• No results found

Antioxidative effect of the N-stearoylethanolamine in the heart tissue and blood plasma of rats under doxorubicin treatment

N/A
N/A
Protected

Academic year: 2020

Share "Antioxidative effect of the N-stearoylethanolamine in the heart tissue and blood plasma of rats under doxorubicin treatment"

Copied!
6
0
0

Loading.... (view fulltext now)

Full text

(1)

ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2011, т. 83, № 6 86

УДК 557.115.3: 616-006.6

АнтиоксидАнтні ефекти N-стеАроїлетАнолАміну у ткАнині серця тА плАзмі крові щурів

зА умов введення доксорубіцину

Є. А. ҐУдзь, Н. М. ГУлА, Т. О. ХМель, Т. М. ГОрідькО, А. Г. Бердишев

інститут біохімії ім. О. в. Палладіна НАН України, київ; e-mail: ngula@biochem.kiev.ua

досліджували вплив N-стеароїлетаноламіну (NSE) на порушення антиоксидантного хисту у тканині серця і плазмі крові щурів, спричинені введенням доксорубіцину. Показано, що за-стосування доксорубіцину призводить до зменшення активності ензимів антиоксидантного захисту клітин тканини серця, зокрема супероксиддисмутази і глутатіонпероксидази. введення NSE сприяє частковій нормалізації показників активності цих ензимів. встановлено, що доксорубіцин призводить до підвищення рівня сечовини та креатиніну у плазмі крові піддослідних тварин. введення NSE не впливає на рівень креатиніну та нормалізує рівень сечовини.

к л ю ч о в і с л о в а: N-стеароїлетаноламін, доксорубіцин, супероксиддисмутаза, глутатіон-пероксидаза, каталаза, креатинін, сечовина.

Д

оксорубіцин (антибіотик антра-циклінового ряду) – один із найефективніших протипухлинних препаратів, яким лікують рак молочної зало-зи, лімфоми, саркоми м’яких тканин [1], але має обмежене застосування, в першу чергу че-рез високу кардіотоксичність [2].

Введення доксорубіцину призводить до підвищення експресії індуцибельної NO-синтази в міокарді [3], що, в свою чер-гу, спричиняє гіперпродукцію NO. Оксид азоту вступає в реакцію з супероксидним аніоном кисню та утворює пероксинітрит – потужний окисник, здатний окислювати та нітрозилювати протеїни, окислювати ліпіди [4].

Доксорубіцин зумовлює оксидативний стрес у пухлині і неуражених тканинах, нега-тивно впливає на функцію мітохондріального дихального ланцюга, що призводить до загибелі клітин шляхом апоптозу [5–7].

У дослідах на щурах було показано, що доксорубіцин знижує у серці рівень високо-енергетичних субстратів, зокрема аденозин-трифосфату та креатинфосфату. Низькі дози антибіотика внаслідок тривалого застосуван-ня мають більш виражений негативний ефект, ніж одноразове застосування еквівалентної дози [8].

Під час лікування доксорубіцином інколи спостерігаються симптоми нефротоксичності. Механізми ниркової недостатності спричинені введенням цитостатиків, включають в себе

пошкодження судин та структури нирки, що призводить до гемолітичного та уремічного синдромів. Нефротоксичність цитостатиків виявляється у підвищенні рівня креатиніну в сироватці крові [9], яке відбувається внаслідок зменшення рівня клубочкової фільтрації в нирках [10].

У зв’язку з високою токсичністю проти-пухлинних препаратів дуже важливим є по-шук сполук, які б могли зменшувати побічні ефекти хіміотерапії.

Нашу увагу привернули ендокана-біноїди – похідні етаноламіну та жирної кислоти. Відомо, що довголанцюгові N-ацилетаноламіни (NAE) та їхні попередни-ки – N-ацилфосфатидилетаноламіни (NAPE), накопичуються у тканинах живих організмів за патологічних станів. Пізніше було по-казано накопичення NAE в дегенеруючій ембріональній тканині курчат [11].

Існує багато даних про те, що під час роз-витку неоплазми в організмі, ендоканабіноїди відіграють захисну роль у неуражених пух-линою тканинах. Агоністи канабіноїдних рецепторів першого типу (СВ1) гальмують проліферацію ракових пухлин, ангіогенез та процес метастазування [12]. Відомі дані і про участь рецепторів другого типу (СВ2) в опосередковуванні антипухлинних ефектів в організмі [13–16].

(2)

ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2011, т. 83, № 6 87 попереджає низку токсичних проявів, що

ви-никають у разі застосування цисплатину як хіміотерапевтичного агента [17].

Метою нашої роботи було дослідити біохімічні порушення у тканині сер-ця і плазмі крові, спричинені введенням доксорубіцину та здатність довголанцюгового N-стеароїлетаноламіну запобігати розвитку токсичних ефектів цього цитостатика.

матеріали і методи

Всі тварини, що були використані в дослідах, утримувались в стандартних для кожного виду клітках, воду та збалансова-ний гранульовазбалансова-ний раціон тварини одер-жували ad libitum. Експерименти проводи-ли у відповідності до правил етичної комісії Інституту біохімії НАНУ.

Досліди проводили на щурах-самцях з масою тіла 150–200 г. тварин було поділено на 5 груп. «Інтактні» – група інтактних тва-рин (n = 5). «NSE» – група тварин, що одер-жували NSE per os у дозі 50 мг/кг протягом 7 діб (n = 5), починаючи з 6-ї доби експери-менту. «Dox» – група тварин, яким робили три ін’єкції доксорубіцину внутрішньоочеревинно в дозі 2,5 мг/кг з інтервалом введення че-рез добу (n = 6), починаючи з 6-ї доби екс-перименту. «Dox + NSE» – група тварин, що отримували NSE per os у дозі 50 мг/кг та три ін’єкції доксорубіцину внутрішньоочеревинно у дозі 2,5 мг/кг з інтервалом введення через добу (n = 7), починаючи з 6-ї доби експери-менту. «NSE + Dox» – група тварин, яким вводили NSE per os у дозі 50 мг/кг протягом 7 діб, починаючи з 7-ї доби тваринам

вводи-ли внутрішньоочеревинно доксорубіцин у дозі 2,5 мг/кг з інтервалом введення через добу (три ін’єкції) (n = 7). На 12-ту добу тварин усіх груп виводили з експерименту, відповідно до пра-вил поводження з лабораторними тваринами. Для досліджень відбирали кров та серце тварин.

тканину серця гомогенізували у фізіологічному розчині у співвідношенні: ва-гова частина розчину / вава-гова частина ткани-ни (9 : 1). Внаслідок цього одержували 10%-й гомогенат. Визначення протеїну проводили за методом Лоурі [18].

У гомогенаті серця вимірювали активність каталази [19], глутатіонпероксидази [20], супероксиддисмутази [21]. У плазмі крові піддослідних тварин досліджували рівень сечовини за допомогою набору реактивів для визначення концентрації сечовини в біологічних рідинах (Філісіт – Діагностика, Україна) та креатиніну [22]. Рівень тбК-реагуючих продуктів визначали за кількістю малонового діальдегіду (МДА) за методом [23], NSE одержували як описано в [24]. Пре-парат доксорубіцину виробництва компанії «Артеріум» (Україна).

Статистичну обробку проводили у програмі Excel, вірогідність результатів оцінювали за t-критерієм Стьюдента.

результати та обговорення

було показано (рис. 1), що застосування доксорубіцину призводить до значного (більше ніж у 2 рази порівняно із групою інтактних тварин) зменшення активності супероксид-дисмутази у тканині серця піддослідних щурів. Введення NSE інтактним тваринам

рис. 1. Активність супероксиддисмутази у тканині серця піддослідних щурів (M ± m, n = 5–7). * зміни вірогідні відносно значень у групі «інтактні», # вірогідні відносно значень у групі «NSE», @ вірогідні відносно значень у групі «Dox», р 0,05

0 100 200 300 400 500 600 700

Інтактні Інтактні + NSE Dox Dox + NSE NSE + Dox

ум

.

од

./

хв

на

м

г

бі

лк

у

Рис. 1 Активністьсупероксиддисмутазивтканинісерцяпіддосліднихщурів

* - вірогідно по відношенню до групи «Інтактні», # - вірогідно по відношенню до групи «Інтактні+NSE»,

@ - вірогідно по відношенню до групи «Dox»

0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200

Інтактні Інтактні +

NSE Dox Dox + NSE NSE + Dox

нм

ол

ь

/

хв

на

м

г

бі

лк

у

Рис

. 2

Активність

глутатіонпероксидази

в

тканині

серця

піддослідних

щурів

* - вірогідно по відношенню до групи «Інтактні»,

# - вірогідно по відношенню до групи «Інтактні+NSE»,

@ - вірогідно по відношенню до групи «Dox»

* #

@

* #

*

@

Ум

. о

д.

в н

а 1 м

г п

ро

те

їн

у

700

Інтактні

600

500

400

300

200

100

0

(3)

ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2011, т. 83, № 6 88

також дещо знижує активність супероксид-дисмутази. У разі одночасного введення NSE і доксорубіцину активність супероксиддисму-тази не відрізнялась від такої у групи тварин «NSE». Попереднє введення NSE не впливало на активність супероксиддисмутази тканин серця щурів. Одержані результати свідчать на користь того, що введення NSE одночасно з доксорубіцином попереджає інгібуючий ефект доксорубіцину на активність супероксиддис-мутази серця щурів.

Введення доксорубіцину (рис. 2) при-зводить до зменшення (на 25% порівняно із групою інтактних тварин) активності глутатіонпероксидази у тканині серця. Од-ночасне введення NSE і доксорубіцину повністю запобігає падінню активності глутатіонпероксидази, спричиненому доксо-рубіцином. завчасне введення NSE піддослід-ним тваринам не змінює вплив доксорубіцину на активність глутатіонпероксидази тканин

рис. 2. Активність глутатіонпероксидази у тканині серця піддослідних щурів (M ± m, n = 5–7). * зміни вірогідні відносно значень у групі «інтактні», # вірогідні відносно значень у групі «NSE», @ вірогідні відносно значень у групі «Dox», р 0,05

рис. 3. Активність каталази у тканині серця піддослідних щурів (M ± m, n = 5–7). * зміни вірогідні відносно значень у групі «інтактні», (M ± m, n = 5–7), р 0,05

0 100 200 300 400 500 600 700

Інтактні Інтактні + NSE Dox Dox + NSE NSE + Dox

ум

.

од

./

хв

на

м

г

бі

лк

у

Рис. 1 Активність супероксиддисмутази в тканині серця піддослідних щурів * - вірогідно по відношенню до групи «Інтактні»,

# - вірогідно по відношенню до групи «Інтактні+NSE», @ - вірогідно по відношенню до групи «Dox»

0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200

Інтактні Інтактні +

NSE Dox Dox + NSE NSE + Dox

нм

ол

ь

/

хв

на

м

г

бі

лк

у

Рис. 2 Активність глутатіонпероксидази в тканині серця піддослідних

щурів

* - вірогідно по відношенню до групи «Інтактні»,

# - вірогідно по відношенню до групи «Інтактні+NSE»,

@ - вірогідно по відношенню до групи «Dox»

* #

@

* #

*

@

нм

ол

ь/

хв н

а 1 м

г п

ро

те

їн

у

200

Інтактні 180

160 140 120 100 80

0

Інтактні+NSE Dox Dox + NSE NSE + Dox 60

40 20

серця. Ці дані свідчать про здатність NSE зменшувати негативний ефект доксорубіцину, внаслідок запобігання падінню активності ензимів антиоксидантного захисту – супер-оксиддисмутази та глутатіонпероксидази у тканині серця щурів.

також було досліджено вплив NSE на активність каталази. Введення NSE твари-нам не впливало на активність каталази у тканині серця (рис. 3). Під дією доксорубіцину активність ензиму збільшувалась у два рази порівняно із групою інтактних тварин. Введення NSE тваринам, що одержували доксорубіцин, не призводило до зменшення активності каталази, що ймовірно, є компенса-торною відповіддю на зменшення активності супероксиддисмутази та глутатіонпероксидази під дією доксорубіцину.

Неочікувані дані були одержані нами при визначенні продуктів пероксидного окислення ліпідів, тбК-реагуючих сполук

0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5

Інтактні Інтактні +

NSE Dox Dox + NSEодночасно NSE Спочаткупотім

Dox

мкм

/

хв

/

мг

білку

Рис

. 3

Активність

каталази

в

тканині

серця

піддослідних

щурів

* -

вірогідно

по

відношенню

до

групи

«

Інтактні

»

0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 70,00 80,00 90,00 100,00

Інтактні Інтактні + NSE Dox Dox + NSE NSE + Dox

М

ДА

нм

оль

/

г

тк

ан

и

Рис

. 4

Рівень

пероксидного

окислення

ліпідів

(

ПОЛ

)

в

тканині

серця

піддослідних

щурів

* * *

м

км

ол

ь/

хв н

а 1 м

г п

ро

те

їн

у 4,0

Інтактні

3,0

2,5

2,0

1,5 1,0

0,5

0,0

Інтактні+NSE Dox Dox + NSE

одночасно Спочатку NSEпотім Dox

4,5

3,5

(4)

ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2011, т. 83, № 6 89 (рис. 4). Виявилося, що триразове

введен-ня доксорубіцину не змінювало рівень тбК-реагуючих продуктів у міокарді. Ці сполуки відображають, з однієї сторони, активність ут-ворення пероксинітриту, а з іншої – активність систем антиоксидантного захисту. Це дозволяє зробити припущення, що, не дивлячись на пригнічення активності супероксиддисмутази (рис. 1) та глутатіонпероксидази (рис. 2), ви-сока активність каталази у щурів, які одержу-вали доксорубіцин, захищає тканину міокарда від пошкодження і накопичення тбК- реагую-чих сполук.

Для того, щоб оцінити побічні ефек-ти доксорубіцину на нирки ми визначали вміст сечовини та креатиніну у плазмі крові. з даних літератури відомо, що накопичення креатиніну у плазмі крові може свідчити про ниркову недостатність внаслідок зниження клубочкової фільтрації в нирках.

рис. 4. рівень пероксидного окислення ліпідів у тканині серця піддослідних щурів (M ± m, n = 5–7)

рис. 5. вміст креатиніну в плазмі крові піддослідних щурів (M ± m, n = 5–7). * зміни вірогідні відносно значень у групі «інтактні», р 0,05

Введення доксорубіцину піддослідним щурам (рис. 5) призводить до зростання рівня креатиніну у плазмі крові по відношенню до показників групи інтактних тварин на 18%. Вве-дення NSE в цій серії експериментів не вплива-ло на ефекти спричинені доксорубіцином. Це свідчить про те, що, ймовірно, NSE не впливає на рівень клубочкової фільтрації креатиніну.

Показано також (рис. 6), що застосування доксорубіцину призводить до зростання рівня сечовини у плазмі крові тварин порівняно із групою інтактних тварин.

Підвищення рівня сечовини у плазмі крові може вказувати на порушення клубочкової фільтрації. Водночас потрібно враховувати той факт, що рівень сечовини може підвищуватися за рахунок катаболізму протеїну.

Поєднане введення NSE та доксорубіцину нормалізує рівень сечовини до показників гру-пи інтактних тварин, що свідчить про зни-0.0

0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0

Інтактні Інтактні +

NSE Dox Dox + NSEодночасно NSE Спочаткупотім

Dox

мкм

/

хв

/

мг

білку

Рис. 3 Активність каталази в тканині серця піддослідних щурів

* - вірогідно по відношенню до групи «Інтактні»

0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 70,00 80,00 90,00 100,00

Інтактні Інтактні + NSE Dox Dox + NSE NSE + Dox

М

ДА

нм

оль

/

г

тк

ан

и

Рис. 4

Рівень

пероксидного

окислення

ліпідів (ПОЛ)

в

тканині

серця

піддослідних щурів

* * *

М

Д

А

, н

м

ол

ь/

г т

ка

ни

ни

90

Інтактні

70

60

50

40

30

20

10

Інтактні+NSE Dox Dox + NSE NSE + Dox

100

80

0

0 50 100 150 200 250

Інтактні Інтактні +

NSE Dox Dox + NSE NSE + Dox

м

км

ол

ь

/

лі

тр

Рис

. 5

Вміст

креатиніну

в

плазмі

крові

піддослідних

щурів

* -

вірогідно

по

відношенню

до

групи

«

Інтактні

»

0 1 2 3 4 5 6 7 8

Інтактні Інтактні +

NSE Dox Dox + NSE NSE + Dox

м

м

ол

ь

/

лі

тр

Рис

. 6

Вміст

сечовини

в

плазмі

крові

піддослідних

щурів

* -

вірогідно

по

відношенню

до

групи

«

Інтактні

»,

@ -

вірогідно

по

відношенню

до

групи

«Dox»

*

@

*

*

*

Кр

еа

тинін

, мк

м

ол

ь/

л

200

Інтактні 100

50

Інтактні+NSE Dox Dox + NSE NSE + Dox 250

150

0

(5)

ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2011, т. 83, № 6 90

рис. 6. вміст сечовини у плазмі крові піддослідних щурів (M ± m, n = 5–7). * зміни вірогідні відносно значень у групі «інтактні», @ вірогідні відносно значень у групі «Dox», р 0,05

ження токсичного впливу доксорубіцину на функцію нирок у присутності NSE. Попереднє введення NSE не впливає на рівень сечовини у плазмі крові піддослідних щурів.

таким чином, результати проведе-них нами експериментів свідчать, що доксорубіцин знижує активність двох ензимів антиоксидантного захисту тканин серця, глутатіонпероксидази та супероксиддисмутази. NSE в комплексі з доксорубіцином запобігає падінню активності цих ензимів. У той же час, NSE не знижує активність каталази у тканині серця щурів, підвищення якої спри-чинено доксорубіцином. Ці дані свідчать про здатність NSE нормалізувати функції антиок-сидантних систем серця (супероксиддисмутази та глутатіонпероксидази), при цьому не змен-шуючи активність каталази. Дослідження про-демонстрували підвищення рівня сечовини та креатиніну у плазмі крові щурів при введенні доксорубіцину, що можливо, відбувається внаслідок зниження клубочкової фільтрації у нирках цих кінцевих продуктів обміну. Введення NSE дозволяє істотно знизити концентрацію сечовини у плазмі крові. Однак вміст креатиніну при цьому не знижується. Ймовірно, NSE частково відновлює функцію ниркових клубочків, які були ушкоджені доксорубіцином.

0 50 100 150 200 250

Інтактні Інтактні +

NSE Dox Dox + NSE NSE + Dox

м

км

ол

ь

/

лі

тр

Рис. 5 Вміст креатиніну в плазмі крові піддослідних щурів

* - вірогідно по відношенню до групи «Інтактні»

0 1 2 3 4 5 6 7 8

Інтактні Інтактні +

NSE Dox Dox + NSE NSE + Dox

м

м

ол

ь

/

лі

тр

Рис. 6 Вміст сечовини в плазмі крові піддослідних щурів

* - вірогідно по відношенню до групи «Інтактні»,

@ - вірогідно по відношенню до групи «Dox»

*

@

*

*

*

С

еч

ови

на

, м

м

оль

7

Інтактні

5

4

Інтактні+NSE Dox Dox + NSE NSE + Dox

8

6

0

1

2 3

АнтиоксидАнтные эффекты N-стеАроилэтАнолАминА

в ткАни сердцА и плАзме крови крыс в условиях введения доксорубицинА

е. А. Гудзь, Н. М. Гулая, Т. А. Хмель, Т. Н. Горидько, А. Г. Бердышев

институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, Киев;

e-mail: ngula@biochem.kiev.ua

исследовали влияние N-стеароил-этаноламина (NSE) на нарушение антиок-сидантной защиты в ткани сердца и плазме крови крыс, вызванное введением цина. Показано, что применение доксоруби-цина приводит к уменьшению активности эн-зимов антиоксидантной защиты клеток ткани сердца, в частности супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы. Введение NSE способ-ствует частичной нормализации показателей активности этих энзимов. Установлено, что доксорубицин приводит к повышению уровня мочевины и креатинина в плазме крови под-опытных животных. Введение NSE не влияет на уровень креатинина и нормализует уровень мочевины.

К л ю ч е в ы е с л о в а: N-стеароилэтанол-амин, доксорубицин, супероксиддисмутаза, глутатионпероксидаза, каталаза, креатинин, мочевина.

(6)

ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2011, т. 83, № 6 91

ANtioxidAtive effect of the N-steAroylethANolAmiNe iN the heArt tissue ANd blood plAsmA of rAts uNder doxorubiciN treAtmeNt

I. A. Goudz, N. M. Gula, T. O. Khmel, T. M. Goridko, A. G. Berdyshev

Palladin Institute of Biochemistry, National Academy of Sciences of Ukraine, Kyiv;

e-mail: ngula@biochem.kiev.ua S u m m a r y

The influence of N-stearoylethanolamine on the alterated antioxidant enzyme activity in the heart tissue and blood plasma of rats under the doxorubicin treatment was investigated.

It was shown that doxorubicin administration caused the decrease of antioxidant enzymes ac-tivity (superoxide dismutase and glutathione per-oxidase) in the heart tissue. Administration of the NSE promoted the partial normalization of these enzymes activity. It was shown that doxorubicin treatment caused the increase of the urea and cre-atinine level in the blood plasma of experimental animals.

The NSE administration normalized the level of the urea and did not affect creatinine level.

K e y w o r d s: N-stearoylethanolamine, dox-orubicin, superoxide dismutase, glutathione per-oxidase, catalase, creatinine, urea.

1. Young R. C., Ozols R. F., Myers C. E. // N. Engl. J. Med. – 1981. – 305. – P. 139–153. 2. Takemura G., Fujiwara H. // Prog. Cardiovasc.

Dis. –2007. – 49, N 2. – P. 330–352.

3. Mukhopadhyay P., Rajesh M., Bátkai S. et al. // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. – 2009. –

296, N 5. – Н.1466–Н.1483.

4. Pacher P., Beckman J. S., Liaudet L. // Physiol. Rev. – 2007. – 87, N 1. – P. 315–424.

5. Bai P., Mabley J. G., Liaudet L. et al. // Oncol. Rep. – 2004. – 11, N 2. – P. 505–508.

6. Myers C. E., McGuire W. P., Liss R. H. et al. // Science. – 1977. – 197. – P. 165–167.

7. Tokarska-Schlattner M., Zaugg M., Zuppinger C. et al. // J. Mol. Cell Cardiol. – 2006. – 41, N 3. – P. 389–405.

8. Nicolay K., Aue W. P., Seelig J. et al. // Biochim. Biophys. Acta. – 1987. – 929, N1. – P. 5–13. 9. Kintzel P. E. // Drug. Saf. –2001. – 24, N 1. –

P. 19–38.

10. Reinhold S. W., Reichle A., Leiminger S. et al. // M.C. Res. Notes. – 2011. – 4, N 2. – P. 4–24. 11. Kara J., Borovicka M., Liebl V. et al. //

Neoplasma. – 1986. – 33, N 2. – P. 187–205. 12. Casanova M.L., Blazguez C., Martinez-Palacio J.

et al. // J. Clin. Invest. – 2003. – 111, N 1.– P. 43–50.

13. Vignot S., Besse B., de la Motte Rouge T. et al. // Bull Cancer. – 2006. – 93, N 2. – P. 163–170. 14. Flygare J., Gustafsson K., Kimby E. et al. //

FEBS Lett. – 2005. – 579, N 30.– P. 6885– 6889.

15. Sarnataro D., Grimaldi C., Pisanti S. et al. // Ibid. – N 28.– P. 6343–6349.

16. Nithipatikom K., Endsley M.P., Isbell M.A. et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. –2005. –

332, N 4.– P. 1028–1033.

17. Гула Н. М., Хмель Т. O., клімашевський в. М. та ін. // Укр. біохім. журн. – 2006. – 78, № 1. – С. 135–142.

18. Lowry O. H., Rosenbrough N. J., Farr A. L. et al. // J. Biol. Chem. –1951. – 193, N 1. – P. 265–275.

19. королюк М. А., иванова и. Г., Майорова и. Г. // Лаб. дело. – 1988. – № 1. – С. 16–18. 20. Переслегина и. А. // Лаб. дело. – 1989. –

№ 11. – С. 20–23.

21. Чвари С., Андел Т., штренгер Я. // Лаб. дело. – 1991. – № 10. – С. 9–13.

22. тиц Н. А. Энциклопедия клинических лабораторных тестов. – 1997. – С. 277–178. 23. владимиров Ю. А., Арчаков А. и. / Перекисное

окисление липидов в биологических мембранах. – М.: Наука, 1972. – C. 252. 24. Пат. 77278 UA 6МПК А61К 31/13. Препарат

для пригнічення алергічних реакцій та неспецифічного запалення, спосіб його одержання і спосіб його використання. / Гула Н. М., Комісаренко С. В., Чумак А. А. та ін. / Опубл. 15.11.2006. бюл. №11.

References

Related documents

Причини, що призвели до масового переселення, — це пошуки кращої долі доведених до відчаю селян, які, незважаючи на важку працю, втратили

[r]

This study focuses on the use of mobile technology (branded mobile applications, branded mobile social media experiences etc.) by brands to educate and inform their

The single central bank implements the optimal discretionary monetary policy by setting the union interest rate.The cost channel makes monetary policy less e¤ective in

UBS believe that the ‘New Normal’ economic environment of relatively low growth means that the ability to differentiate between secular and cyclical growth opportunities becomes

The analysis reported in the paper, on these simulated nancial return series, suggests that the use of the Full BEKK model will underestimate conditional variances in the left-hand

Once the driver has been loaded, the host will send the device a unique logical address that will be used for all future communications.. It will then again request the

Now, minimum energy efficiency requirements for energy efficient solutions (the Ecodesign Directive) are also specified for manufacturers of system and combi boilers, water