonoides totales, empleando quercetina como patrón, a concentraciones de 20, 40, 60, 80 y 100 ppm, como se observa en la tabla 14-3 y en el gráfico 2-3. La ecuación de la recta obtenida fue de 𝑦 = 0.002𝑥 + 0.0056, con un coeficiente de correlación de R2_{= 0.999 que indica una buena} correlación entre las variables.

Tabla 14-3: Resultados de las absorbancias del estándar de quercetina [ ] ppm Absorbancia 20 0.043 40 0.086 60 0.124 80 0.166 100 0.200

Realizado por: Bryan Hidalgo, 2019.

Gráfico 2-3: Curva de calibración de las absorbancias del estándar de quercetina.

Realizado por: Bryan Hidalgo, 2019.

La concentración de fenoles totales de las especies vegetales y de los patrones se determinó por triplicado y los valores obtenidos se expresaron como mg de equivalentes de quercetina por gramos de extracto (mg EQ/g extracto seco), y en gramos de equivalentes de quercetina por 100 gramos de extracto, que equivaldría al porcentaje de flavonoides. Los resultados de la cantidad de flavonoides totales de las especies vegetales se plasmaron en las tablas 13-3 y 14-3.

Tabla 15-3: Resultados del contenido de flavonoides totales del extracto seco de P. manicata.

Sustancia mg EQ /g extracto seco Porcentaje (%)

Extracto seco 259.68 ± 3.97 25.97 ± 0.37

Realizado por: Bryan Hidalgo, 2019.

y = 0.002x + 0.0056 R² = 0,999 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0 20 40 60 80 100 120 A b sor b anc ia [ ] ppm

Tabla 16-3: Resultados del contenido de flavonoides totales del extracto seco de O. grandiflora.

Sustancia mg EQ /g extracto seco Porcentaje (%)

Extracto seco 286.29 ± 7.39 28.63 ± 0.74

Realizado por: Bryan Hidalgo, 2019.

Se encontró que los extractos hidroalcohólicos de P. manicata y O. grandiflora contienen 259.68 ± 3.97 mg EQ/g de extracto seco (25.97 ± 0.37 %) y 286.29 ± 7.39 mg EQ/g de extracto seco (28.63 ± 0.74 %), respectivamente.

De acuerdo con la investigación efectuada por Cajamarca (2016) y Vinueza et al., (2018) los flavonoides más abundantes en O. grandiflora son la rutina (quercetina 3-o-rutinósido), narcisina (isoramnetina 3-O-rutinósido), quercetina-3-O-galactosil-7-O-ramnósido, quercetina 3-O-β-glucurónido y miricetina 3-O-β-glucurónido. Por otro lado, en la investigación efectuada por Da Silva Morrone et al., (2013, p.4), determinaron que los flavonoides en P. manicata están representados por vitexina (apigenina-8-C-glucósido), isovitexina (apigenina-6-C-glucósido) e isoorientina (luteolina-6-C-glucósido).

Estos flavonoides glucosilados son los responsables de la actividad fotoprotectora, cuyos beneficios serán aprovechados por investigaciones posteriores en la elaboración de fotoprotectoras solares. Además se determinó que son inocuos ya que después de realizar el ensayo HET-CAM, CAM-TBS y el test de micronúcleos, no hubo signos de irritación ocular ni presencia de micronúcleos.

Como en el caso de los fenoles, los factores ambientes a los que están expuestos las plantas condicionaron a que sinteticen sus metabolitos secundarios, tal es el caso de la investigación realizada por Cajamarca (2016, p.74), donde se recolectó la planta en la región de Colta a 3500 m s.n.m y se encontró que la especie O. grandiflora contiene un porcentaje de flavonoides de 53.55 ± 13.23, superando al obtenido en el presente estudio, pues la recolección se hizo a menor altura, aproximadamente a 2833 m s.n.m.

En la investigación realizada por Bonilla (2016, p.56), se encontró que el porcentaje de flavonoides de P. manicata de 5.3101 ± 0.1004 es menor al determinado en este estudio, debido a que fue recolectada en Pallatanga que es un lugar de menor altura y por ende más cálido.