• No results found

Design of Lentiviral Vector of Apoptin and Investigating its Cytotoxic Effect on Reh Acute Lymphoblastic Leukemia Cells

N/A
N/A
Protected

Academic year: 2021

Share "Design of Lentiviral Vector of Apoptin and Investigating its Cytotoxic Effect on Reh Acute Lymphoblastic Leukemia Cells"

Copied!
6
0
0

Loading.... (view fulltext now)

Full text

(1)

ی

قیق

حت

هلا

قم

لباب یکشزپ مولع هاگشناد هلجم هرود ،متسیب ةرامش 5 ، هبیدرا تش 3197 هحفص ، 51 -84

یاه لولس رد نآ کیسکوتوتیاس ریثات و نیتپوپآ نژ هدننک نایب یسوریو یتنل روتکو یحارط

داح کیتسلابوفنل یمسول

Reh

( ینیدلا مجن ماجنا یلع

c

S

M

)

3

باهو للها حور ،

روپ

(

PhD

)

2

یللاج همطاف ،

(

MD

)

1

اد ،

شاشب دو

(

PhD

)

3 * 3 -هورگ نوخ یسانش و کناب ،نوخ هدکشناد ،یکشزپاریپ هاگشناد مولع یکشزپ دیهش ،یتشهب ،نارهت ناریا 2 -هورگ مولع ،یهاگشیامزآ هدکشناد ،یکشزپاریپ هاگشناد مولع یکشزپ دیهش ،یتشهب ،نارهت ناریا 1 -هاگشناد مولع یکشزپ ،مب ،مب ناریا :تفایرد 24 / 7 / 96 :حلاصا ، 8 / 33 / 96 :شریذپ ، 2 / 32 / 96

هصلاخ

:فده و هقباس تمواقم هب یاهوراد ینامرد یمیش ی یک زا نیرتمهم تلاکشم ینامرد نارامیب ءلاتبم هب یمسول کیتسلابوفنل ( داح Acute lymphoblastic leukemia یم ) دشاب . اقلا ییاناوت لیلد هب نیتپوپآ ء لولس رد زوتپوپآ یصاصتخا یاه یروموت یمیش هب هک یدراوم صوصخ هب ناطرس نامرد رد یریذپان راکنا لیسناتپ ، مک خساپ ینامرد رت م ی ی دراد ،دنهد . ور نیا زا ، رثا هعلاطم نیا رد اقلا ء نایب اقلا رد ار نیتپوپآ ء تسلابوفنل رد یلولس گرم میخدب یاه هدر یلولس Reh رارق یسررب دروم تفرگ . شور و داوم :اه لولس تشک زا دعب ،یبرجت هعلاطم نیا رد یاه Reh یتنل روتکو دورو نازیم )روتساپ وتیتسنا زا هدش هیهت( و لولس ریثکت تردق و کیلوباتم تیلاعف ،یسوری اه ،یرتموتیاسولف زا هدافتسا اب بیترت هب MTT ناپیرت و تعاس رد ولب یاه 28 ، 84 ، 72 و 96 نیتپوپآ نژ نایب نازیم یسررب تهج نینچمه .دش یسررب زا Real time PCR دش هدافتسا . :اه هتفای ناشن شهوژپ نیا زا لصاح جیاتن و یحارط هدنهد یتنل روتکو بسانم تخاس زا شیب هتسناوت هک تسا یسوریو 65 % لولس هدولآ زا سپ نینچمه .دنک هدولآ ار اه لولس ندرک دودح نیتپوپآ نژ نایب نازیم ،روتکو اب اه 31 هدنز دصرد نآ لابند هب و هتفای شیازفا لرتنک هب تبسن ربارب لولس ینام ات نامز هب هتسباو روط هب اه 51 % شهاک ای تف ( 13 / 1 p< .) لولس کیلوباتم تیلاعف رب نیتپوپآ نژ نایب یراهم ریثات هدنهد ناشن ،جیاتن نینچمه یاه Reh ات 15 % دوب ( 13 / 1 p< .) :یریگ هجیتن هک داد ناشن هعلاطم جیاتن لولس یورب یروموت دض تیلاعف یاراد نیتپوپآ نژ نایب یاه Reh یم و هدوب رد شخبدیما ینامرد ناونع هب دناوت ALL هدافتسا ددرگ . :یدیلک یاه هژاو ،نیتپوپآ یتنل روتکو ،داح کیتسلابوفنل یمسول ،سوریو یلولس هدر Reh .  لصاح هلاقم نیا همان نایاپ اقآ دشرا یسانشراک ینیدلا مجن ماجنا یلع ی دشاب یم . * رتکد :هلاقم لوئسم شاشب دواد :سردآ نوخ کناب و یژولوتامه هورگ ،یکشزپاریپ هدکشناد ،یتشهب دیهش یکشزپ مولع هاگشناد ،نارهت :نفلت . 22737518 -123 E-mail:d.bashash@sbmu.ac.ir

همدقم

مغریلع تفرشیپ یاه لباق هجوت ینامرد یط ههد یاه ،ریخا یمسول کیتسلابوفنل داح ( Acute Lymphoblastic Leukemia زونه ) هب ناونع یکی زا نیرترابگرم میخدب ی یاه کیژولوتامه رد رسارس ناهج هتخانش ( دوشیم 2 و 3 .) لولس رد زوتپوپآ یصاصتخا یاقلا ییاناوت لیلد هب نیتپوپآ یاه هب هک یدراوم صوصخ هب ،ناطرس نامرد رد یریذپان راکنا لیسناتپ ،یناطرس راد ،دنهد یم یمک خساپ ینامرد یمیش (د 1 .) یگژیو زا یکی رد هجوت لباق یاه دروم نژ وپآ اقلا رد نآ یصاصتخا درکلمع نیتپ ء لولس رد یلولس گرم یاه ،نولوک ناطرس ،امونلام ،اموکراسوئتسا ،اموتاپه هلمج زا ینوگانوگ یناطرس ،هیر محر هناهد ،تاتسورپ ،هنیس و اقلا رب یریثات هنوگ چیه هک یلاح رد تسا هدعم ء لولس رد زوتپوپآ تسا هدشن شرازگ ندب یعیبط یاه ( 6 -1 .) یناکم نیتپوپآ لمع مس رد زوتپوپآ یصاصتخا یاقلا لمع اما هدشن صخشم لماک روط هب زونه یخرب لولس یناطرس یاه هداد ناشن تسا هدش ( 4 و 7 .) نژ نیتپوپآ زا ینوخ مک سوریو ( ناگدنرپ Chicken Anemia Virus ) .تسا هدش ادج نیا کچوک سوریو وتیاس تارثا داجیا هب رجنم زوتپوپآ داجیا قیرط زا تیسومیت رد کینژوتاپ یاه یم ناگدنرپ نیئتورپ هس سوریو نیا مونژ رد .دوش VP1(51.6kDa) ، VP2(24.0kDa) ، VP3(13.6 kDa) یم دک هک دوش نژ VP1 هدننکدک ؛سوریو دیسپک نیئتورپ VP2 نیئتورپ هدننک دک DPS =

Dual-specificity protein phosphatase لانگیس داجیا ثعاب هک یاه ارب یمهم یم سوریو ریثکت ی دوش VP3 دراد مان نیتپوپآ نامه هک تسا رداق و قلا ثعاب ییاهنت هب ءا لولس زا یرایسب رد یلولس گرم دوش اه ( 1 ) . نژ ینامرد شور یرامیب نامرد رد هک یشقن لیلد هب هزورما هک تسا ینیون و یکیتنژ یاه ناطرس عاونا هتفرگ رارق یسررب و هجوت دروم رایسب ،دراد اه نیا یلصا فده .تسا

(2)

J Babol Univ Med Sci; 20(5); May 2018

89

Design of Lentiviral Vector of Apoptin and Investigating…; A.A. Najmedini, et al

رد ،لولس رد نژ نآ نایب نآ عبت هب و فده لولس هب صاخ نژ کی لاقتنا ،شور تسا ینامرد تارثا داجیا تهج ( 9 سوریو یتنل زا هزورما .) یشور ناونع هب اه نژ لاقتنا یارب یم هدافتسا اه .دوش یتنل سوریو باس زا یکی اه پیات یاه سوریوورتر یاراد و اه RNA دنتسه لیدبت صاخ ییاناوت هک RNA ناشدوخ هب DNA نیا هک دنراد ار یا هتشر ود DNA نابزیم لولس مونژ هب دناوت یم اب ییاهروتکو تخاس تهج رد یگژیو نیا زا .دریگب یاج نآ رد و دوش دراو یتنل یاهروتکو هولاعب .تسا هدش هدافتسا ینامرد یاهدربراک دنناوت یم یسوریو نا زا یا هدرتسگ فیط لولس عاو اب هسیاقم رد هک لاح نیع رد دننک هدولآ ار اه دنراد یرتمک رایسب تیمس ،رگید یسوریو یاهروتکو ( 31 و 9 .) نیا رد ور نیا زا یتنل روتکو هلیسوب نیتپوپآ ندرک دراو اب هعلاطم لولس هب یسوریو یاه یمسول داح کیتسلابوفنل تسلابوفنل رد یلولس گرم یاقلا رد نیتپوپآ رثا اه میخدب ی لس نیلا Reh رارق یسررب دروم تفرگ .

شور و داوم

اه

هدر :یلولس یاه نیا رد یبرجت هعلاطم ، لولس یاه Reh یمسول هدر زا هک یم داح کیتسلابوفنل تشک طیحم رد ،دنشاب RPMI-1640 و لولس یاه HEK293T تشک طیحم رد DMEM یواح 31 % ،یواگ مرس U/ml 311 و نیلیس ینپ g/ml μ 311 یامد رد نیسیام وتپرتسا 17 یتناس هجرد راشف و دارگ ید نبرک دیسکا 5 % .دندش هداد تشک و تخاس یتنل روتکو نویسارتیت :نیتپوپآ نژ هدننک نایب یسوریو تخاس روظنم هب یتنل روتکو دیمسلاپ هس زا یسوریو pCDH ،)نژ هدنهد لاقتنا دیمسلاپ( pMD2G ل روتکو ششوپ تخاس یارب یدیمسلاپ( یتن ،)سوریو psPAX2 نژ یواح( یتنل روتکو دیسپک هدنزاس یاه )یسوریو یم هدافتسا .دوش یتنل روتکو -نیتپوپآ نژ یاراد یسوریو ( LV-GFP-Apoptin ) دیمسلاپ زا pCDNA3.1-GFP-Apoptin طسوت شور Cloning PCR هدش هیهت دیمسلاپ لخاد نیتپوپآ یارب یرمیارپ روظنم نیدب .تسا pCDNA یحارط دش میزنآ یارب شرب هاگیاج ود یواح هک یاه ECORI و BamHI تمس ود رد دوخ دوب ماجنا زا سپ ، PCR نیتپوپآ نژ هب طوبرم زروفورتکلا دناب لژ را دیمسلاپ لخاد هب سپس و هدش جارختسا pCDH لقتنم دش . رد همادا هس ره ( دیمسلاپ pCDH ، psAX2 و PMD2G طسوت ) PolyFect-Transfection-Reagent یلولس هدر لخادب HEK293T رد و لقتنم تعاس رد سوریو همادا یاه 84 ، 72 و 96 تشادرب دش هب زاین سوریو ظیلغت یارب . تدم هب ژویفیرتناسارتلا 1 هدش ظیلغت سوریو نویسارتیت روظنم هب .تسا تعاس نیئتورپ نازیم p24 هزادنا یمک یازیلاا تیک طسوت دادعت هبساحم .دوش یم یریگ ریو ره نتفرگ رظن رد اب زین سو 2111 لوکلم p24 ماجنا سوریو ره یارب یم یتنل روتکو ود ره یارب شور نیا .دوش نژ دقاف و نیتپوپآ نژ یاراد یسوریو ماجنا نیتپوپآ تست هیلک یارب شهوژپ نیا رد و دش زا اه MOI ، 5 .دش هدافتسا :ولب ناپیرت شور هب یلولس شرامش یسررب یارب ردق یسررب ریثکت ت لولس زا اه گنر ناپیرت یزیمآ نیا ساسا .دش هدافتسا )رابوئن ملا( رتموتیاسومه ملا و ولب لولس هک تسا بیترت نیدب شیامزآ ریذپانذوفن گنر دورو هب تبسن هدنز یاه یم لولس هکنآ لاح ،دنشاب یم بذج ار گنر هدرم یاه دادعت شرامش یارب .دنیامن لولس ،هدنز یاه جم زا دعب لولس تروا اب اه LV-GFP-Apoptin رد ، تعاس یاه 28 ، 84 ، 72 و 96 لولس دادعت یرس راهچ ره رد هتفرگن گنر یاه هناخ هدزناش یاه شرامش هناخ( ییات WBC ) .دش هتفرگ نیگنایم و هدش شرامش هزادنا شور هب یلولس کیلوباتم تیلاعف یریگ MTT assay : هب یبایزرا روظنم رثا کیسکوتوتیاس نیتپوپآ نژ نایب رد لولس اه و نییعت ریداقم 50 IC زا شور MTT هدافتسا دش . روظنم نیمه هب دادعت ، 31111 تیلپ کهاچ ره هب لولس 96 هناخ دقاف و یواح یا LV-GFP-Apoptin نامز تدم هب و هفاضا 28 ، 84 ، 72 و 96 روتابوکنا رد تعاس CO2 نامز تدم تشذگ زا سپ .دش هبوکنا راد رظن دروم لولس هب لولحم تیلپ لخاد یاه MTT ( mg/ml 5 ) و دیدرگ هفاضا تدم هب 1 روتابوکنا رد تعاس 17 رود اب تیلپ سپس .تفرگ رارق هجرد g 3111 هب تدم 31 ییور لولحم ندرک یلاخ زا سپ و هدش ژوفیرتناس هقیقد 311 رتیلورکیم DMSO هاگتسد طسوت کهاچ ره یرون بذج .دش هفاضا کهاچ ره هب plate Eliza reader جوم لوط رد 571 .دش تئارق رتمونان جارختسا RNA زتنس و cDNA و Real Time PCR : رامیت زا سپ لولس یاه Reh یتنل روتکو اب تدم هب یسوریو 84 تعاس RNA قبط اهنآ تیک لمعلاروتسد high pure RNA isolation kit (Roche)

جارختسا دیلوت روظنم هب و هدش cDNA دروم زتنس یارب .تفرگ رارق هدافتسا cDNA زا تیک Revertaid first strand cDNA synthesis kit .دش هدافتسا شنکاو نیا ماجنا یارب رظن دروم مجح 21 و تسا رتیلورکیم لولحم تایوتحم تدم هب قوف 5 رد هقیقد 65 ،هجرد 5 رد هقیقد 25 یامد رد تعاس کی و هجرد 82 ن رد و دندش هبوکنا هجرد زتنس شنکاو ،تیاه cDNA اب 5 نویسابوکنا هقیقد رد 71 یم همتاخ هجرد .دبای cDNA یامد رد هدش هیهت 21 -هگن یم یراد .دوش شیامزآ Real-Time PCR هاگتسد رد light-cycler (Roche) رد و مجح 21 شنکاو ره یازا هب .دش ماجنا رتیلورکیم 31 زا رتیلورکیم Syber

premix Ex Taq (Takara) ، 2 زا رتیلورکیم cDNA ، 5 / 1 زا رتیلورکیم اهرمیارپ زا کیره لودج( 3 ) و 7 .دش هدافتسا زائلکون زا یراع بآ رتیلورکیم یامد طیارش یامد رد هیلوا یزاس لاعف هلحرم کی لماش هدافتسا دروم ی 95 هجرد یتناس تدم هب دارگ 11 ،همادا رد و هیناث 81 نویساروتاند یارب لکیس ( 5 رد هیناث 95 یتناس هجرد ( ماوت نشنتسکا/گنیلینآ و )دارگ 21 رد هیناث 61 یتناس هجرد )دارگ یم یسررب دروم بوذ ینحنم ،هدش ریثکت لوصحم تیصاصتخا یسررب یارب .دشاب هخسن دادعت یبسن هبساحم یارب و اهتنا رد .تفرگ رارق mRNA زا هدش ریثکت لومرف ΔΔct -2 .دش هدافتسا لیلحت و هیزجت یرامآ : و ماجنا لقتسم نومزآ هس لکش هب تاشیامزآ یمامت شرازگ ریداقم لکش هب هدش Mean±SD تابساحم یارب نینچمه .دندش دیق شور زا یرامآ T-Test مرن و رازفا SPSS17 و GraphPad Prism7 دش هدافتسا و 15 / 1 p< راد ینعم رظن رد هتفرگ دش . لودج 3 . یاهرمیارپ یلاوت هب راک هتفر رد ومزآ ن Real Time Quantitative RT-PCR .

(3)

51

 هرامش /متسیب هرود ،لباب یکشزپ مولع هاگشناد هلجم 5 / تشهبیدرا 3197 کیسکوتوتیاس ریثات و نیتپوپآ نژ هدننک نایب یسوریو یتنل روتکو یحارط ... ؛ ینیدلا مجن ماجنا یلع ناراکمه و

Apoptin ACTCTATCGCTGTGTGGC TCGCTTACCCTGTACTCG 166

اه هتفای

یسررب نویسارتیت نازیم و روتکو دورو یتنل لولس لخاد هب یسوریو یاه Reh : دورو نازیم LV-GFP-Apoptin هب لولس لخاد یاه Reh پوکسورکیم اب ، لولس نازیم .تفرگ رارق یسررب دروم یرتموتیاسولف و تناسرولف یاه GFP لولس رد تبثم یاه Reh لولس اب هسیاقمرد زا رتمک هک لرتنک یاه 3 دصرد لولس یاراد یاه GFP زا شیب هب ،دندوب تبثم 65 اب جیاتن نیا هک .دیسر دصرد سکع زا هدش هتفرگ یاه لولس زا دعب اه 84 یتنل روتکو اب ههجاوم تعاس یسوریو لولس یلااب نازیم و هتشاد تقباطم نیتپوپآ نژ هدننک نایب یاه GFP هک تبثم یم هدهاشم زبس گنر هب یسوریو یتنل روتکو دورو یلااب دصرد زا ناشن دنوش لکش( دشاب یم 3 .) نیتپوپآ نژ نایب نازیم یسررب : نایب یسررب روظنم هب روتکو دورو زا سپ نیتپوپآ یتنل لولس لخاد هب نیتپوپآ نژ یواح یسوریو یلولس هدر یاه Reh ، رد تعاس 84 و 72 لولس عمج اه یروآ و هدش ،نیتپوپآ یارب RT-PCR .دش ماجنا هک داد ناشن جیاتن ، لولس رد نیتپوپآ نایب هب هدش هدولآ یاه LV-GFP-Apoptin رد 84 دودح تعاس 5 ربارب ( 13 / 1 p≤ رد و ) 72 دودح ات تعاس 9 ( ربارب 113 / 1 p< لکش( تسا هتفای شیازفا ) 2 .) لکش 3 یتنل روتکو دورو نازیم یفیک و یمک یسررب . لولس لخاد هب یسوریو یاه Reh A تناسرولف تیصاخ و یرتموتیاسولف زا روتکو دورو نازیم یمک یسررب تهج ) GFP .دش هدافتسا B فیک یسررب تهج ) لولس نازیم ی یاه GFP پوکسورکیم زا تبثم .دش هدافتسا تنسرولف ترونیا لولس شرامش شهاک ثعاب نامز هب هتسباو نیتپوپآ نژ نایب یاه Reh یم دوش : ریثات نازیم یسررب تهج دورو LV-GFP-Apoptin نویسارفیلورپ یور رب یلولس Reh میدرک هدافتسا ولب ناپیرت تست زا . نآ زا یکاح جیاتن هک تسا لولس رد نیتپوپآ نایب شیازفا یاه Reh زا دعب 84 رد نامز هب هتسباو تعاس تعاس یاه 72 ، 96 شهاک ثعاب ریگمشچ لولس ریثکت نازیم لرتنک هب تبسن اه یم دوش لکش( 1 .) هدنز دصرد یسررب لولس ینام رد هک داد ناشن اه 84 ، 72 و 96 بیترت هب تعاس 71 % ، 62 % ( 13 / 1 p≤ و ) 51 % ( 13 / 1 p≤ لولس ) .دنتسه هدنز اه یتنل روتکو دورو ریثات یسررب تهج همادا رد لولس لخاد هب یسوریو نینچمه اه لولس رد نیتپوپآ نژ نایب ریثات یبایزرا یتنل روتکو ،اه رد نیتپوپآ نژ نودب یسوریو لولس اب ترواجم لولس ریثکت تردق رد یزیچان ریثات اه هدنز دصرد و هتشاد اه ینام ولس ل .درکن یرییغت اه لکش 2 . هسیاقم یتنل روتکو دورو زا دعب نیتپوپآ نژ نایب نژ هدننک نایب یسوریو .نیتپوپآ یاه تعاس رد اه لولس هب روتکو دورو زا دعب نیتپوپآ نژ نایب یسررب تهج 84 و 72 تست Real Time .دش هدهاشم نایب شیازفا و هدش ماجنا رایعم فارحنا و نیگنایم هس زا لصاح جیاتن ( فلتخم یراک نار mean ± SD ) و هبساحم p رگنایب ،**( هدمآ تسد هب 13 / 1 p≤ ، *** 113 / 1 p< نعم رگناشن ) ی .دوب لرتنک هنومن اب هسیاقم رد یرامآ رظن زا جیاتن ندوب راد لکش 1 هدنز دصرد و نویسارفیلورپ رب نیتپوپآ نژ نایب ریثات یسررب . اهلولس ینام Reh . ( فلتخم یراک نار هس زا لصاح جیاتن رایعم فارحنا و نیگنایم mean ± SD و هبساحم ) p value رگنایب ،*( هدمآ تسد هب 15 / 1 p< رگنایب ،** ، 13 / 1 p< زا جیاتن ندوب رادانعم رگناشن ) .دوب لرتنک هنومن اب هسیاقم رد یرامآ رظن لولس رد نیتپوپآ نژ نایب یاه Reh ب نامز هب هتسباو تیلاعف شهاک ثعا یم یلولس کیلوباتم دوش : لولس رد کیلوباتم تیلاعف یسررب روظنم هب یاه Reh لولس ندرک هجاوم زا دعب اه LV-GFP-Apoptin تیلاعف یسررب تهج لولس کیلوباتم تست اه MTT ناشن هدمآ تسدب جیاتن .تفرگ رارق یبایزرا دروم اعف نازیم تسا رداق نیتپوپآ نژ نایب هک داد لولس کیلوباتم تیل یاه Reh ار ثا بیترت نیا هب و دهد شهاک نامز هب هتسباو هدر نیا رد ار دوخ کیسکوتوتیاس ر

(4)

J Babol Univ Med Sci; 20(5); May 2018

53

Design of Lentiviral Vector of Apoptin and Investigating…; A.A. Najmedini, et al

یم لامعا یلولس .دنک لکش رد هک روطنامه 8 تیلاعف نازیم تسا صخشم تعاس رد کیلوباتم یاه 84 و 72 لرتنک هب تبسن 21 % و 24 % رد و تفای شهاک تعاس 96 تیلاعف نازیم زین ات کیلوباتم 15 % تشاد شهاک لرتنک هب تبسن لکش( 8 ) نژ نایب و روتکو دورو ریثات یسررب تهج . GFP تیلاعف یورب هسیاقم هک دش رواجم لولس اب زین نیتپوپآ نژ نودب یسوریو یتنل روتکو کیلوباتم نژ نایب و روتکو زیچان ریثات هدنهد ناشن لرتنک اب نآ ریثات GFP اک رد شه تعاس رد کیلوباتم تیلاعف یاه 84 ، 72 و 96 دشاب یم . لکش 8 یسررب . ترواجم LV-GFP-Apoptin .اهلولس کیلوباتم تیلاعف رب یاه لولس رد نیتپوپآ نژ نایب هک دهد یم ناشن جیاتن Reh شهاک بجوم یاه تعاس رد کیلوباتم تیلاعف 84 ، 72 ، 96 .دوش یم رایعم فارحنا و نیگنایم ( فلتخم یراک نار هس زا لصاح جیاتن mean±SD و هبساحم ) p-value هب رگنایب ،**( هدمآ تسد 13 / 1 p< رد یرامآ رظن زا جیاتن ندوب رادانعم رگناشن ) .دوب لرتنک هنومن اب هسیاقم

یریگ هجیتن و ثحب

هک داد ناشن یسررب نیا زا هدمآ تسدب جیاتن LV-GFP-Apoptin روموت دض تیلاعف یاراد لولس رد ی یاه Reh یم رد نژ نیا نایب و دشاب لولس .تسا یلولس گرم هدننک ءاقلا و یلولس ریثکت عنام یمسول یاه نیدنچ روتکو زا هدافتسا هک دراد دوجو لولس لخاد رد نیئتورپ نایب یارب شور یاه یتنل شور نیرتهب زا یکی یسوریو لولس لخاد هب نژ لاقتنا یارب اه یاه یتیسوفنل لولس عون نیا یلااب تمواقم لیلدب رگید یاهروتکو هب اه جیاتن .تسا زا لصاح یسررب نازیم یلااب تناسرولف GFP بسانم درکلمع زا ناشن LV-GFP-Apoptin هب دورو رد لولس یاه Reh د را د. هتفای اب جیاتن نیا یاه طسوت هک یشهوژپ Jie Jiang آ رد هک هتشاد تقباطم دش ماجنا شناراکمه و ن اوت نیتپوپآ نژ یسوریو یتنل روتکو زا هدافتسا اب ن ا یلااب نازیم دوب هتس لولس ز -نک هدولآ ار ییامولیم یاه (د 33 .) طسوت نیتپوپآ نژ نایب نازیم نیا رب هولاع Real Time PCR هزادنا -یریگ لولس رد نیتپوپآ نژ نایب هک دوب نآ رگناشن جیاتن و دش یاه Reh شیازفا هتشاد یریگمشج .تسا رد نیتپوپآ نژ نایب کیسکوتوتیاس ریثات یسررب روظنم هب لولس یاه Reh یم ناشن جیاتن و هدش ماجنا ولب ناپیرت تست نیتپوپآ هک دنهد نامز هب هتسباو یم اهنت هن ، لولس ریثکت نازیم زا دناوت یاه Reh هکلب ؛دهاکب یم هدنز دصرد دناوت لولس ینام دهد شهاک زین ار اه هکیروطب ءاقب نازیم رد شهاک لولس زا اه 84 رد و عورش تعاس 96 یلبق تاعلاطم .دیسر نازیم رثکادح هب تعاس ناطرس رد نژ نیا نایب کیسکوتیاس ریثات هب زین هدرک هراشا دبک و هنیس یاه .دنا هب یسررب ،هولاع طسوت هتفرگ تروص یاه MTT assay هک داد ناشن زین لولس رد نیتپوپآ نژ تکادسنارت یاه Reh تیلاعف نازیم شهاک هب رجنم یم یلولس کیلوباتم ،ددرگ رد هعلاطم Guelen زین ناراکمه و نیتپوپآ نایب ریثات هدر رد زوتپوپآ ءاقلا رب یلولس یاه 2 -Saos و 3 -HSC دش صخشم ( 32 ریثات .) نژ نایب و یسوریو روتکو دوخ زا یشان نیتپوپآ نژ نایب یراهم GFP و هدوبن تنل روتکو رب یزیچان ریثات نیتپوپآ نودب یسوریو ی ر و هدنز دصرد ی لولس ینام و اه (تسا هتشاد کیلوباتم تیلاعف 6 .) یم ناشن هتشذگ تاقیقحت رد هدمآ تسدب جیاتن ،یلکروط هب روتکو هک دهد -یتنل یاه شور نیرترثوم زا یکی یسوریو یم نژ لاقتنا یارب اه نژ و دشاب ا رد رثوم نژ کی زین نیتپوپآ لولس رد زوتپوپآ ءاقل (تسا یناطرس یاه 36 -31 .) مسیناکم یور رب هتفرگ تروص یکیتنژ و ینیلاب تاعلاطم زنژوتاپ یاه ALL یم ملاعا ریسم هک دننک PI3K/Akt زا شیب رد 41 یمسول دراوم زا دصرد یم لاعف داح کیتسلابوفنل یم ناشن تاقیقحت نیا .دشاب ریسم نیا تیلاعف هک دنهد پ لاقتنا لولس یریثکت لیسناتپ تیوقت ثعاب اهنت هن ،مای یم کیمسول یاه ؛دوش یم زین ینامرد یمیش یاهوراد تبسن تمواقم داجیا رد ییازسب ریثات هکلب .دراذگ یم ناشن هتشذگ تاقیقحت رد هدمآ تسدب جیاتن ریسم هب هتسباو نیتپوپآ هک دهد PI3K/Akt عمجت اب و Akt اقلا ثعاب هتسه رد ء زوتپوپآ لولس رد یناطرس یاه یم دوش ( 34 و 37 لولس رد هک داد ناشن شهوژپ نیا رد ام جیاتن .) هدش قتشم یاه ،داح کیتسلابوفنل یمسول زا Reh ریسم هک ، PI3K/Akt تسا لاعف نآ رد هدنز دصرد شهاک ثعاب لولس ینام یم اه .دوش ه هب نیتپوپآ لاقتنا یگژیو نیم لولس یم کیتسلابوفنل یناطرس یاه وت ریسم یمئاد تیلاعف لیلدب دنا PI3K اقلا ثعاب ء لولس نیا رد یلولس گرم کی ناونع هب نیتپوپآ نیارب هولاع .دوش اه ژ هدننکراهم چیه یسوریو ءاشنم اب ن هدش هتخانش لولس رد یا و درادن یناسنا یاه لولس رد نآ نایب شیازفا هدننک راهم یناربج شیازفا بجوم یناطرس یاه نآ یاه یمن ش دو . یم ناشن هعلاطم نیا زا هدمآ تسدب جیاتن شور نیرتهب زا یکی دهد اه لولس لخاد هب نژ لاقتنا یارب روتکو هب ییلااب تمواقم هک نوخ ناطرس یاه اه .تسا یسوریو یتنل روتکو زا هدافتسا دنراد یتنل روتکو هلیسوب نیتپوپآ نژ لاقتنا زا سپ شهوژپ نیا رد نازیم یسوریو آ نژ نایب شهاک هب رجنم نژ نیا نایب و تفای شیازفا نامز هب هتسباو نیتپوپ هدنز دصرد و ریثکت تردق لولس ینام نایب ریثات یسررب نیا رب هولاع .دش اه تیلاعف شهاک رد نآ شقن هدنهد ناشن یلولس کیلوباتم تیلاعف رب نیتپوپآ نیا نایب زا هدنیآ رد ناوتب دیاش لیلد نیمه هب .تسا کیلوباتم داجیا یارب نژ لولس رد تیساسح یمیش یاهوراد هب تبسن یناطرس یاه .درک هدافتسا ینامرد

رکشت و ریدقت

هلیسونیدب زا تنواعم تاقیقحت و یروانف هاگشناد مولع یکشزپ دیهش یتشهب هب تهج نیمات هجدوب قیقحت و رکشت ددرگ یم ینادردق .

(5)

52

 هرامش /متسیب هرود ،لباب یکشزپ مولع هاگشناد هلجم 5 / تشهبیدرا 3197 کیسکوتوتیاس ریثات و نیتپوپآ نژ هدننک نایب یسوریو یتنل روتکو یحارط ... ؛ ینیدلا مجن ماجنا یلع ناراکمه و

Design of Lentiviral Vector of Apoptin and Investigating its Cytotoxic

Effect on Reh Acute Lymphoblastic Leukemia Cells

A.A. Najmedini (MSc)1, R. Vahabpour (PhD)2, F. Jalali (MD)3, D. Bashash (PhD)1*

1.Department of Hematology and Blood Banking, Faculty of Allied Medical Sciences, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, I.R.Iran.

2.Department of Medical Lab Technology, Faculty of Allied Medical Sciences, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, I.R.Iran.

3.Bam University of Medical Sciences, Bam, I.R.Iran.

J Babol Univ Med Sci; 20(5); May 2018; PP: 48-53

Received: Apr 10th 2018, Revised: Jan 24th 2018, Accepted: Feb 11th 2018.

ABSTRACT

BACKGROUND AND OBJECTIVE: Resistance to chemotherapy drugs is one of the most important treatment problems in patients with acute lymphoblastic leukemia. Apoptin due to its ability to induce apoptosis in tumor cells, has an undeniable potential in cancer treatment, especially those that respond lessly to chemotherapy. Therefore, in this study, the effect of induction of apoptin expression on induction of cell death in reh malignant lymphoblasts was investigated.

METHODS: In this experimental study, after culturing of Reh cells (prepared by the Pasteur Institute), the entry of lentiviral vector, metabolic activity and cell proliferation were measured using flow cytometry, MTT and trypan blue at 24, 48, 72 and 96 hours. Real time PCR was also used to determine the apoptin gene expression.

FINDINGS: The results of this study indicate the design and construction of a suitable lentiviral vector that can infect more than 65% of the cells. Also, after infecting the cells with the vector, the apoptin gene expression rate was increased about 10 times to control, and subsequently, the cell viability decreased by 53% time-dependently (p <0.01) . The results also showed that the inhibitory effect of apoptin gene expression on the metabolic activity of Reh cells was about 35% (p<0.01).

CONCLUSION: The results of the study showed that apoptin gene expression has anti-tumor activity in Reh cells and can be used as a promising therapy in ALL.

KEY WORDS: Apoptin, Lentiviral Vector, Acute Lymphoblastic Leukemia, Reh Cell Li.

Please cite this article as follows:

Najmedini AA, Vahabpour R, Jalali F, Bashash D. Design of Lentiviral Vector of Apoptin and Investigating its Cytotoxic Effect on Reh Acute Lymphoblastic Leukemia Cells. J Babol Univ Med Sci. 2018;20(5):48-53.

*Corresponding Author; D. Bashash (PhD)

Address: Department of Hematology and Blood Banking, Faculty of AlliedMedical Sciences, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran.

Tel: +98 21 22717504 E-mail: d.bashash@sbmu.ac.ir

(6)

J Babol Univ Med Sci; 20(5); May 2018

51

Design of Lentiviral Vector of Apoptin and Investigating…; A.A. Najmedini, et al

References

1.Zhou Y, You MJ, Young KH, Lin P, Lu G, Medeiros LJ, et al. Advances in the molecular pathobiology of B-lymphoblastic leukemia. Hum Pathol. 2012;43(9):1347-62.

2.Fowler NO, McCall D, Chou TC, Holmes JC, Hanenson IB. Electrocardiographic changes and cardiac arrhythmias in patients receiving psychotropic drugs. Am J Cardiol. 1976;37(2):223-30.

3.Los M, Panigrahi S, Rashedi I, Mandal S, Stetefeld J, Essmann F, et al. Apoptin, a tumor-selective killer. Biochimica et biophysica acta. 2009;1793(8):1335-42.

4.Yuan L, Zhang L, Dong X, Zhao H, Li S, Han D, et al. Apoptin selectively induces the apoptosis of tumor cells by suppressing the transcription of HSP70. Tumor Biol. 2013;34(1):577-85.

5.Backendorf C, Noteborn MH. Apoptin towards safe and efficient anticancer therapies. Anticancer Genes: Springer; 2014. P. 39-59.

6.Ma J-L, Han S-X, Zhao J, Zhang D, Wang L, Li Y-D, et al. Systemic delivery of lentivirus-mediated secretable TAT-apoptin eradicates hepatocellular carcinoma xenografts in nude mice .Int J Oncol. 2012;41(3):1013-20.

7.Zhou S, Zhang M, Zhang J, Shen H, Tangsakar E, Wang J. Mechanisms of Apoptin-induced cell death. Med oncol. 2012;29(4):2985-91.

8.Wang C, Wang W, Wang J, Zhan H, Jiang L, Yan R, et al. Apoptin induces apoptosis in nude mice allograft model of human bladder cancer by altering multiple bladder tumor-associated gene expression profiles. Tum Biol :J Int Soc Oncodevelopment Biol Med. 2013;34(3):1667-78.

9.Klimatcheva E, Rosenblatt JD, Planelles V. Lentiviral vectors and gene therapy. Front Biosci. 1999;4:481-96. 10.Amado RG, Chen IS. Lentiviral vectors--the promise of gene therapy within reach?. Science. 1999;285(5428):674-6.

11.Jiang J, Cole D, Westwood N, Macpherson L, Farzaneh F, Mufti G, et al. Crucial roles for protein kinase C isoforms in tumor-specific killing by apoptin. Cancer Res. 2010;70(18):7242-52.

12.Guelen L, Paterson H, Gaken J, Meyers M, Farzaneh F, Tavassoli M. TAT-apoptin is efficiently delivered and induces apoptosis in cancer cells. Oncogene. 2004;23(5):1153-65.

13.Peng C, Yang P, Cui Y, He M, Liang L, Di Y. HSPA9 overexpression inhibits apoptin-induced apoptosis in the HepG2 cell line. Oncol Report. 2013;29(6):2431-7.

14.Zhao J, Han SX, Ma JL, Ying X, Liu P, Li J, et al. The role of CDK1 in apoptin-induced apoptosis in hepatocellular carcinoma cells. Oncol Rep. 2013;30(1):253-9.

15.Taebunpakul P, Sayan BS, Flinterman M, Klanrit P, Gaken J, Odell EW, et al. Apoptin induces apoptosis by changing the equilibrium between the stability of TAp73 and DeltaNp73 isoforms through ubiquitin ligase PIR2. Apoptosis. 2012;17(8):762-76.

16.Shen Ni L, Allaudin ZN, Mohd Lila MA, Othman AM, Othman FB. Selective apoptosis induction in MCF-7 cell line by truncated minimal functional region of Apoptin. BMC Cancer. 2013;13:488.

17.Neri L, Cani A, Martelli A, Simioni C, Junghanss C, Tabellini G, et al. Targeting the PI3K/Akt/mTOR signaling pathway in B-precursor acute lymphoblastic leukemia and its therapeutic potential. Leukemia. 2014;28(4):739-48. 18.Maddika S, Wiechec E, Ande SR, Poon IK, Fischer U, Wesselborg S, et al. Interaction with PI3 kinase contributes to the cytotoxic activity of apoptin. Oncogene. 2008;27(21):3060-5

References

Related documents

Saya merasa senang belajar di lembaga HSKS Solo karena kakak tutor dapat memenuhi kebutuhan saya dalam belajar 25 Keramahan kakak tutor terhadap siswa-. siswanya membuat saya

• Measure* with Apache Bench, Nouvola, BlazeMeter, JMeter, etc • Example issue: site is slow on Friday nights!. The

Weinstock: We think the helminths are particular organisms that the body needs, and when we eliminated them from the body, we affected our immune systems that has not

The result on water contact pattern in this study is in agreement with Onwuliri et al., 2005 which stated that the impact of cultural limitations in the transmission of

To predict the bearing capacity of unreinforced and geocell reinforced circular footing under static load and the settlement ratio under cyclic load of different

discourse is drawn on selectively, with `community' and `quality of life' appearing frequently but `social exclusion' not at all. The discourses of progress and expertise

There was also was positive and significant difference between adopters and non adopters in terms of farm size and adoption of biogas technology among households in

The work will seek to demonstrate how the Fascist regime recovered the myth of ‘Italian Geniality’ from the Liberal Age and applied it to Italian migrants from an imperial