Chapter 8 The UNIX System Interface
A.7 Expressions
A.8.3 Structure and Union Declarations
4.3.1. Extracto de acetato de etilo – flores.
4.3.1.1. Fracción AcOEtFF4.
De la fracción 17-22, identificada como AcOEt FF4, eluída en cromatografía en columna en una polaridad Hex: CH2Cl2 6:4, se obtuvo 6.5 mg de un polvo blanquecino, con punto
de fusión 39-42 ˚C, soluble en diclorometano y cloroformo, con un Rf de 0.58 en una
polaridad Hex: CH2Cl2 8:2. La fracción fue analizada en CG/EM y se obtuvo una mezcla de
8 hidrocarburos: Tricosano (1) (tR= 21.12) cuyo peso molecular es 324.63 g/mol;
Tetracosano (2) (tR=21.95) cuyo peso molecular es 338.65 g/mol; Pentacosano (3) (tR=
22.75) cuyo peso molecular es 352.68 g/mol; Hexacosano (4) (tR= 23.52) cuyo peso
molecular es 366.71 g/mol; Heptacosano (5) (tR= 24.28) cuyo peso molecular es 380.73
g/mol; Octacosano (6) (tR= 25.11) cuyo peso molecular es 394.76 g/mol; Nonacosano (7)
(tR= 26.12) cuyo peso molecular es 408.79 g/mol; Eicosano (8) (tR= 28.89) cuyo peso
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espectros 5 a 13) el porcentaje de similitud de los espectros de masa fueron 99, 99, 99, 98, 99, 99, 99 y 97% respectivamente para cada uno de los hidrocarburos. Se compararon los patrones de fraccionamiento de masa con los reportes previos en literatura que apoyan las estructuras propuestas (Ariza, O. et al., 2007) (Delange, D. et al., 2014) (Adams, 2007).
En las Figura 8 se muestran las estructuras de los compuestos que conforman la mezcla. Cuatro de estos hidrocarburos han sido reportados en otra especie del mismo género,
Erythrina smithiana (Aguilar, L. 2015). El metabolito Heneicosano ha sido aislado en la
especie Posoqueria latifolia del extracto etanólico, (Ariza, O. et al., 2007), para el mismo
se ha reportado actividad analgésica. Los metabolitos pentacosano, heptacosano y eicosano han sido aislados a partir del extracto de éter de petróleo de Petiveria alliacea,
reportando para los mismos propiedades antibacterianas (Delange, D. et al., 2014).
Figura 8. Estructuras de los compuestos pertenecientes a la mezcla 1: Tricosano (1),
Tetracosano (2), Pentacosano (3), Hexacosano (4), Heptacosano (5), Octacosano (6), Nonacosano (7), Eicosano (8).
Fuente: Autora
4.3.1.2. Fracción AcOEt FF13.
De la fracción del extracto de acetato de etilo – flores, identificada como AcOEt FF13, correspondiente a la unión de las fracciones 87-94, eluída en cromatografía en columna con polaridad CH2Cl2 100%, se obtuvieron cristales amarillos. Al realizar CCF se detectó
la presencia de impurezas por lo que fue necesaria una re-cristalización con metanol, obteniendo 21.8 mg de un sólido blanco cristalino, con un punto de fusión 115-119 ˚C, soluble en diclorometano y cloroformo, con un Rf de 0.45 en una polaridad Hex: CH2Cl2
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6:4. Se analizó la fracción mediante CG/EM (Anexo, espectros 14 a 17), se pueden observar tres tiempos de retención distintos. Según la base de datos Wiley 7n.I los compuestos probablemente serían: bikaverin (9) (tR=33.71), cuyo peso molecular es
382.32 g/mol, con un porcentaje de similitud de 90; estigmastan 3,5,22 trien (10) (tR=34.42), cuyo peso molecular es 394.68 g/mol, con un porcentaje de similitud de 94 y
estigmastan 3,5 dien (11) (tR= 36.25), cuyo peso molecular es 396.69, con un porcentaje
de similitud de 99. Reportes en literatura apoyan la estructura propuesta (Kwamou, GMN, et al., 2015) (Son, et al., 2008) (Bawankar, et al., 2013).
En la Figura 9 se muestran las posibles estructuras de la mezcla 2. A partir de Erythrina
excelsa se logró aislar el compuesto estigmasterol (Kwamou, GMN, et al., 2015) mientras
que los compuestos 10 y 11 se han aislado de E. ulei. El bikaverin (9) ha sido aislado a
partir de Fusarium oxysporum al que le reportan actividad antimicrobiana frente a
bacterias patógenas de plantas diferentes, oomicetos y hongos verdaderos. (Son, et al., 2008)
Figura 9. Estructuras de los compuestos pertenecientes a la mezcla 2. Bikaverin
(9), Estigmastan 3,5 ,22 trien (10), Estigmastan 3,5 dien (11)
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4.3.2. Extracto de acetato de etilo – hojas.
4.3.2.1. Fracción AcOEt HF18-M11.
De la fracción 100-104, identificada como AcOEt HF18, eluída en cromatografía en columna abierta en una polaridad Hex: CH2Cl2 2:8 se obtuvo 193.8 mg de un sólido
amarillo oscuro soluble en diclorometano. Se realizó una microcolumna para separar los compuestos. Se aisló 30.1 mg de la fracción denominada AcOEt HF18-M11. Después de purificar la fracción para separar el compuesto, se obtuvo 8.6 mg de un líquido transparente soluble en diclorometano y cloroformo, con un Rf de 0.37 en Hex:CH2Cl2 1:1.
Al analizarlo en CG/EM (Anexo, espectro 18 y 19) se observan 5 tiempos de retención. Siendo tR = 20.25 para el compuesto mayoritario con una proporción de 60.48 de acuerdo
con la base de datos Wiley 7n.l. Para su identificación se comparó el espectro con el de la base de datos spectral database for organic compounds SDBS (Anexo, espectro 19-1). El compuesto se identificó mediante RMN (Anexo, espectros 20 y 21) como: fitol acetato (12), cuyo peso molecular es 338.57 g/mol con fórmula química C22H42O2. Fue
caracterizado mediante comparación de espectros reportados en literatura (Bhattacharya & Rana, 2013)(Burdi & Hasan, 1991). En la tabla 9 y 10 se muestran los datos espectroscópicos correspondientes a 13C y 1H del metabolito, en donde los
desplazamientos químicos se hallan expresados en ppm.
Tabla 9. Datos espectroscópicos de RMN 13C (CDCl
3) del compuesto fitol acetato (12)
Asignación Tipo de carbono Desplazamiento químico Compuesto 12 (CDCl3) Referencia bibliográfica (Bhattacharya & Rana, 2013)
C1 CH2 61.5 61.4 C2 CH 118.1 118 C3 C 142.9 142.8 C4 CH2 40.0 39.9 C5 CH2 25.2 25 C6 CH2 36.8 36.6 C7 CH 32.8 32.7 C8 CH2 37.6 37.4 C9 CH2 24.6 24.5 C10 CH2 37.4 37.3
34 C11 CH 32.9 32.8 C12 CH2 37.5 37.4 C13 CH2 24.9 24.8 C14 CH2 39.5 39.4 C15 CH 28.1 28 C16 CH3 22.7 22.6 C17 CH3 22.8 22.7 C18 CH3 19.8 19.7 C19 CH3 19.9 19.7 C20 CH3 16.5 16.4 C21 CO 171.3 171.1 C22 CH3 21.2 21 Fuente: Autora
Tabla 10. Datos espectroscópicos de RMN 1H (CDCl
3) del compuesto fitol acetato (12)
Asignación
Compuesto 12 Referencia bibliográfica
(Bhattacharya & Rana, 2013) Desplazamiento químico Multiplicidad Desplazamiento químico Multiplicidad C – H3 0.83 – 0.88 M 0.83 – 0.88 m C – H2 1.02 – 1.40 M 1.02 – 1.40 m C – H3 1.69 S 1.69 s C – H2 2 T 2 t C – H3 2.05 S 2.05 s C – H2 – OAc 4.59 D 4.58 d C – H 5.32 M 5.34 m Fuente: Autora
El metabolito ha sido aislado a partir del extracto de diclorometano de las partes aéreas de la especie Lagascea mollis, se reporta actividad antimicobacterial para el mismo
(Bhattacharya & Rana, 2013). También ha sido aislado del extracto etanólico de la especie Leucosidea sericea con actividad antibacterial (Sharma, et al., 2014).
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En la figura 10 se muestra la estructura del metabolito aislado, identificado como fitol acetato.
Figura 10. Estructura del compuesto identificado como fitol acetato (12)
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CONCLUSIONES
De los extractos obtenidos a partir de Erythrina ulei el que mostró mayor rendimiento fue
el extracto metanólico - flores con 10.94% en comparación con los extractos de hexano y acetato de etilo de las diferentes partes aéreas, cuyos rendimientos son de 0.26 a 5.87. Del extracto en acetato de etilo - flores de Erythrina ulei se identificó mediante el índice de
retención la fracción AcOEt FF4, la cual fue una mezcla de ocho hidrocarburos que son: Tricosano (1); Tetracosano (2); Pentacosano (3); Hexacosano (4); Heptacosano (5); Octacosano (6); Nonacosano (7); Eicosano (8).
También se obtuvo la fracción AcOEtFF13 la cual fue una mezcla de tres compuestos de los cuales probablemente podrían ser: Bikaverin (9); estigmastan-3,5,22 trien (10); estigmastan-3,5 dien (11) (tR= 36.25), según la base de datos Wiley 7n.l en CG/EM.
Del extracto en acetato de etilo - hojas se obtuvo el compuesto identificado como fitol acetato (12) de la fracción AcOEt HF18-M11, el cual ha sido aislado en las especies
Lagascea mollis y Leucosidea serícea, este sería el primer reporte del compuesto para
Erythrina ulei.
A partir del extracto de metanol hojas se obtuvieron 236.8 y 226.1 mg de dos fracciones alcaloideas en pH 7 y pH 11 respectivamente, los alcaloides aún no se han podido separar e identificar.
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RECOMENDACIONES
Buscar otras técnicas que sean de mayor selectividad, como TLC preparativas, que permitan separar con mayor eficiencia los elementos presentes en las mezclas obtenidas. Con el propósito de determinar todas las propiedades de un compuesto deberían realizarse pruebas de actividad biológica.
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BIBLIOGRAFÍA
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41
42
Espectro Nro 1. Espectro de CG de la fracción alcaloidea en pH 7, se muestran los 10
tiempos de retención detectados, tR = 6.93, 17.21, 17.57, 18.46, 25.09, 25.74, 25.85,
26.04, 26.25, 27.71 min.
Espectro Nro 2. Espectro de RMN 1H de la fracción alcaloidea en pH 7 del extracto
43
Espectro Nro 3. Espectro de CG de la fracción alcaloidea en pH 11, se muestran los 9
tiempos de retención detectados, tR = 15.60, 17.19, 19.07, 19.81, 20.76, 20.84, 21.53,
26.25, 27.70 min.
Espectro Nro 4. Espectro de RMN 1H de la fracción alcaloidea en pH 11 del extracto
44
Espectro Nro 5. Espectro de CG de la fracción AcOEtFF4, del extracto de acetato de etilo de flores, se muestran los 8 tiempos de
45
Espectro Nro 6A. Espectro de masas correspondiente al compuesto identificado como
Tricosano con un tR= 21.12 min, de la fracción AcOEtFF4
Espectro Nro 6B. Espectro de masas del compuesto identificado como Tricosano con el
46
Espectro Nro 7A. Espectro de masas correspondiente al compuesto identificado como
Tetracosano con un tR= 21.95 min, de la fracción AcOEtFF4
Espectro Nro 7B. Espectro de masas del compuesto identificado como Tetracosano con
47
Espectro Nro 8A. Espectro de masas correspondiente al compuesto identificado como
Pentacosano con un tR= 22.75 min, de la fracción AcOEtFF4
Espectro Nro 8B. Espectro de masas del compuesto identificado como Pentacosano con
48
Espectro Nro 9A. Espectro de masas correspondiente al compuesto identificado como
Hexacosano con un tR= 23.52 min, de la fracción AcOEtFF4
Espectro Nro 9B. Espectro de masas del compuesto identificado como Hexacosano con
49
Espectro Nro 10A. Espectro de masas correspondiente al compuesto identificado como
Heptacosano con un tR= 24.27 min, de la fracción AcOEtFF4
Espectro Nro 10B. Espectro de masas de la base de datos Wiley 7n.l del compuesto
50
Espectro Nro 11A. Espectro de masas correspondiente al compuesto identificado como
Octacosano con un tR= 25.11 min, de la fracción AcOEtFF4.
Espectro Nro 11B. Espectro de masas de la base de datos Wiley 7n.l del compuesto
51
Espectro Nro 12A. Espectro de masas correspondiente al compuesto identificado como
Nonacosano con un tR= 26.12 min, de la fracción AcOEtFF4.
Espectro Nro 12B. Espectro de masas de la base de datos Wiley 7n.l del compuesto
52
Espectro Nro 13A. Espectro de masas correspondiente al compuesto identificado como
Eicosano con un tR= 28.89 min, de la fracción AcOEtFF4.
Espectro Nro 13B. Espectro de masas de la base de datos Wiley 7n.l del compuesto
53
Espectro Nro 14. Espectro de GC de la fracción AcOEtFF13, del extracto de acetato de
etilo de flores, se muestran los 3 tiempos de retención detectados: 33.71, 34.42 y 36.25 min.
Espectro Nro 15. Espectro de masas correspondiente al compuesto identificado como
54
Espectro Nro 16. Espectro de masas correspondiente al compuesto identificado como
estigmastan – 3,5,22, trien con un tR= 34.42 min, de la fracción AcOEtFF13
Espectro Nro 17. Espectro de masas correspondiente al compuesto identificado como
55
Espectro Nro 18. Espectro de CG de la fracción AcOEtHFM18-11, del extracto de acetato
de etilo de hojas, se muestran los 5 tiempos de retención detectados, tR = 20.25, 21.21,
33.32, 34.01, 35.75 min.
Espectro Nro 19. Espectro de masas del compuesto identificado como fitol acetato de la
56
Espectro Nro 19-1. Espectro de masas del compuesto identificado como fitol acetato de
57
58