Detection of Seasonal Influenza H1N1 and H3N2 Viruses using RT-PCR Assay during 2009 Flu Pandemic in Golestan Province

(1)

دًص ُربع

ذؽرا یعبٌؽربک ،یصَلَیثٍزکیه

،یکؽشد ُذکؾًاد

ىازیا ،ىبگزگ ،ىبشغلگ یکؽشد مَلػ ُبگؾًاد

یئازبت ىبجیلع

،یکؽشد ُذکؾًاد ،یعبٌؽ طٍزیٍ ربیدبشعا ُبگؾًاد

مَلػ ىازیا ،ىبگزگ ،ىبشغلگ یکؽشد

دازه ةبَّلادبع ی

،یعبٌؽ طٍزیٍ دبشعا ،یکؽشد ُذکؾًاد

مَلػ ُبگؾًاد

ىازیا ،ىبگزگ ،ىبشغلگ یکؽشد

یحَتف ِوطبف

اشًلاَفًآ ربقیقحس شکزه ،یعبٌؽ طٍزیٍ ربیدبشعا

ىازیا ،ىازْس ،ىازیا رَشعبد َشیشغیًا

دیٍبج ِوعبً

کؾًاد ،یصَلَیثٍزکیه ذؽرا یعبٌؽربک ،یکؽشد ُذ

یرٍسبب دَعغه

،یکؽشد ُذکؾًاد ،یّبگؾیبهسآ مَلػ طبٌؽربک

یدوحه یجبح ىبغحا

،یصَلَیثٍزکیه طبٌؽربک ،یکؽشد ُذکؾًاد

ُبگؾًاد

ىازیا ،ىبگزگ ،ىبشغلگ یکؽشد مَلػ

یوئبق زیها

،یعبٌؽ طٍزیٍ ربیدبشعا ،یکؽشد ُذکؾًاد

ُبگؾًاد

ىازیا ،ىبگزگ ،ىبشغلگ یکؽشد مَلػ

:لَئغه ُدٌغیًَ یوئبق زیها

:کیًٍزتکلا تغپ

ghaem -amir@yahoo.com

:يفلت

4421651 -0171

:طردآ

،ىبشغلگ یکؽشد مَلػ ُبگؾًاد،یکؽشد ُذکؾًاد

ىازیا ،ىبگزگ

:تفبیرد 1 / 8 / 22

:یًبیبپ ؼیازیٍ 11

/ 12 / 22

:ػزیذپ 11 / 12 / 22

ُدیکچ ٌِیهس :فدّ ٍ یاشًلاَفًآ رَْظ

A ذیذخ H1N1 سا لبقشًا ییبًاَس ِک یًاَیح أؾٌه بث

،ذؽبث ِشؽاد ار ىبغًا ِث ىبغًا لهاَػ سا یکی

رد یًازگً دبدیا بث ِغثار

یزیگ ِوّ ىآ

ُذؽ

زعا ذًَؽ یه زؾشٌه بّ ىبغًا ىبیه یلصف ِک ییاشًلاَفًآ یبّ طٍزیٍ ،زضبح لبح رد .

یاشًلاَفًآ طٍزیٍ A

ٍ ِػَودهزیس یبّ

H1N1,H3N2 طٍزیٍ شیً ٍ

یاشًلاَفًآ B

یه

ییبعبٌؽ ِؼلبغه يیا سا فذّ .ذٌؽبث ِػَودهزیس

H3N2 ذیذخ عًَ ٍ H1N1

)یلصف( سا

لبع رد اشًلاَفًآ یزیگ ِوّ ىبهس رد اشًلاَفًآ ِث کَکؾه ىاربویث 1388

ىبشغلگ ىبشعا دَث

.

یعرزب ػٍر :

داذؼس ،یفیصَس ِؼلبغه يیا رد 153

ًَِوً ربحؽزس ىاربویث سا یغفٌس

لبع رد اشًلاَفًآ یزیگ ِوّ يیح رد یغفٌس دبح نئلاػ بث 1388

ىبشغلگ ىبشعا ذؽ ِشفزگ

.

زس ؼٌکاٍ ا ظً یبّ ًَِوً یٍر زث طَکؼه سبشذیزک RNA

ُذؽ جازخشعا یعٍزیٍ ،

مبدًا

ییبعبٌؽ رَظٌه ِث سازویلد ُزیدًس ؼٌکاٍ .زفزگ ِػَودهزیس

یبّ H1N1 ٍ یلصف H3N2 بث

ربک ِث یصبصشخا یبّ زویازد یزیگ CDC

زفزگ ررَص .

بّ ِتفبی : ىاربویث ظعَشه يع ِؼلبغه يیا رد 59

/ 16 دَث لبع ِک 1 / 45 ذصرد بًْآ ىس ٍ

9 / 54 ذصرد ذًدَث دزه ىاربویث يیث رد . 13

زفً ( 49 / 8 ًآ )% بث بْ ِػَودهزیس H1N1

ٍ یلصف

25 زفً ( 33 / 16 بث )% ِػَوده زیس H3N2

اشًلاَفًآ سا A

ذًدَث ُذؽ ُدَلآ .

:یزیگ ِجیتً بث زًَفػ ىاشیه

ِػَودهزیس یبّ

H1N1 ٍ یلصف H3N2 ىبشعا رد

زجغً ىآ ىاشیه یلٍ ذؽبث یه ىازیا رد ُذؽ مبدًا ربؼلبغه زیبع بث ِثبؾه ،ىبشغلگ زیبع ِث

زشوک بیًد قعبٌه زعا

.

یبّ ُصاٍ :یدیلک

اشًلاَفًآ H1N1

،

H3N2

،

RT-PCR ىبشعا،

ىبشغلگ

یاراد ِبتر یولع – یؾٍّضپ

سا ىَیغیوک مَلع تبیزؾً

یکؽشپ رَؾک

اشًلاَفًآ یبّ طٍزیٍ ییبعبٌؽ H1N1

ٍ یلصف H3N2

ِب ػٍر RT-PCR اشًلاَفًآ یزیگ ِوّ رد

ىبتغلگ ىبتعا رد (

لبع 1388 )

:ِلبقه طردآ

ذًص ،ط یئازجس ،ع دازه ،ع ی یحَشف ،ف ذیٍبخ ى ، یرٍسبث ،م یذوحه یخبح ،ا

یوئبق ا

"

اشًلاَفًآ یبّ طٍزیٍ ییبعبٌؽ

H1N1

ٍ یلصف

H3N2

ِث ػٍر

RT-PCR

ىبشغلگ ىبشعا رد اشًلاَفًآ یزیگ ِوّ رد (

لبع 1388 )

"

ىبشغثبس،یّبگؾیبهسآ مَلػ ِلده 1393

،

ُربوؽ(نشؾّ ُرٍد 2

:) 27 -32

ُرٍد ،یّبگؾیبهسآ مَلع ِلجه نتؾّ

ُربوؽ( 1 ) ربْب 23

ُرٍد ،یّبگؾیبهسآ مَلع ِلجه نتؾّ

ُربوؽ( 1 ) ربْب 23 یقیقحت

ُربوؽ(نتؾّ ُرٍد ،یّبگؾیبهسآ مَلع ِلجه 2

ىبتغببت ) 23

مَلع ِلجه ُربوؽ(نتؾّ ُرٍد ،یّبگؾیبهسآ 2

ىبتغببت ) 23 ُربوؽ(نتؾّ ُرٍد ،یّبگؾیبهسآ مَلع ِلجه

2 ىبتغببت ) 23

(2)

ِهدقه

زؽاذْث یلصا لکؾه کی اشًلاَفًآ طٍزیٍ زًَفػ

ِلبع ِوّ ٍ زعا یًبْخ تجع تلغا

ُبه رد ییبّ یهذیدا

فیع بث اشًلاَفًآ طٍزیٍ زًَفػ .دَؽ یه ىبشغهس یبّ

ػ ىٍذث زًَفػ سا یٌیلبث نئلاػ سا یؼیعٍ یغفٌس زهلا

ه ــ یلابث تس ذًٌب 38

رد ٍ ِغغػ بی ٍ دازگ یشًبع ِخ

ٍ ذیذؽ ضراَػ بس )اشًلاَفًآ ِجؽ یربویث (ِفزع ُذیچید

بیزشکبث ِیًَبث یبّ زًَفػ یی

(ذؽبث یه زیغشه 1

زظً ِث .)

یٌیلبث یربویث رذؽ ِک ذعر یه طٍزیٍ ی ِیَع ِث

اشًلاَفًآ رَضح ٍ دزف يع ٍ یٌویا زیؼقَه ، لهاَػ

اس یربویث بث ُازوّ

لهاَػ رازییغس غیحه ٍ بهزع ذًٌبه ی

قیزع سا اشًلاَفًآ طٍزیٍ .دراد یگشغث ةَلغهبً ِیَْس

ُرٍد سا ذؼث .ذٌک یه اذید لبقشًا یغفٌس ربحؽزس زیخبس

1 -3 یغفٌس یبّ ًَِوً فلشخه عاًَا سا بّ طٍزیٍ ، ُسٍر

ّ ًَِوً .ذٌؽبث یه یسبعاذخ لثبق یغفٌس نشغیع یب

یًبقَف زغؽ ذًٌبه ، ظگًربفٍسبً یَؽ

( NPW ) بی

ظگًربفٍسبً ُزیذعآ

(

NPA

)

حاَع ،یٌیث حاَع ،

َلگ

(

TS

)

زفبث ،یا ِؽازس ىٍرد حاَع ، زغؽ ٍ بّ

یَؽ

بث ىاربویث رد طٍزیٍ ییبعبٌؽ یازث رلاَئَلآَؾًٍزث

دَؽ یه ِیصَس یغفٌس زًَفػ (

2 .) اشًلاَفًآ یبّ طٍزیٍ

بث ذًٌاَس یه ٍ ذٌشغّ ُذیزیٍَغکیهَسرٍا ُداًَبخ یبضػا

رازییغس ِث ِخَس يیئسٍزد َئلکًَ رد یًص یشًآ

(

NP

)

ٍ

ظکیزسبه يیئسٍزد

(

M

)

عًَ ِع ِث A

،

B

،

C یذٌث ِقجع

خیس بث طبجسرا رد کیهذًبد یبّاشًلاَفًآ زثکا .ذًَؽ A

یاشًلاَفًآ یبّ طٍزیٍ .ذٌؽبث یه A

زث ذًٌاَس یه زشؾیث

يیٌیسَلگبوّ يیث کیًص یشًآ یبّ رٍبفس طبعا (

HA ) ٍ

ً ــ ساذیٌیهآرَ

(

NA

)

یلگ ـــ ِث یحغع يیئسٍزدَک زیس

ِػَوده ىٌَک بس .ذًَؽ یذٌث ِقجع ییبّ

16

(

HA

)

ٍ 9

(

NA

)

یاشًلاَفًآ یبّ طٍزیٍ سا A

ُذؽ ییبعبٌؽ

(ذًا 3 .) ِع ِػَودهزیس اشًلاَفًآ طٍزیٍ یلصا

A

( H1N1,H1N2

و H3N2

) ییبعبٌؽ فلشخه یبّرَؾک رد

ًَ يیٌچوّ ،زعا ُذؽ ییارآ

زیبع یکیشًص ِػَودهزیس

بّ

یً ـ ىبکها ش ث یه زیذد ـ .ذؽب د یٍ ،زضبح لبح ر ـ

ّ طٍز ــ یب یاشًلاَفًآ

یلصف رد ِک ذًَؽ یه زؾشٌه بّ ىبغًا طٍزیٍ

یاشًلاَفًآ A

ٍ ِػَودهزیس یبّ

H1N1,H3N2

شیً ٍ

یاشًلاَفًآ طٍزیٍ B

ذٌشغّ زخاٍا سا . لبع

2003 عَیؽ

ِػَودهزیس ربیغث

اس یربویث H5N1

فًآ طٍزیٍ ـ

اشًلاَ A

ىبگذًزد

(

HPAI

)

ُذؽ ػراشگ زعا

یبّ ؽزه ِک

ىآ لبجًد ِث ٍ بیعآ رد ار یگًبخ رد

یًَفػ بقیزفآ ٍ بدٍرا

يیا بث ىبغًا یبّ زًَفػ ،يیا زث ٍُلاػ .دزک ِػَوده زیس

.زعا ُذؽ ُداد صیخؾس یا ُذٌیاشفا رَع ِث لبع رد

2009 اشًلاَفًآ طٍزیٍ سا یذیذخ عًَ A

ىبغًا

(

H1N1 )

(دزک اذید لبقشًا یًبْخ رَع ِث ٍ ذؽ زّبظ 4

.) ىبهسبع

یًبْخ زؽاذْث

(

WHO

)

348 درَه زًَفػ ًبغًا ذییبس ی

یلابث گزه ىاشیه بث ار طٍزیٍ يیا بث ُذؽ 60

ذصرد

(دزک ػراشگ 6،5

اشًلاَفًآ طٍزیٍ یبّ مًَص .) A

ٍ B سا

8 ِؼغق RNA ِک یفٌه یا ِشؽر کس 10

-11 يیئسٍزد

،ذٌٌک یه ذک ار یسبع ذًٌبوّ ٍ زًَفػ یازث یرٍزض

(زعا ُذؽ لیکؾس 7

.) RNA یفذّ ىاٌَػ ِث کیهًَص

ظعَس ىَیعبکیفیلذهآ یازث PCR

ٍ لَوؼه

(

RT-PCR

)

ه ـ س ی ــ ه ذًاَ ــ عا درَ ــ رازق ُدبفش ِک ییبّ زویازد .دزیگ

ی ُذؽ زظبفح ربیغث ىص سا M

تلغا ،ذًا ُذؽ قشؾه

مبوس ییبعبٌؽ یازث ِػَوده زیس

اشًلاَفًآ یبّ A

درَه

رازییغس لوحشه طٍزیٍ مًَص .دزیگ یه رازق ُدبفشعا

لهبؽ بٌْس ًِ ِک دَؽ یه فلشخه یبّ مشیًبکه بث مٍاذه

ٍ یًص یجیسزسًَ ِکلث ،زعا طٍزیٍ یا ِغقً ىَیعبسَه

ىبیه یًص یجیکزسًَ ِػَوده زیس

یٍ فلشخه یبّ ار طٍز

ؽ شیً ـ خ يیا .دَؽ یه لهب ـ

صَص ی ِث زدٌه کیصَلَیث رب

ٍ دَؽ یه بّ رذه یع اشًلاَفًآ طٍزیٍ عٌَس ؼیاشفا

ِیَع ییبعبٌؽ ،یّبگؾیبهسآ صیخؾس رد ار یسلاکؾه

لزشٌک ٍ یزیگؾید ٍ يغکاٍ ذیلَس یازث تخشٌه طٍزیٍ

(ذٌک یه دبدیا یربویث يیا 8

-10 ِؼلبغه يیا سا فذّ .)

عاًَا یعرزث س

ِػَوده زی طٍزیٍ یبّ

A

اشًاَلفًآ ( H1N1,H3N2

) رد ىبشغلگ ىبشعا ِقغٌه حغع رد

ذؽبث یه اشًلاَفًآ عَیؽ یبّ ُبه .

ىبتغببت) 23

(3)

یعرزب ػٍر

ِؼلبغه يیا رد 153

یغفٌس ربحؽزس ًَِوً ا

زف ا د

کَکؾه یغفٌس یربویث ِث

ِک ىبشعا فلشخه یبّ زْؽ سا

ىبشغلگ ُبگؾًاد یعبٌؽ طٍزیٍ ُبگؾیبهسآ ِث مَلػ

ُذؽ ُداد عبخرا ىبشغلگ یکؽشد ذًدَث

رازق یعرزث درَه ،

.ذٌشفزگ نئلاػ دَخٍ ِؼلبغه يیا ِث ىاربویث دٍرٍ ربیؼه

ظعَس ُذؽ ذیئبس اشًلاَفًآ ِث کَکؾه یغفٌس دبح

.دَث صصخشه کؽشد بّ ًَِوً یهبوس سا

RNA جازخشعا

ِث یربدس زیک سا ُدبفشعا بث ُذیدزگ cDNA

لیذجس

یدزگ ـ عا .ذ ــ ش عا جازخ ــ ً ذی ــ ئلکَ ــ کی

(

RNA

)

سا μl 200

ؽ یراد ِگً یغفٌس یبّ ًَِوً سا ـــ

ه رد ُذ ــ ح ــ ظی

ًا ــ یربدس زیک ظعَس یعٍزیٍ لبقش high Pure Viral

Nucleic Acid Kit Roche)

، قجع زث ٍ )ىبولآ

زیبًْ رد ٍ ذؽ مبدًا ِلحزه ِث ِلحزه زیک لوؼلارَشعد μl 50 سا RNA رد ٍ جازخشعا یعٍزیٍ یبٌْه یبهد

80

یازث .ذؽ یراد ِگً یذؼث لحازه یازث طَیغلع ِخرد

گآ رد رلاَصحه ،جازخشعا سا ىبٌیوعا ــ

سرب 1 ذصرد

شکلا ــ زظلغ .ذًذؽ سرَفٍز RNA

ِث ُذؽ جازخشعا

ک ـ و ـ عد ک ـ گش ـ عا ُب ـذ ـ ک ش فٍزش ـ هَسَ ـش ـ س یز ـ ؼ ـ .ذیدزگ يیی

ع ـٌ ـش ـ ش cDNA ثـ

شعا ب ـ ف ـــ یک سا ُدب ـ

ز

سـ د ـ یرب (

RevertAid FirstStrand cDNA(Synthesis Kit

قجع زث ٍ عد

ش ربکرَ ىآ گ ربک ِث بث ی

یز زویازد Random

hexamer دًا

ــ سرَفٍزشکلا سا ذؼث قیقحس يیا رد .ذؽ مب

یبّ ًَِوً cDNA

ٍ ُذؽ ِشخبع يییؼس

ظعَس بّ ىآ زظلغ

ُبگشعد عا ذ ک زشهَسَفٍزش ،

یٍر زث cDNA ُذؽ جازخشعا یبّ

یبّ ِػَودهزیس يییؼس رَظٌه ِث H1N1

ٍ H3N2

بث ا سا ُدبفشع

ِک يیٌیسَلگبوّ ِؼغق ِث طَثزه یصبصشخا یبّ زویازد

یربویث لزشٌک شکزه ظعَس

(

CDC

)

زعا ُذؽ یحازع

لٍذخ( 1 ) ، PCR زغقه ةآ سا ػٍر يیا رد .ذؽ ِشؽاذگ

ًَِوً سا ٍ یفٌه لزشٌک ىاٌَػ ِث لیزشعا cDNA

سا ُذؽ ِیْس

.ذؽ ُدبفشعا زجثه لزشٌک ىاٌَػ ِث ىازیا رَشعبد َشیشغیًا

زیس ربک ػٍر طبعا زث سازویلد یا ُزیدًس ؼٌکاٍ مبدًا

.ذؽ رد ِیلٍا ىَیعارَسبًد 94

رذه ِث دازگ یشًبع ِخرد 3

ظذعٍ ِقیقد 30

ِخزچ رد ىَیعارَسبًد ررَص ِث 94

ِخرد

رذه ِث دازگ یشًبع 1

رد زویازد لبصساٍ ِقیقد 58

ِخرد

رد زویازد ػزشغگٍ ِقیقد 72

ِخرد

ذیدزگ مبدًا ِیًبث .

ػزشغگ ىبیبد رد

رد ییبًْ 72 رذه ِث دازگ یشًبع ِخرد 5

ِقیقد مبدًا .ذؽ

لَصحه PCR

سربگآ لص رد 2

یاراد ذصرد مَیذیسا

زث ٍ ذؽ سرَفٍزشکلا ذیبه ق ٍ

ـ ىص ربؼغ bp

163 ٍ bp 211 ِث

س تیسز یازث ِػَوده زیس یبّ

H1N1

ٍ H3N2

ذیدزگ َدشغخ .

لکؽ 1 يییعت ٍ ییبعبٌؽ ِعَوجه زیس

H1N1

اشًلاَفًآ طٍزیٍ A

طعَت RT-PCR

لٍا کّبچ : زکربه bpDNA 100 ًَِوً مَع کّبچ ،یفٌه لزتٌک مٍد کّبچ ،

تبثه لزتٌک مربْچ کّبچ ،یفٌه H1N1

لکؽ 2 يییعت ٍ ییبعبٌؽ ِعَوجه زیس

H3N2

اشًلاَفًآ طٍزیٍ A

طعَت

RT-PCR پچ توع سا لٍا کّبچ :

زکربه bpDNA 100 لزتٌک مٍد کّبچ ،

تبثه لزتٌک مَع کّبچ ،یفٌه H3N2

ًَِوً مربْچ کّبچ، دًص ىاربکوّ ٍ

/

22

(4)

بّ ِتفبی

ِؼلبغه يیا رد ظعَشه يع ىاربویث 59 / 16 لبع سا .دَث

یغفٌس زًَفػ ِث لاشجه ىاربویث 1

/ 45 ذصرد ٍ زکذه 9 / 54

ذصرد رد دازفا .ذًدَث ثًؤه 5 یٌع ٍُزگ 0 بس 10 ،لبع 11 بس 20 ٍ لبع 21 بس 30 ٍ لبع 31 بس 40 ٍ لبع 41 بس 65 لبع

.ذًذؽ یذٌث ِقجع ىاربویث يیث رد

39 يیث یٌع ٍُزگ رد درَه

0 بس 10 (لبع 7 / 25 ،)% 70 يیث یٌع ٍُزگدرَه 11 بس 20 لبع (ذٌشؽاد 1 / 46 ،)% 11 يیث يع شیً درَه 21 بس 30 (لبع 2 / 7 ،)% 9 یٌع ٍُزگ رد شیً درَه 31

بس 40 ( لبع 9 / 5 ٍ )% 9 (درَه 9 / 5 یٌع ٍُزگ رد )% 41

بس 65 لبع ذٌشؽاد رازق

لٍذخ( 2 ). ث مبدًا سا ذؼ لَصحه سرَفٍزشکلا

PCR یازث

يییؼس ِػَوده زیس یبّ

H1N1

ٍ H3N2

ِک داد ىبؾً حیبشً سا ىبیه 153 ربویث 13 ( 49 / 8 ٪ ) درَه خیس یاشًلاَفًآ ِث لاشجه A

ٍ ِػَوده زیس H1N1

ٍ ذٌؽبث یه 25 (ربویث 33 / 16 ٪ یً ) ـ ش

جه ـ ث لاش ـ فًآ ِ ـ ًلاَ ـ س یاش ــ خی A ٍ یس ـ ِػَوده ز H3N2

یه

ذٌؽبث لٍذخ( 1 .) رد ىذث درد ٍ کؾخ ِفزع 16

(ربویث 13 رد کؾخ ِفزع ٍ تس ،)% 16

(ربویث 13 ٍ تس ، )%

رد ىذث درد 5

(ربویث 1 / 4 رد کؾخ ِفزع ،)% 4 (ربویث 3 / 3 )%

(ربویث کی رد ىذث درد ، 8

/ 0 رد ییبٌْس ِث تس ٍ )% 2 ربویث ( 6 / 1 .ذؽ ُذّبؾه )%

ثحب

سا ِک داد ىبؾً زضبح ِؼلبغه ىبیه

153 یغفٌس ًَِوً

،ُدَلآ 13 ( 49 / 8 بث ربویث )% ِػَوده زیس

H1N1

ٍ یلصف

25 ( 33 / 16 بث شیً )% ِػَوده زیس H3N2

اشًلاَفًآ سا A ٍ 12 (ربویث 8 / 7 بث )% H1N1

.ذًدَث ُذؽ ُدَلآ کیهذًبد شیَدس

بّ ىصَسبد زعرد ییبعبٌؽ بث بّ کیسَیث یشًآ زعردبً

ذّاَخ ؼیاشفا ار ىبهرد زیثبس زها يیا ٍ ذؽ ذّاَخ دٍذحه

ِػَوده اشًلاَفًآ طٍزیٍ فلشخه یبّ

A ػٍر ِث یبّ ؽ ـٌ ـ عب ـ یب ـ ع ی ـ یز ـ س ٍ غ ـ يییؼ ِػَوده زیس (ذؽبث یه سبیً

12 .) ػٍر

PCR ار یلجق یصیخؾس یبّ کیٌکس یبّ زیدٍذحه

حیبشً ِث غیزع یثبیشعد ٍ زیصبصشخا ٍ زیعبغح ؼیاشفا بث

یغفٌس یبّ زًَفػ ییبعبٌؽ یازث يیازثبٌث ٍ ُدزک لح

(دٍر ربک ِث ًِبگذٌچ 13

ػٍر .) PCR یازث غیعٍ رَع ِث

طٍزیٍ ییبعبٌؽ یساشیْدس ٍ داَه دَؽ یه ُدبفشعا اشًلاَفًآ

س يیا یازث ِک بّ رَؾک سا یربیغث رد ،ذًٍر یه ربک ِث زغ

.ذؽبث یه طزشعد رد یلٍ

یبّ ىص رد ىَیعبسَه ىاشیه HA

ٍ NA اشًلاَفًآ طٍزیٍ سا بس زعا سبیً يیازثبٌث ،ذؽبث یه لابث

يییؼس رَظٌه ِث ِک یزویازد یبّ یلاَس ِػَوده زیس

یبّ

(ذًَؽ سٍر ِث ،ذًَؽ یه ُدبفشعا یصبخ 14

ِک ییبدًآ سا .)

ا رد ِک یصبصشخا یبّ زویازد سا ِؼلبغه يی CDC

دبٌْؾید

ؼدٌع زیبع ِث زجغً یشیشه کی ُذؽ ُدبفشعا ،زعا ُدزک

زعا ُذؽ نّازف بّ .

ِؼلبغه حیبشً بث زضبح ِؼلبغه حیبشً

Boonsuk ّ ٍ

ـ س رد ىاربکو ـ ذٌلیب داد ىبؾً ِک 85 / 22 ذصرد سا دازفا ِث لاشجه ِػَوده زیس H1N1

ٍ ِث 57 / 28 ذصرد زیس ِػَوده H3N2

ذًدَث ( 15 ) ، زضبح ِؼلبغه حیبشً بث ِک

.دراد یًاَخوّ Choi

ٍد یزیگ ربک ِث بث ِک ىاربکوّ ٍ

ػٍر multiplex RT-PCR ِک ذًداد ىبؾً

6 / 55 ذصرد ٍ 6 / 38 ذصرد بث تیسزس ِث دازفا ِػَوده زیس

یبّ H1N1

ٍ

H3N2

(ذًدَث ُذؽ ُدَلآ 12

شیً ٍ ) Deng عَیؽ ىاربکوّ ٍ

19 / 74 بث ىاربویث ذصرد ِػَوده زیس

H1N1

ٍ 80 / 25 ذصرد ِػَوده زیس H3N2

ذًا ُدزک ػراشگ لابث ربؼلبغه حیبشً ِک

دراد رزیبغه ِؼلبغه يیا حیبشً بث (

16 .) ٍ یذعا ِؼلبغه

زضبح ِؼلبغه حیبشً بث رزیبغه رد ىاربکوّ یٍر زث

100 ربویث

ػٍر یزیگ ربک ِث بث ِؼلبغه زحس (RT-PCR Multiplex)

ِک داد ىبؾً 7

ذصرد بث ىاربویث سا ِػَوده زیس

H1N1

سا

یاشًلاَفًآ A

ىاربویث سا کی چیّ ٍ ذًدَث ُذؽ ُدَلآ زیس

ِػَوده H3N2

(ذًداذً ىبؾً 14

.)

زیس

ِعَوجه زویازپ (5'>3')یلاَت ظًزفر H1h‐678Fw CACCCCAGAAATAGCCAAAA National Influenza Center, Institut Pasteur, Paris.

H1N1 H1h‐840Rv TCCTGATCCAAAGCCTCTAC National Influenza Center, Institut Pasteur, Paris

H3h‐177Fw GAGCTGGTTCAGAGTTCCTC National Influenza Center, Institut Pasteur, Paris

H3N2 H3h‐388Rv GTGACCTAAGGGAGGCATAATC National Influenza Center, Institut Pasteur, Paris

لٍدج 1 -یازب سبیً درَه یبّ زویازپ یبّ یلاَت RT-PCR یازب ِعَوجهزیس يییعت یبّ H1N1 ٍ H3N2 رد اشًلاَفًآ ىبتغلگ ىبتعا یغفٌت ىاربویب

(5)

یزیگ ِجیتً

ه ـی ـ ػ ىاش ـ ف ـ ًَ ـ ث ز ـ ب یس ـ ه ز ـ د ـ و ـ ػَ ـ ِ ّ ـ یب H1N1

فـ ص ـ ٍ یل H3N2

عا رد ـش ـ گ ىب ـل ـ شغ ـ ه ،ىب ـ ؾ ـ ثب ـ ث ِ ـ ع ب ـ یب ـ ز

ه ــ لبغ ــ ؼ ـ ًا رب ــ د ـ ؽ مب ـ یا رد ُذ ـ ه ىاز ـ ث ی ــ ؽب ــ لٍ ذ ــ ی

ه شـ ً ىآ ىاشی ــ غ ـج ـ ث ز ـ ع ِ ـ یب ـ ه ز ـٌ ـ عب ـ ًد ق ـ .ذؽبث یه زشوک بی

viruses in China in 1993-94. J Gen Virol. 1995; 76(Pt8): 2009–2014.

10. Xu X, Lindstrom SE, Shaw MW, Smith CB, Hall

HE, Mungall BA, et al. Reassortment and evolution of

current human influenza A and B viruses. Virus Res. 2004; 103(1-2): 55-60.

11. Boonsuk P, Payungporn S, Chieochansin T,

Samransamruajkit R, Amonsin A, et al. Detection of

Influenza Virus Types A and B and Type A Subtypes (H1, H3, and H5) by Multiplex Polymerase Chain Reaction. Tohoku J Exp Med. 2008; 215(3): 247-255.

12. Choi YK, Goyal SM, Kang SW, Farnham MW, Joo HS. Detection and subtyping of swine influenza H1N1, H1N2 and H3N2 viruses in clinical samples using two multiplex RT-PCR assays. Journal of Virological Methods. 2002; 102(1-2): 53–59.

13. Bellau-Pujol S, Vabret A, Legrand L, Dina J,

Gouarin S, Petitjean-Lecherbonnier J, et al. Development

of three multiplex RT-PCR assays for the detection of 12 respiratory RNA viruses. J Virol Methods. 2005; 126(1-2): 53-63.

14. Asadi M. Detection and subtyping of influenza

A(H1N1,H3N2) BY Multiplex RT PCR in West Azerbaijan Province of Iran. 4th_{congress of laboratory}

and clinic, North America. 2011 .

15. Saberfar E, Najafi A, Goodarzi Z, Lashini H. Multiplex Reverse Transcription-PCR Assay for Detection of Type A Influenza Virus plus Differentiation of Avian H7 and H9 Hemagglutinin Subtypes in Iran. Iranian J Publ Health. 2009; 38(4): 29-34.

16. Deng YM, Caldwell N, Barr IG. Rapid Detection and

Subtyping of Human Influenza A Viruses and Reassortants by Pyrosequencing. PLoS ONE. 2011; 6(8): e23400.

یًاد ردق ٍ زکؾت

بث ىبگجخً یله دبیٌث یلبه یبّ زیبوح بث ِؼلبغه يیا

ِهبً ُربوؽ 1326

/ 15 خیربس 25 / 5 / 1389 ربجشػا رَظٌه ِث

ٍ ىاَخ ىازگؾٍّضد ُضیٍ ،ىبگجخً یله دبیٌث یؾٍّضد

ىبشغلگ یکؽشد مَلػ ُبگؾًاد زیبوحشیً .ذیعر مبدًا

References

1. Nicholson KG, Wood JM, Zambon M. Influenza. The

Lancet. 2003; 362: 1733-1745.

2. Wentworth DE, Thompson BL, Xu X, Regnery HL,

Cooley AJ, McGregor MW. An influenza A (H1N1)

virus closely related to swine influenza virus responsible for a fatal case of human influenza. J Virol. 1994; 68(4): 2051–2058.

3. Fouchier RA, Munster V, Wallensten A, Bestebroer

TM, Herfst S, Smith D, et al. Characterization of a novel

influ-enza A virus hemagglutinin subtype (H16) obtained from black-headed gulls. J Virol. 2005; 79(5): 2814-2822.

4. Dawood FS, Jain S, Finelli L, et al. Emergence of a

novel swine-origin influenza A (H1N1) virus in humans. N Engl J Med. 2009; 360(25): 2605–2615.

5. Wentworth DE, McGregor MW, Macklin MD,

Neumann V, Hinshaw VS. Transmission of swine

influenza virus to humans after exposure to experimentally infection pigs. J Infect Dis. 1997; 175(1): 7-15

.

6. Schorr E, Wentworth D, Hinshaw VS. Use of

polymerase chain reaction to detect swine influenza virus in nasal swab specimens. Am J Vet Res. 1994; 55(7): 952–956.

7. Maines TR, Szretter KJ, Perrone L, Belser JA, Bright

RA, Zeng H, et al. Pathogenesis of emerging avian

influenza viruses in mammals and the host innate immune response. Immunol Rev. 2008; 225: 68-84. 8. Lin YP, Shu LL, Wright S, Bean WJ, Sharp GB,

Shortridge KF, et al. Analysis of the influenza virus gene

pool of avian species from southern China. Virology. 1994; 198(2): 557–566.

9. Guo Y, Wang M, Zheng GS, Li WK, Kawaoka Y,

Webster RG. Seroepidemiological and molecular

evidence for the presence of two H3N8 equine influenza

دًص ىاربکوّ ٍ

/

31

(6)

Abstract

Background and Objective: The emergence of a novel H1N1influenza A virus of animal origin with transmissibility from human to human poses pandemic concern. Current subtypes of Seasonal influenza A viruses spread in human are influenza A H1N1 influenza A H3N2 and influenza type B viruses. The aim of this study was to determine current strains of the H3N2 and new H1N1 subtypes of influenza A virus from patients suspected influenza infection in 2009 flu pandemicin Golestan province, Iran.

Material and Methods: In this descriptive study, respiratory samples (n = 153) from patients with acute respiratory symptoms were collected in 2009 flu pandemic applied during 2009 pandemic influenza in Golestan province. After reverse transcription of extracted viral RNA, PCR was developed for both H1N1and H3N2subtypes using CDC specific primers.

Results: The mean age of patients was 16.59. Of them 45.1% were male. Thirteen (8.49%) were infected with seasonal influenza H1N1 and 25(16.33%) with seasonal H3N2influenza.

Conclusion: The rate of infection with seasonal H1N1and H3N2is similar to other studies reported from Iran, but lower than the rate reported from other parts of the world.

Key Words: Influenza A Virus, H1N1, H3N2, RT-PCR, Iran Zhand, S. (MSc)

MSc of Microbiology, School of Medicine, Golestan University of Medical

Sciences, Gorgan, Iran

Tabaraei, A. (PhD)

Assistant Professor of Virology, School of

Medicine,Golestan University of Medical

Moradi A. (PhD) Professor of Virology, School of

Medicine,Golestan University of Medical

Fotoohi, F. (PhD)

Assistant Professor of Virology, Influenza Research Center, Pasteur Institute of Iran,

Tehran, Iran

Javid, N. ( MSc) MSc of Microbiology, School of Medicine, Golestan University of Medical

Bazoori, M. (BSc)

BSc of Medical Laboratory,School of

Medicine, Golestan University of Medical Sciences, Gorgan, Iran

Haji Mohammadi, E. (BSc) BSc of Microbiology, School of Medicine, Golestan University of Medical

Ghaemi, A. (PhD)

Assistant professor of Virology, School of Medicine, Golestan University of Medical

Corresponding Author: Ghaemi, A.

Email:ghaem_amir@yahoo.com

Received: 23 Oct 2013 Revised: 7 Mar 2014 Accepted: 8 Mar 2014

Detection of Seasonal Influenza H1N1 and H3N2 Viruses using RT-PCR Assay during 2009 Flu Pandemic in Golestan Province

This paper should be cited as: Zhand S, Tabaraei A, Fotoohi F, Javid N, Bazoori M, Haji Mohammadi E, Ghaemi, A. [Detection of

Seasonal Influenza H1N1 and H3N2 Viruses using RT-PCR Assay during 2009 Flu Pandemic in Golestan Province ]. MLJ. 2014;

8(2):27-32 [Article in Persian]