ی
قیق
حت
هلا
قم
لباب یکشزپ مولع هاگشناد هلجم هرود ،متسیب ةرامش 2 ، نمهب 3169 هحفص ، 84 -82دیسکا تارذونان شقن
رب یسیطانغم نادیم و نهآ
زوتپوپآ
نژ نایب و
Bax
تر پماکوپیه رد
نژویفرپیر یمکسیا بقاعتم
یراط یرقاب قیاقش
(
MSc)
3رپهوک یئازخ بنیز ،
(
PhD)
3 *یتحلاف یبتجم ،
(
PhD)
2 3 -دحاو ،یتسیز مولع هدکشناد ،یلوکلومو یلولس یسانش تسیز هورگ دازآ هاگشناد ،نباکنت یملاسا 2 -یملاسادازآ هاگشناد ،نارهت ییوراد مولع دحاو ،نیون یاه یروانف و مولع هدکشناد ،یژولونکت ونان هورگ :تفایرد 39 / 8 / 69 :حلاصا ، 13 / 7 / 69 :شریذپ ، 23 / 6 / 69هصلاخ
:فده و هقباس س لمحتم یمکسیا زرم رد اه نورون زا یرایسب ،یزغم هتکس زا دعب .تسا ناهج رد گرم هب رجنم تلع نیمود یزغم هتک زوتپوپآ یم نیا زا فده .دنوش دیسکا تارذونان تارثا یسررب هعلاطم شهاک رد یسیطانغم نادیم و نهآ زوتپوپآ تر لدم رد نژویفرپیر یمکسیا زا دعب دشاب یم . شور و داوم اه : ،یبرجت هعلاطم نیا رد 03 (راتسیو داژن رن تر رس 203 -223 )مرگ یفداصت روطب هب 0 مش ،لرتنک لماش ییات هد هورگ یمکسیا ،)نژویفرپیر یمکسیا( دیسکا تارذونان اب رامیت تحت+نژویفرپیر نهآ ( mg/kg 33 (یسیطانغم نادیم+نژویفرپیر یمکسیا ،) 3 ،لاست 23 تدم هب هنازور هقیقد 8 )زور هدافتسا+نژویفرپیر یمکسیا و قیرزت .دش میسقت نامزمه روط هب یسیطانغم نادیم و نهآ دیسکا هرذ ونان زا پماکوپیه ،زور راهچ زا دعب .دش ماجنا یقافص نورد شور هب اه شوم زغم زا اه هعلاطم تهج اه ءاقلا زوتپوپآ شور هب( سی TUNEL نژ نایب تارییغت و ) Bax شور هب( Q-PCR دش ادج) ه تفرگ رارق یسررب دروم و . :اه هتفای لولس دادعت ،نژویفرپیر یمکسیا ءاقلا زا دعب دیسکا تارذونان اب رامیت تحت تبثم لنات یاه ( نهآ 2 ± 7 ( یسیطانغم نادیم ای و ) 2 ± 32 لوط رد ) 8 ینعم شهاک زور ( نژویفرپیر یمکسیا هورگ هب تبسن یراد 0 ± 27 داد ناشن ) ( 33 / 3 > p ) نامزمه رامیت اما . یسیطانغم نادیم و تارذونان اب ( 9 / 2 ± 21 ینعم توافت ) هورگ اب هسیاقم رد یراد ( نژویفرپیر یمکسیا 0 ± 27 لوط رد ) 8 نژ نایب هولاعب .دادن ناشن زور Bax تحت هورگ رد دیسکا تارذونان اب رامیت نهآ ( 22 / 3 ± 89 / 2 نادیم ضرعم رد هورگ رد ای ) ( یسیطانغم 11 / 3 ± 24 / 1 ینعم روط هب) (یراد 33 / 3 > p ( نژویفرپیر یمکسیا لدم اب هسیاقم رد ) 71 / 3 ± 23 / 0 تشاد شهاک ) . :یریگ هجیتن ،هعلاطم نیا جیاتن هب هجوت اب دیسکا تارذونان هک دسر یم رظن هب شهاک رد رثؤم شور ود یسیطانغم نادیم روطنیمه ،نهآ زوتپوپآ نژویفرپیر یمکسیا زا دعب دنشاب . :یدیلک یاه هژاو Bax دیسکا ، یمکسیا ،نهآ نژویفرپیر تارذونان ،یسیطانغم نادیم ، . لصاح هلاقم نیا همان نایاپ قیاقش یراط یرقاب یوجشناد دشرا یسانشراک هتشر یلوکلوم و یلولس مولع هاگشناد یملاسا دازآ نباکنت دحاو دشاب یم . * :هلاقم لوئسم یئازخ بنیز رتکد رپهوک :سردآ ،نباکنت یملاسادازآ هاگشناد باکنتدحاو ن ، ،یتسیز مولع هدکشناد یلوکلوم و یلولس یسانش تسیز هورگ . :نفلت 08273330 -333 E-mail: khazaei@toniau.ac.irهمدقم
گرم تلع نیمود یزـغم هتکـس ( 3 ) عیاش زا یکی و یناوتان لیلاد نیرت ( 2 ) یم بوسحم ایند رد نیغلاب شخب نامرد یارب .دوش زا یشان زغم هدید بیسآ یاه شور یزغم هتکس یفلتخم ینامرد یاه نورون یارب گر ،ییاز لوط شیازفا ،ییاز زنژوتپانیس و ینوسکآ یم لولس دنویپ هلمج زا ؛دشاب ،لامیشنزم ،یبصع یداینب یاه لولس ای و ینینج هناوت دنچ یداینب یاه دوجو دراد ( 3 ) شقن هب هجوت اب . لک یدی پماکوپیه هظفاح و یریگدای رد ( 1 ) ، شهاک آ بیس هدراو هب ا نی و شخب میمرت نآ آ رد اهبیس ی یشان زا زغم هتکس و تیمها یاراد ی ژی یم یا ه زا هدافتسا .دشاب ولس ل پماکوپیه رد دوجوم یداینب یاه وظنم هب ر اعیاﺿ میمرت ت یبصع ا رم هزو هب رد دمآراک و مهم یتسایس ناونع یم بوسحم یبصع یاهیرامیب نامرد ددرگ ( 8 ) . ءاقلا هکیروطب ، لولس زیامت و ریثکت ینطب ریز هیلا رد دوجوم یبصع یداینب یاه یم یبصع تاعیاﺿ میمرت و دوبهب شیازفا هب رجنم ددرگ ( 0 ). تارذونان زا هزورما دیسکا وراد یبایدر ای یلولس یبایدر نوچ یفلتخم فادها اب نهآ یناطرس دﺿ یاه هارمه هب MRI ( Magnetic Resonance Imaging دوش یم هدافتسا ) ( 9 ) میزنآ ،اهوراد تیاده . آ و اه یداب یتن کی ریثأت تحت نهآ دیسکا تارذونان اب اه زا رگید یکی دناوت یم یناطرس عﺿوم ای تفاب ،مادنا هب یسیطانغم نادیم دربراک دشاب نآ ینامرد یاه ( 7 ) . ونان هوقلاب تیزم رذ دیسکا تا تاعیاﺿ نامرد رد نهآ نآ یلااب ناوت ،یبصع تسا یمکسیا زا سپ نوخ و تفاب نیب داوم لدابت رد اه ( 4 ) نادـیم هک هدش صخشم نینچمه . یتارییغت داجیا هب رجنم یسیطانغم یاـه نوـی اـب شنـک مـه رـب و یلولس ءاشغ یریذپذوفن رد لوکلوم و اـه لثم یلآ یاه نیئتورپ دیسا کیئلکون و اه دوش یم یلولـس دشر شیازفا هجیتن رد و اه ( 33 و 6 ) اب . بیسآ ثعاب یمکسیا هکنیا هب هجوت ناربج یاه یم زغم تفاب هب یریذپان رد ،دوش هعلاطم نیا ، دیسکا تارذونان ریثأت زا دعب شوم زغم رب یسیطانغم نادیم و نهآ ( نژویفرپیر یمکسیا Ischemic Reperfusion=IR شهاک رب ) زوتپوپآ و نژ نایب Bax دروم یبایزرا رگ رارق تف تسا ه .J Babol Univ Med Sci; 20(2); Feb 2018 The role of iron oxide nanoparticles and magnetic field …; Sh. Bagheri Tari, et al
81
شور و داوم
اه
تاناویح : هعلاطم نیا یبرجت رد بیوصت زا سپ یملاسا دازآ هاگشناد قلاخا هتیمک هرامش هب نارهت ییوراد مولع دحاو 80 . 3161 iauz.REC. یور رب 03 شومرس نزو هب راتسیو داژن ،رن ییارحص 203 -223 هورگ( نارهت هاگشناد زا مرگ )یژولوکامراف دش ماجنا شوم . ییانشور هرود اب یقاتا رد اه یکیرات 32 و هتعاس یامد 2 ± 20 هگن اذغ و بآ نیمأت و دارگیتناس هجرد .دندش یراد شوم هورگ جنپ رد اه 33 ییات 3 ،ملاس تاناویح :لرتنک ) 2 تاناویح :مش ) نژویفرپیر یمکسیا لدم ( IR ) هک اهنت اب لامرن یکمن لولحم ( للاح ) تی رام ،دندش 1 آ هورگ) اب هک یزغم نژویفرپیر یمکسیا لدم تاناویح : کی یشیامز mg/kg 33 ،دندش رامیت نهآ دیسکا هرذ ونان زا 8 لدم تاناویح :ود یشیامزآ هورگ ) تدم هب( هنازور هک یزغم نژویفرپیر یمکسیا 8 یسیطانغم نادیم ریثأت تحت )زور تردق هب 3 و دنتفرگ رارق لاست 0 ویح لماش :هس یشیامزآ هورگ ) لدم تانا اب هک یزغم نژویفرپیر یمکسیا mg/kg 33 هرذ ونان زا و هدش رامیت نهآ دیسکا تردق هب یسیطانغم نادیم ریثأت تحت هنازور 3 دنتفرگ رارق لاست دندش میسقت ، . وراد بیکرت زا تاناویح رد یشوهیب ءاقلا یارب سپس تکرش( نیزلایاز یاه Alfasan تکرش( نیماتک و )دنله ، Rotexmedica .دیدرگ هدافتسا )ناملآ ، تبسن اب هک 3:0 ( 0 +نیماتک زا رتیل یلیم 3 رادقم هب و هیهت )نیزلایاز رتیل یلیم mg/kg 33 .دیدرگ قیرزت یقافص لخاد تروص هب ناویح ره نزو ساسا رب شوم رد یزغم نژویفرپیر یمکسیا ءاقلا : رد یدومع شرب کی ،یشوهیب زا دعب هب و دش هداد ندرگ هیحان لباق تمس ود ره رد كرتشم دیتوراک قورع نآ لابند پملاک طسوت دیتوراک قورع ،گاو بصع یزاسادج زا سپ .دیدرگ هدهاشم تدم هب یرجرسورکیم 23 .دیدرگ فقوتم زغم هب یناسرنوخ و دندش دودسم هقیقد زا سپ و دش یسررب ًابترم ناویح ندب ترارح هجرد یمکسیا نامز رد 23 هقیقد پملاک ب اه ،یمکسیا ءاقلا زا سپ .دیدرگ رارقرب ًاددجم نوخ شدرگ و هدش هتشادر هچیهام هداد شرب شخب و دش هداد رارق دوخ کیموتانآ لحم رد هدش ادج یاه هدش ، .دیدرگ هیخب ونان نویسناپسوس دیسکا تارذ نهآ : ونان دیسکا تارذ ( نهآ Fe2O3 ( ) IronOxide(II III) Magnetic Nanoparticles powder
ردوپ تروصب ) داعبا رد 33 امگیس تکرش زا رتمونان -ونان .دش یرادیرخ )ناملآ( چیردلآ تارذ دیسکا ییاهن تظلغ اب نهآ mg/ml 33 ترارح هجرد رد یکمن لولحم هب 83 -10 تدم هب و هدش هفاﺿا دارگ یتناس هجرد 0 نویسناپسوس هیهت روظنم هب هقیقد .دیدرگ سکترو تاناویح رامیت : روظنم هب و یدنب هورگ زا سپ ،فلتخم یاه هورگ رد تاناویح رامیت ،تاناویح یحارج هورگ .دندیدرگ رامیت ریز یوگلا اب اه هورگ 3 :)لرتنک هورگ( هک دندوب یملاس تاناویح 23 رد فاکش داجیا زا سپ هقیقد ونان للاح( لامرن یکمن لولحم اب ندرگ هیحان رامیت یقافص لخاد تروص هب )هرذ س ،دندش .دش هیخب تاناویح تسوپ ،نژویفرپیر یمکسیا ءاقلا نودب سپ هورگ 2 :)مش هورگ( هورگ نیا رد 23 اب تاناویح یزغم بیسآ ءاقلا زا سپ هقیقد .دندش رامیت لامرن یکمن لولحم هورگ 1 ونان اب رامیت تحت هورگ( دیسکا تارذ :)نهآ تاناویح 23 ءاقلا زا سپ هقیقد زود اب یزغم بیسآ mg/kg 33 دیسکا هرذ ونان زا یقافص لخاد تروص هب نهآ .دندش رامیت هورگ 8 :)یسیطانغم نادیم ضرعم رد هورگ( یشوهیب تلاح رد تاناویح رس 23 تدم هب ،یزغم بیسآ ءاقلا زا سپ هقیقد 8 یسیطانغم نادیم رد زور 3 ره( لاست 28 تدمب راب ره و رابکی تعاس 23 لکش( دش هدادرارق )هقیقد 3 .) گ هور 0 ونان و یسیطانغم نادیم ضرعم رد هورگ( دیسکا تارذ :)نهآ ،تاناویح رامیت 23 ونان اب یزغم بیسآ ءاقلا زا سپ هقیقد دیسکا هرذ ( نهآ mg/kg 33 تروص هب ) تدم هب ،یشوهیب تلاح رد تاناویح رس سپس و تفرگ تروص یقافص لخاد 8 زور یسیطانغم نادیم رد 3 ره( لاست 28 رابکی تعاس راب ره و 23 .دش هدادرارق )هقیقد رامیت زا دعب مراهچ زور رد هورگ یمامت رد تاناویح ،فلتخم یاه و هدش شوهیب اه شوم زغم ،رس یزاسادج زا سپ .دش هداد رارق درس یکمن لولحم رد اه لکش 3 . سیطانغم نادیم دلوم ریوصت ی رد تاناویح همجمج یهدرارق هوحن و نادیم طانغم یسی 3 تدم هب لاست 23 .زور رد هقیقد یزیمآ گنر و زغم زا نزورف شرب TUNEL : نازیم یسررب روظنم هب زوتپوپآ رد نورون رامیت زا دعب گرم نازیم رد رییغت و نژویفرپیر یمکسیا ءاقلا زا دعب اه یاه یصاصتخا یزیمآ گنر زا فلتخم زوتپوپآ یزیمآ گنر( TUNEL .دش هدافتسا ) نم نیا هب رزیرف رد هدش یراد هگن زغم تفاب زا ادتبا روظ C ◦ 43 هنیفاراپ كولب ، نزورف موتورکیم هاگتسد رد كولب ره سپس .دش هداد رارق عیام نژورتین رد و هیهت شرب و هدش هداد رارق داعبا رد ییاه µm 0 -1 ملا یور رب و دش هیهت تفاب نیا زا لولحم یواح OCT .دش هداد رارق یارب صخشم ن ندوم یاهلولس ،کیتوتپوپآ گنر یزیمآ لنات اب هدافتسا زا لمعلاروتسد تیک
In situ Direct DNA Fragmentation
(TUNEL) Assay Kit
( Abcam ادتبا .تفرگ تروص )ناتسلگنا ، شرب لولحم اب بیترت هب تفاب زا هدش هیهت یاه زانیئتورپ K هب تدم 13 -30 هقیقد رد یامد 17 -23 هجرد ارگیتناس د اب سپس و هبوکنا PBS .دش هداد وشتسش دیاسکارپ نژوردیه اب تفاب ههجاوم 1 % تدم هب 33 یکیرات رد قاتا یامد رد هقیقد اب سپس و دش ماجنا PBS .دش هداد وشتسش یریذپذوفن نازیم شیازفا روظنم هب دعب و دش هداد رارق هقیقد ود تدم هب خی یور رب یتفاب تاعطق ،رظن دروم تفاب ولحم ل
TUNEL Reaction Mixture
هب ره عطقم یتفاب هدوزفا هدش و هب تدم 93 هقیقد رد یامد 17 هجرد دارگیتناس هبوکنا دیدرگ اب وشتسش سپس و PBS لولحم ،نآ لابندب .دش ماجنا Converter-POD, 3 و هدش هدوزفا 13
88
مولع هاگشناد هلجم هرود ،لباب یکشزپ هرامش /متسیب 2 / نمهب 3169 دیسکا تارذونان شقن زوتپوپآ رب یسیطانغم نادیم و نهآ ... ؛ یراط یرقاب قیاقش ناراکمه و رد هقیقد یامد 17 هجرد هدش هبوکنا زا هدافتسا اب سپس و PBS هداد وشتسش دش . تفاب هب ،وشتسش زا سپ نژومورک هدام اه DAB ودش هدوزفا هب تدم 33 -0 رد هقیقد یامد 20 -30 هجرد زا هدافتسا اب سپس و دیدرگ هبوکنا PBS وشتسش جنپ ملا ره رد و باختنا یفداصت تروص هب ملا هس هورگ ره زا تیاهن رد .دش هداد ییامنگرزب اب یرون پوکسورکیم اب دلیف x 833 دروم .تفرگ رارق یسررب هنومن یسررب نازیم رظن زا یتفاب یاه زوتپوپآ : تفاب یمامترد هب هدش هیهت یاه نازیم یسررب روظنم زوتپوپآ هیحان رد CA1 یزیمآ گنر زا پماکوپیه TUNEL لولس ،یزیمآ گنر عون نیا رد .دش هدافتسا راچد یاه زوتپوپآ ( + TUNEL ا هوهق ات یکشم( گنر رپ هتسه یاراد ) هعطق یراتخاس اب )گنر ی لولس و هدوب هعطق راتخاس نیا دقاف ملاس یاه لولس لک دادعت .دنتسه اه یاه + TUNEL هیحان رد )کیتوتپوپآ ماسجا( CA1 نازیم هدنهد ناشن تاناویح زغم زوتپوپآ یم تاناویح زغم زا شخب نیا رد لولس شرامش .دشاب یاه + TUNEL هب رازفا مرن کمک Image Tools جنا .دش ما جارختسا RNA : روظنم هب جارختسا RNA هیحان زا CA1 تیک زا ،پماکوپیه RNX-Plus Solution .دش هدافتسا )ناریا ،نژانیس( RNA جارختسا هدش پاردونان رتموتوفورتکپسا کمک هب یمک رظن زا فلتخم یاه هنومن زا 3333 ( Thermo ، اکیرمآ زراگآ لژ رد یفیک رظن زا و ) 3 % .دش یسررب ب نژ نایب یسرر Bax شور هب Q-PCR : نژ نایب ریغتم یسررب یارب Bax زا شنکاو Q-PCR ادتبا رد .دش هدافتسا زتنس cDNA کمک هب RNA جارختسا تیک و هدشRevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit
(
Thermo Fisher Scientific
، اکیرمآ لمعلاروتسد قباطم .تفرگ تروص ) اوم، هدنزاس تکرش زتنس روظنم هب پویتورکیم رد هدش هیهت د cDNA لخاد رلکیاسومرت هاگتسد Applied Biosystems 2720 ( Thermo Fisher Scientific ، اکیرمآ همادا رد .دش هداد رارق) توافت حطس ناـیب نژ Bax ، رد هـب هعلاطم دروم یاه هورگ شور Q-PCR سنرفر نژ هب تبسن β-actin هب تیک کمک
SYBR Green Master Mix
دش هسیاقم )ناریا،زیهجت اتکی( .
هاگتسد رد شنکاو
iCycler iQ™ Real-TimePCR Detection
System ( Biorad ، اکیرمآ همانرب قبط ) تروصب ندش تشرساو هلحرم کی یامد رد ییادتبا 60 تدم هب دارگ یتناس هجرد 13 هیناث و 83 لکیس ریثکت شنکاو ندش تشرساو لماش یامد رد 60 تدم هب دارگ یتناس هجرد 0 هیناث لاصتاو یزاس لیوط/اهرمیارپ یامد رد 93 تدم هب دارگ یتناس هجرد 13 هیناث و طیارش د بوذ ینحنم لیکشت هلحرم ییام لماش 60 تدم هب دارگ یتناس هجرد 30 هیناث ، 93 تدم هب دارگ یتناس هجرد 13 هیناث و 60 تدم هب دارگ یتناس هجرد 30 هیناث دش ماجنا . لودج رد هدافتسا دروم یاه رمیارپ یلاوت 3 نژ زا .تسا هدش رکذ β هب نیتکا تاشیامزآ همه .دش هدافتسا عجرم نژ ناونع لقادح هب جیاتن و دش رارکت راب هس هلداعم کمک ΔΔCT -2 .دیدرگ زیلانآ زا هدافتسا اب اه هداد نومزآ یرامآ یاه -t test ،
one way ANOVA
یلیمکت تست و Tukey لیلحت و هیزجت ودندش 30 / 3 p< راد ینعم .دش هتفرگ رظن رد
اه هتفای
روم یاه هورگ هب طوبرم یاه ملا یزیمآ گنر جیاتن تیک زا هدافتسا اب هعلاطم د TUNEL : هـیحان زا هدش هتفرگ ریواصت CA1 پـماکوپیه یاـه هورـگ رد تر لکش رد لنات یزیمآ گنر اب هعلاطم دروم 2 یارب شور نیا .تسا هدش هداد ناشن یّمک یبایزرا زوتپوپآ دور یم راکب یا هدرتسگ روطب . لودج 3 رمیارپ تاصخشم . نیا رد هدافتسا دروم یاه هعلاطم لوصحم لوط یلاوت نژ مان bp 312 5- AGACAGGGGCCTTTTTGCTAC -3 Forward Bax 5- AATTCGCCGGAGACACTCG -3 Reverse bp 340 5-TCCTGTGGCATCCACGAAACT-3 Forward β-actin 5-GGAGCAATGATCTTGATCTTC-3 Reverse لکش 2 . هیحان CA1 رد تر پماکوپیه زا 0 روم هورگ ییامنگرزب ،لنات یزیمآ گنر . هعلاطم د 833 × :یکشم شلف( راچد یاهلولس زوتپوپآ :زمرق شلف و)کیتوتپوپآ ماسجا( لولس . دهد یم ناشن ار ملاس یاه A ،ملاس هورگ) B هورگ ) IR ، C هورگ ) IR+ Fe2O3 NP ، D هورگ ) IR+ Magnetic field و E هورگ ) field IR+Fe2O3 + MagneticJ Babol Univ Med Sci; 20(2); Feb 2018 The role of iron oxide nanoparticles and magnetic field …; Sh. Bagheri Tari, et al
80
نازیم یسررب آ زوتپوپ یشیامزآ فلتخم یاه هورگ رد : تست جیاتن TUNEL ( نژویفرپیر یمکسیا داجیا هک داد ناشن IR رجنم ) راد ینعم شیازفا هب ( 33 / 3 < p لولس دادعت ) یاه + TUNEL ( 0 ± 27 ملاس هورگ هب تبسن ) ( 04 / 3 ± 11 / 1 دیسکا تارذونان اب رامیت تحت هورگ رد .دش ) تظلغ اب نهآ mg/kg 33 ینعم شهاک (راد 33 / 3 < p لولس دادعت ) یاه + TUNEL ( 2 ± 7 ) هب تبسن هورگ IR ( 0 ± 27 تدش اب یسیطانغم نادیم ضرعم رد هورگ رد .دش هدهاشم ) 3 تدم هب( لاست 23 یط هقیقد 8 ینعم شهاک )زور (راد 33 / 3 p< ولس دادعت ) ل یاه + TUNEL ( 2 ± 32 هورگ هب تبسن ) IR ( 0 ± 27 ) یبیکرت رامیت اب هورگ رد .داد خر نان لماش دیسکا تارذو ( یسیطانغم نادیم و نهآ 9 / 2 ± 21 ) لباق یرامآ توافت هورگ هب تبسن یهجوت IR ( 0 ± 27 ) لولس دادعت شهاک رد یاه + TUNEL ینعم شیازفا اما .دشن هدهاشم لولس دادعت راد یاه + TUNEL نیمه هسیاقم رد ( )یبیکرت رامیت( هورگ 9 / 2 ± 21 دیسکا تارذونان اب رامیت تحت هورگ اب ) نهآ هب ( ییاهنت 2 ± 7 ( ) 33 / 3 p< ) (یسیطانغم نادیم ای و 2 ± 32 ( ) 30 / 3 p< ) .دش هدهاشم تارذونان اب رامیت تحت هورگ هک داد ناشن شیامزآ نیا جیاتن نینچمه دیسکا (نهآ 2 ± 7 ( یسیطانغم نادیم ضرعم رد هورگ هب تبسن ) 2 ± 32 دادعت ،) لولس یاه TUNEL+ دنتشاد یرتمک ( 30 / 3 p< رادومن( ) 3 .) رادومن 3 . ای تبثم لنات یاه لولس دادعت رادومن 3 . هیحان رد کیتوتپوپا ماسجا CA1 فلتخم یاه هورگ رد پماکوپیه :ناسکیریغ فورح .شیامزآ دروم تسا راد ینعم توافت نژ نایب یسررب Bax هعلاطم دروم یاه هورگرد : تحص زا نانیمطا زا دعب RNA جارختسا لکش( هدش 1 نژ نایب ،) Bax د هورگ ر یشیامزآ فلتخم یاه داد ناشن یرامآ تابساحم زا لصاح جیاتن .تفرگ رارق یسررب دروم یمک تروصب ( نژویفرپیر یمکسیا داجیا هک IR ینعم شیازفا ثعاب ) ( راد 33 / 3 p< نژ نایب ) Bax ( 71 / 3 ± 23 / 0 (ملاس هورگ هب تبسن) 3 ± 3 شوم رامیت هکیلاح رد .دش ) اب اه دیسکا تارذونان ( نهآ mg/kg 33 ینعم شهاک هب رجنم ) نژ نایب راد Bax ( 22 / 3 ± 89 / 2 شوم اب هسیاقم رد ) راچد یاه IR ( 71 / 3 ± 23 / 0 رد نینچمه .دش ) هورگ IR یسیطانغم نادیم اب ههجاوم زا دعب ( MF ) ( 3 تدم هب ،لاست 8 ره و زور زور 23 (راد ینعم شهاک )هقیقد 30 / 3 p< نژ نایب ) Bax ( 11 / 3 ± 24 / 1 تبسن ) راچد هورگ هب IR ( 71 / 3 ± 23 / 0 نادیم زا نامزمه هدافتسا .دش هدهاشم ) تدش اب یسیطانغم 3 دیسکا تارذونان و لاست تظلغ اب نهآ mg/kg 33 ( 06 / 3 ± 37 / 8 هورگ اب یهجوت لباق یرامآ توافت ) IR ( 71 / 3 ± 23 / 0 رد .دادن ناشن ) ( راد ینعم شهاک هکیلاح 30 / 3 p< نژ نایب ) Bax تحت هورگ رد تارذونان اب رامیت یسکا د ییاهنت هب نهآ ( 22 / 3 ± 89 / 2 ییاهنت هب یسیطانغم نادیم اب ههجاوم رد ای و ) ( 11 / 3 ± 24 / 1 تحت هورگ اب هسیاقم رد ،) ( ود نآ نامزمه رامیت 06 / 3 ± 37 / 8 رتشیب ) نژ نایب شهاک خرن نینچمه .دوب دوهشم Bax تارذونان اب رامیت تحت هورگ رد دیسکا (ییاهنت هب نهآ 22 / 3 ± 89 / 2 خرن زا رتشیب ) نژ نایب شهاک Bax رد هورگرد (یسیطانغم نادیم ضرعم 11 / 3 ± 24 / 1 ( دوب ) 30 / 3 p< رادومن( ) 2 .) لکش 1 . هنومن جنپ زروفورتکلا هجیتن RNA هورگ زا هدش جارختسا فلتخم یاه .یشیامزآ زراگآ لژ رد 3 % ( حﺿاو دناب هس دوجو . rRNA28s ، rRNA 18s و rRNA 5s د ناشن زراگآ لژ رد ) بیرخت مدع و صیلخت دنیآرف تحص هدنه هنومن یاه RNA یم دشاب رادومن 2 . نژ نایب هسیاقم Bax ح. هعلاطم دروم فلتخم یاه هورگ رد فور تسا راد ینعم توافت:ناسکیریغیریگ هجیتن و ثحب
هک دش صخشم هعلاطم نیا رد ونان تارذ ا دیسک آ نه و دیم نا یسیطانغم روطب م شقن هناگادج شهاک رد یرثؤ زوتپوپآ رد نژویفرپیر یمکسیا ءاقلا زا دعب .دنراد شوم پماکوپیه Kim و ناراکمه رد دوخ هعلاطم هدهاشم دندرک هک نازیم ءاقب و تلااصتا لولس یاه تحت یبصع رامیت اب نیا ونان تارذ رد طیارش Invitro ینعم روط هب یراد شیازفا یم دبای ( 33 ) . لولس گرم شهاک زین رﺿاح هعلاطم رد شیازفا یترابع هب و پماکوپیه یاه لولس یاقب تحت یاه دیسکا تارذونان اب رامیت سپ .دش هدهاشم نهآ زا یمکسیا اب تشگزاب نایرج حطس ،نوخ ییلااب زا لاکیدار یاه ازآ د دیلوت یم دنوش هک ثعاب بیسآ هب لولس هجیتن رد و اهکمادنا یبصع یاه یم دوش ( 32 ) یم رظن هب . دسر دیسکا تارذونان لاکیدار شهاک اب نهآ شهاک ثعاب دازآ یاه زوتپوپآ یازفا و ش هعلاطم رد .دنوش لولس یاقب Estevez و ناراکمه زا هدافتسا هک دش هدهاشم ونان تارذ دیسکا هب مویرس لیلد ییاناوت یوق رد راهم لاکیدار دازآ یاه شهاک ثعاب نورون گرم شهاک و شوم زغم رد یمکسیا زا یشان ضراوع یمکسیا زا دعب اه یم دوش ( 32 ). یم رظن هب نیاربانب دیسکا تارذونان دسر راهم ناوت نتشاد اب زین نهآ لاکیدار لولس یاقب رد دازآ یاه رد هکیروطب .دنشاب هتشاد شقن یبصع یاه هعلاطم Apopa و ناراکمه تارذونان هک دش صخشم دیسکا نهآ ناوت ب هوقلا یا s 82 s 82 s 589
مولع هاگشناد هلجم هرود ،لباب یکشزپ هرامش /متسیب 2 / نمهب 3169 دیسکا تارذونان شقن زوتپوپآ رب یسیطانغم نادیم و نهآ ... ؛ یراط یرقاب قیاقش ناراکمه و رد شیازفا ذوفن یریذپ لایلتودنا یقورع دنراد . ،هعلاطم نیا جیاتن ساسا رب نیا تارذونان زا قیرط دیلوت مرف یاه نژیسکا لاعف ( reactive oxygen species=
ROS ) و تیبثت لوبوتورکیم اه رجنم هب شیازفا یریذپذوفن قورع یم دندرگ . داهنشیپ جیاتن نیا دنک یم هک زا ونان ذ دیسکا تار نهآ تهج ناوتب شیازفا ییآراک نامرد یاه متسیس باصعا یزکرم هدافتسا دومن ( 4 ) . دیسکا تارذونان رﺿاح هعلاطم رد ییاهنت هب نهآ گرم شهاک هب رداق لولس نومزآ جیاتن هکیروطب دندوب یبصع یاه TUNEL نژ نایب و Bax همانرب گرم شهاک لولس هدش یزیر هعلاطم .دومن دییأت یمکسیا اقلا زا دعب ار اه Palizvzn و ناراکمه داد ناشن هک ونان دیسکا تارذ نهآ ناوت ییلااب رد شیازفا تظافح یبصع و میمرت تاعیاﺿ یبصع دراد ( 31 ) زا هدافتسا نینچمه . لولس گرم شهاک رثا هعلاطم نیا رد یسیطانغم نادیم زا دعب یبصع یاه ه ؛داد ناشن ار یمکسیا رظن هب .دوب ییاهنت هب تارذونان زا رتمک نآ ریثأت دنچر یم اب یسیطانغم نادیم دسر رییغت رد یریذپذوفن زا ءاشغ قیرط رـب مـه شنـک اـب نوـی اـه و لوکلوم یاه یلآ لثم نیئتورپ اه و کیئلکون دیسا اه رجنم هب دشر راهم و یلولـس زوتپوپآ ددرگ ( 33 و 6 ) . دیسکا تارذونان ناوت یسیطانغم نادیم و نهآ شوم رد ییایردنکوتیم تیلاعف شیازفا دنتشاد ار نوسنیکراپ هب لاتبم یاه ( 38 ) . یم نیاربانب م شور نیا هب دنناوت لاکیدار رثا عنا بجوم و یردنکوتیم رب دازآ یاه .دنوش یمکسیا زا لصاح یلولس گرم ءاقلا شهاک یم ناشن تاعلاطم رگید و هعلاطم نیا جیاتن دیسکا تارذونان هک دهد هب نهآ رد یمکسیا زا دعب گرم ءاقلا شهاک ثعاب ییاهنت هب یسیطانغم نادیم و ییاهنت یم شوم زغم پمکوپیه چره .دنوش ءاقلا شهاک دن زوتپوپآ لولس رد یاه بیسآ هدید تحت یزغم دیسکا تارذونان اب رامیت نادیم اب زغم ترواجم زا رتشیب رایسب نهآ یم رظن هب .دوب یسیطانغم دسر لولس ریثکت شیازفا هجیتن رما نیا عﺿوم رد اه لاکیدار رابنایز تارثا شهاک ،بیسآ ولس مهم یازجا یاقب شیازفا و دازآ یاه رد یل ب لولس نورد هب یتایح داوم رتشیب شناسر رثا ه دیسکا تارذونان هطساو رد نهآ .دشاب یسیطانغم نادیم اب هسیاقم رثا رامیت ود نیا نامزمه هدافتسا رگید یوس زا لولس هب تبسن ینادنچ رییغت و هتشاد سکع رامیت نودب یزغم هدید بیسآ یاه رثا شیازفا یارب تسا مزلا .دادن ناشن هعلاطم دننامه رامیت ود نیا نامزمه Pita-Thomas ناراکمه و ژاتلو زا اب ترواجم نامز رد رییغت ای و توافتم یاه دومن هدافتسا یسیطانغم نادیم ( 30 ) .دهد شیازفا ار تارذونان یشخبرثا ات یوس زا شیپ نژ نایب یسیطانغم نادیم و تارذونان اب نامزمه رامیت رد رگید زوتپوپآ ی Bax یا هک دوب یمکسیا راچد یشوم لدم زا رتمک هک تسا رما نیا دیؤم هجیتن ن رامیت همادا ژاتلو اب ای رت ینلاوط تدم هب یسیطانغم نادیم تارذونان اب اه یاه یلولس گرم شهاک ثعاب تسا نکمم توافتم میمرت و یگدننک تظافح شیازفا و نورون .ددرگ یمکسیا ءاقلا زا دعب اه هتفای نیا یاه هعلاطم ناشن داد هک تظلغ mg/kg 33 نان زا دیسکا تارذو تدش هب یسیطانغم نادیم و نهآ 3 ( لاست 23 تدم هب )هقیقد 8 ءاقلا زا دعب یلولس گرم شهاک ثعاب دنرداق ییاهنت هب زور .دنوش ییارحص شوم رد نژویفرپیر یمکسیارکشت و ریدقت
زا هلیسونیدب ماما ناتسرامیب هاگشیامزآ تسایر روپهد اﺿردمحا رتکد یاقآ آ لنسرپ و ینیمخ هک هاگشیامز ،دنتشاد یراکمه قیقحت ماجنا رد رکشت ینادردق و ددرگ یم .J Babol Univ Med Sci; 20(2); Feb 2018 The role of iron oxide nanoparticles and magnetic field …; Sh. Bagheri Tari, et al
87
The Role of Iron Oxide Nanoparticles and Magnetic Field on Apoptosis
and Bax Gene Expression in Rat Hippocampus after Ischemic Reperfusion
Sh. Bagheri Tari (MSc)1, Z. Khazaei Koohpar (PhD)*1, M. Falahati (PhD)2
1.Department of Cellular and Molecular Biology, Faculty of Biological Sciences,Tonekabon Branch, Islamic Azad University, Tonekabon, I.R.Iran.
2.Department of Nanotechnology, Faculty of Science and Technology, Pharmaceutical Sciences Branch, Islamic Azad University , Tehran, I.R.Iran.
J Babol Univ Med Sci; 20(2); Feb 2018; PP: 42-8
Received: Jan 7th 2017, Revised: Oct 22th 2017, Accepted: Dec 12th 2017.
ABSTRACT
BACKGROUND AND OBJECTIVE: Stroke is the second leading cause of mortality in the worldwide. After a
stroke, many neurons in the ischemic penumbra will undergo apoptosis. The aim of this study was investigation of effects of iron oxide nanoparticles and magnetic field on apoptosis reduction after ischemic reperfusion in rat model.
METHODS: In this experimental study, 50 male Wistar rats weighing 220-250g were randomly divided into five
groups of 10 rats each: including control, sham (ischemic reperfusion model), ischemic reperfusion + iron oxide nanoparticles (10mg/kg), ischemic reperfusion +magnetic field (1 Tesla, 20 min in 4 days), and ischemic reperfusion + iron oxide nanoparticles and magnetic field groups. Injections were performed intraperitoneally. After Four days, the hippocampi were removed for studying of Apoptosis Induction (by TUNEL technique) and changes in Bax gene expression (by Q-PCR method).
FINDINGS: After induction of ischemic reperfusion, TUNEL+ cells number treated with iron oxide nanoparticles
(7±2) and or the magnetic field (12±2) had significant decrease (p<0.01) relative to ischemic reperfusion group (27±5) during 4 days. But simultaneous treatment with nanoparticles and magnetic field (23±2.6) did not show significant difference compared to ischemic reperfusion group (27±5) during 4 days. Furthermore Bax gene expression decreased in iron oxide nanoparticles treated group (2.46±0.22) or the magnetic field exposed group (3.28±0.33) significantly (p<0.01)compared to ischemic reperfusion model (5.21±0.73)..
CONCLUSION: It seems that iron oxide nanoparticles as well as magnetic field to be two effective methods in
decrease of apoptosis after ischemic reperfusion.
KEY WORDS: Bax, Iron Oxide, Ischemia, Magnetic Field, Nanoparticles, Reperfusion
Please cite this article as follows:
Bagheri Tari Sh,Khazaei Koohpar Z,Falahati M. The Role of Iron Oxide Nanoparticles and Magnetic Field on Apoptosisand Bax
Gene Expression in Rat Hippocampus after Ischemic Reperfusion. J Babol Univ Med Sci. 2018;20(2):42-8.
*Corresponding Author; Z. Khazaei Koohpar (PhD)
Address: Department of Cellular and Molecular Biology, Tonekabon Branch, Islamic Azad University, Faculty of Biological Sciences, Tonekabon, I.R.Iran
Tel: +98 11 54271105
84
مولع هاگشناد هلجم هرود ،لباب یکشزپ هرامش /متسیب 2 / نمهب 3169 دیسکا تارذونان شقن زوتپوپآ رب یسیطانغم نادیم و نهآ ... ؛ یراط یرقاب قیاقش ناراکمه وReferences
1.Marlier Q, Verteneuil S, Vandenbosch R, Malgrange B. Mechanisms and functional significance of stroke-induced neurogenesis. Front Neurosci. 2015;9:458.
2.Rabiei Z, Bigdeli M, Lorigooini Z. A review of medicinal herbs with antioxidant properties in the treatment of cerebral ischemia and reperfusion. J Babol Univ Med Sci. 2015;17(12):47-56. [In Persian]
3.Jamali s, Abbasnejad M, Esmaeili mahani S, Badoei-Dalfard A, Kooshki R. Learning and memory impairment induced by the injection of ascorbic acid and ascorbate oxidase into the hippocampus in the morris water maze. J Babol Univ Med Sci. 2015;17(4):36-43. [In Persian].
4.Ohira T, Shahar E, Chambless LE, Rosamond WD, Mosley TH, Folsom AR. Risk factors for ischemic stroke subtypes: the Atherosclerosis Risk in Communities study. Stroke. 2006;37(10):2493-8.
5.Cheng LC, Pastrana E, Tavazoie M, Doetsch F. MiR-124 regulates adult neurogenesis in the subventricular zone stem cell niche. Nat Neurosci. 2009;12(4):399-408.
6.Petters C, Irrsack E, Koch M, Dringen R. Uptake and metabolism of iron oxide nanoparticles in brain cells. Neurochem Res. 2014;39(9):1648-60.
7.Laurent S, Forge D ,Port M, Roch A, Robic C, Vander Elst L, et al. Magnetic iron oxide nanoparticles: synthesis, stabilization, vectorization, physicochemical characterizations, and biological applications. Chem Rev. 2008;108(6):2064-110.
8.Apopa PL, Qian Y, Shao R, Guo NL, Schwegler-Berry D, Pacurari M, et al. Iron oxide nanoparticles induce human microvascular endothelial cell permeability through reactive oxygen species production and microtubule remodeling. Particle and fibre toxicology. Part Fibre Toxicol. 2009;6:1
9.Hunt RW, Zavalin A, Bhatnagar A, Chinnasamy S, Das KC. Electromagnetic biostimulation of living cultures for biotechnology, biofuel and bioenergy applications. Int J Mol Sci. 2009;10(10):4515-58.
10.Veiseh O, Gunn JW, Zhang M. Design and fabrication of magnetic nanoparticles for targeted drug delivery and imaging. Adv Drug Deliv Rev. 2010;62(3):284-304.
11.Kim JA, Lee N, Kim BH, Rhee WJ, Yoon S, Hyeon T ,et al. Enhancement of neurite outgrowth in PC12 cells by iron oxide nanoparticles. Biomat. 2011;32(11):2871-7.
12.Estevez AY, Pritchard S, Harper K, Aston JW, Lynch A, Lucky JJ, et al. Neuroprotective mechanisms of cerium oxide nanoparticles in a mouse hippocampal brain slice model of ischemia. Free Radic Biol Med. 2011;51(6):1155-63. 13.Palizvzn M, Khademi S, Ghazavi A, Mosayebi G. Correlation of two way active avoidance learning with Nitric Oxide and Ferric reduction/antioxidant power in rats. Arak Med Univ J. 2006;9(4):1-8.[In Persian].
14.Umarao P, Bose S, Bhattacharyya S, Kumar A, Jain S. Neuroprotective potential of superparamagnetic iron oxide nanoparticles along with exposure to electromagnetic field in 6-ohda rat model of parkinson's disease. J Nanosci Nanotechnol. 2016;16(1):261-9.
15.Pita-Thomas W, Steketee MB, Moysidis SN, Thakor K, Hampton B, Goldberg JL. Promoting filopodial elongation in neurons by membrane-bound magnetic nanoparticles. Nanomedicine. 2015;11(3):559-67.
