A Z O O S P E R M I E SI~CRI~TOIRE Andr010gie (2001), 11, n ~ 3, 127-132
L e s pr l vements
t e s t i c u l a i r e s d a n s l e s
a z o o s p e r m i e s s cr toires
: le p o i n t d e v u e d u
B i o l o g i s t e d e la R e p r o d u c t i o n s u r la l e c t u r e d u
pr l vement.
J. L O R N A G E , S. G I S C A R D D'ESTAING, H. L E J E U N E , M. B E N C H A I B , D. COTTINET, B. SALLE, D. B O U L I E U * , V. BIED-DAMON, S. H A D J , J.F. G U E R I N
D d p a r t e m e n t d e M d d e c i n e d e l a R e p r o d u c t i o n , * S e r v i c e d e G y n d c o l o g i e , H S p i t a l E d o u a r d - H e r r i o t , L y o n
R E S U M E
L e p r o n o s t i c d e s i n f e r t i l i t d s m a s c u l i n e s s ~ v ~ r e s , d o n t l e s a z o o s p e r m i e s s d c r ~ t o i r e s , s ' e s t c o n s i d ~ r a b l e m e n t a m ~ l i o r ~ c e s d e r - n i t r e s a n n ~ e s a v e c l a m i c r o i n j e c t i o n (ICSI). L e b i o l o g i s t e d e l a R e p r o d u c t i o n p a r t i c i p e a c t i v e m e n t , e n c o l l a b o r a t i o n a v e c le c h i r u r - g i e n /~ l a r e c h e r c h e e t r e x t r a c t i o n d e s s p e r - m a t o z o i d e s /l p a r t i r d u t i s s u t e s t i c u l a i r e ( T E S E ) .
L a p r e s e n c e d u b i o l o g i s t e a u b l o c o p ~ r a t o i r e e s t i m p e r a t i v e p o u r g u i d e r le c h i r u r g i e n e t d v i t e r d e s b i o p s i e s t r o p n o m b r e u s e s . L ' e x t r a c t i o n d e s s p e r m a t o z o i d e s a u l a b o r a t o i - r e s e f a i t l e p l u s s o u v e n t p a r e x t r a c t i o n m ~ c a - n i q u e e n d i l a c ~ r a n t le t i s s u e n f i n s l ~ m b e a u x l ' a i d e d e p i n c e s f i n e s . L ' e x t r a c t i o n e n z y m a - t i q u e fi l ' a i d e d e c o l l a g d n a s e d e t y p e I V p o u r - r a i t ~ t r e e m p l o y e e d a n s le c a s d e s a z o o s p e r - m i e s s ~ c r ~ t o i r e s a f i n d e m i e u x d i s s o c i e r l e s c e l l u l e s e t d ' a u g m e n t e r l e s c h a n c e s d e r d c u - p ~ r a t i o n d e f o r m e s m a t u r e s . L a p u r i f i c a t i o n d e s s p e r m a t o z o i d e s s u r f r a c t i o n 50 % d e P u r e S p e ~ ' m p e r m e t d e l i m i t e r l a p e r t e e n s p e r m a t o z o i d e s s u r d e s p r ~ l ~ v e m e n t s q u i s o n t s o u v e n t m o i n s c e l l u l a i r e s q u e d a n s l e s c a s d ' a z o o s p e r m i e e x c r f i t o i r e . L ' a d d i t i o n d e s t i m u l a n t d e l a m o b i l i t ~ ( t e l l e q u e l a P e n t o x i f y l l i n e ) o u l a c u l t u r e i n v i t r o p e n d a n t
L a c r y o p r ~ s e r v a t i o n d e s s p e r m a t o z o i d e s e s t o b l i g a t o i r e d a n s l a p r i s e e n c h a r g e d e c e s c a s d ' a z o o s p e r m i e , p e r m e t t a n t d e p r o g r a m m e r l a T E S E d e m a n i b r e a s y n c h r o n e p a r r a p p o r t ~ l a F I V - I C S I . L e s r ~ s u l t a t s d e c r y o c o n s e r v a t i o n d e s s p e r m a t o z o i d e s t e s t i c u l a i r e s o b t e n u s c e s d e r n i ~ r e s a n n ~ e s s o n t s a t i s f a i s a n t s . L a c o n g ~ - l a t i o n d e p l u s i e u r s f r a c t i o n s s p e r m a t i q u e s d e p e t i t v o l u m e s e r a i t /l p r i v i l ~ g i e r . II a p p a r a i t i m p o r t a n t d e d i m i n u e r l e s i n t e r v e n t i o n s c h i - r u r g i c a l e s s u r l e t e s t i c u l e .
N o u s p r ~ s e n t o n s b r i b v e m e n t n o t r e e x p e r i e n - c e s u r 36 c a s d ' a z o o s p e r m i e s ~ c r ~ t o i r e , d a n s 13 c a s l a r e c h e r c h e d e s p e r m a t o z o i d e s a ~t~ n ~ g a t i v e s o i t 36 % ; c ' e s t le t a u x q u i e s t r e t r o u - v~ d a n s l a l i t t ~ r a t u r e .
M o t s c l d s : a z o o s p e r m i e sdcrdtoire - e x t r a c t i o n - c o n g d l a t i o n - s p e r m a t o z o ~ d e s t e s t i c u l a i r e s
I. I N T R O D U C T I O N
Les azoospermies s~cr~toires sont caract~ri- s~es par u n e alteration de la production ou de la m a t u r a t i o n des spermatozoides. Elles peu- v e n t ~tre primaires, les ~tiologies sont souvent i n c o n n u e s mais les causes g~n~tiques recher- ch~es en priorit~ (anomalies chromosomiques, microd~l~tions du chromosome Y). Elles peu- v e n t ~tre secondaires ~ certaines pathologies acquises (infections, t r a u m a t i s m e ) , ou ~ des t r a i t e m e n t s (chimio ou radioth~rapie).
La classification histologique des azoosper- m i e s s~cr~toires selon Levin [9], est impor- t a n t e car elle p e r m e t de pr~dire la presence ou non de s p e r m a t o z o i d e s : arr~ts de m a t u r a - t i o n plus ou m o i n s pr~coces, scl~roses t u b a i r e s , s y n d r o m e des cellules de Sertoli seules, hypoplasie des cellules de la lign~e g e r m i n a l e (hypospermatog~n~se). C e p e n d a n t il p e u t d e m e u r e r des foyers isol~s de sperma- togen~se qui ne sont pas retrouv~s ~ l'examen histologique qui se fait le plus s o u v e n t sur u n e seule biopsie.
D~s 1995, Devroey et al. [5] o b t e n a i e n t ]es pre- m i e r e s n a i s s a n c e s apr~s microinjection de spermatozoides obtenus ~ p a r t i r de biopsies testiculaires dans les cas d'azoospermie s~cr~- toire. La t e c h n i q u e d'extraction des spermato- zoi'des ~ partir de biopsie testiculaire (TESE) s'est alors d~velopp4e e t a r~volutionn~ le trai- t e m e n t de l'azoospermie s~cr~toire. L'objectif du biologiste de la Reproduction est de retrou- ver des formes m a t u r e s en quantit~ suffisante pour r~aliser une f~condation in vitro (FIV) avec m i c r o i n j e c t i o n i n t r a c y t o p l a s m i q u e (ICSI). Ce geste est ~ la lois diagnostique et th~rapeutique.
Nous pr~sentons dans u n e p r e m i e r e partie les diff~rentes techniques utilis~es pour l'extrac- tion des spermatozo~des testiculaires dans les cas plus particuliers d'azoospermies s~cr~- toires puis nous donnons des r~sultats pr~limi- naires sur notre experience d a n s notre ~quipe. Nous abordons aussi l'int~r~t de la cong~lation des spermatozoides testiculaires dans ces cas d'azoospermie s~cr~toire.
II. M E T H O D E S D E R E C U E I L E T D ' E X T R A C T I O N D E S
S P E R M A T O Z O I D E S T E S T I C ~ R E S
1. L e t e m p s o p ~ r a t o i r e
Les pr~l~vements testiculaires sont r~alis~s au bloc op~ratoire soit de mani~re asynchrone, soit de m a n i ~ r e s y n c h r o n e coupl~e h une Assistance M~dicale h la Procreation (AMP). Deux g r a n d e s t e c h n i q u e s chirurgicales sont employees a c t u e l l e m e n t : biopsies testiculaires multiples h ciel ouvert et les ponctions testicu- laires m u l t i p l e s p e r - c u t a n ~ e s h l'aiguille. C e p e n d a n t , les t e c h n i q u e s de biopsie avec microdissection des tubes s~miniferes les plus larges et les plus opaques s e m b l e n t ~tre de plus en plus privil~gi~es dans les cas d'azoo- spermie non-obstructive [14].
La presence du biologiste au bloc op~ratoire est essentielle, il guide le chirurgien en e x a m i n a n t de mani~re extemporan~e, les pr~l~vements testiculaires : quelques tubules s~miniferes sont pr~lev~s et dilac~r(is puis examines sous le microscope. U n e biopsie plus large est faite dans le territoire o5 les spermatozoides ont ~t~ mis en ~vidence [13]. De cette mani~re, 1 h 4 biopsies p e u v e n t ~tre r~alis~es sur chaque tes- ticule : 2 biopsies au pSle sup~rieur, 2 biopsies au pSle inf~rieur (soit u n e biopsie sur chaque cadran du testicule). Les biopsies sont rinc~es d a n s le s~rum physiologique afin d'~viter d'avoir trop d'h~maties dans nos preparations de spermatozoides, puis elles sont plac~es dans de petits tubes en polypropyl~ne dans un milieu de survie des spermatozoides h tempe- rature d'environ 25 ~ Au bloc op~ratoire, les biopsies sont dilac~r~es h l'aide de ciseaux fins : ceci va p e r m e t t r e la sortie des spermato- zoi'des p e n d a n t le t r a n s p o r t vers le laboratoire.
2. E x t r a c t i o n d e s s p e r m a t o z o i d e s a u l a b o r a t o i r e
9 La t e c h n i q u e la plus courante est rextrac- tion m ~ c a n i q u e en dilac~rant les tubes s~mi- nif'eres. P o u r a u g m e n t e r le nombre total de s p e r m a t o z o i d e s qui p e u t 6tre extrait d'une biopsie t e s t i c u l a i r e , 4 m~thodes m6caniques de p r e p a r a t i o n ont 6t~ compar~es [141 :
1. les l a m b e a u x grossiers de biopsies sont ~cras6s e n t r e deux lames en verre (tech- nique contrSle),
2. les l a m b e a u x sont plus f i n e m e n t dilac~r6s l'aide de deux pinces fines,
3. les l a m b e a u x sont agit~s ~ l'aide d ' u n vor- tex,
4. les l a m b e a u x sont 6cras~s ~ l'aide d'un potter ~lectrique.
De plus, V e r h e y e n et al. [18] u t i l i s a i e n t u n t a m p o n de lyse des ~rythrocytes apr~s dilac~- ration des t u b e s s6minif'eres, ceci p e r m e t t a n t d'am61iorer la l e c t u r e du pr~l~vement en dimi- n u a n t les ~rythrocytes. Apr~s extraction m~ca- nique, peu de differences ont ~t~ raises en ~vi- dence e n t r e les 4 t e c h n i q u e s : les n o m b r e s totaux de spermatozo~des extraits ~taient com- parables, il y a v a i t c e p e n d a n t plus de sperma- tozo~des v i v a n t s apr6s la technique contr6le et la t e c h n i q u e de dilac~ration en fins lambeaux.
9 L'extraction e n z y m a t i q u e ~ l'aide de la colla- g6nase de type IV est employee d a n s |es cas d'hypospermatog6n~se s6v~re l o r s q u ' a u c u n ou peu de spermatozoides sont retrouv~s apr~s l'extraction m~canique [4]. Cette tech- nique e n z y m a t i q u e p e r m e t un m e i l l e u r ren- d e m e n t en cellules intactes avec des altera- tions r 6 d u i t e s de la m e m b r a n e cellulaire en c o m p a r a i s o n avec les t e c h n i q u e s m6ca- niques. D a n s cette ~tude, les a u t e u r s ont compar6 les collag~nases type IA et type IV, ils ont o b t e n u de m e i l l e u r s r6sultats avec la collag~nase type IV qui p e r m e t u n e digestion du tissu t e s t i c u l a i r e avec un t a u x de viabili- t~ des c e l l u l e s g e r m i n a l e s plus ~lev~. L'addition d'~lastase ~ la collag~nase type IV n ' a u g m e n t e pas la digestion du tissu testicu- laire et donc le t a u x de r~cup6ration de sper- matozo~des ~ p a r t i r des biopsies. De plus, il
3 . P u r i f i c a t i o n d e s s p e r m a t o z o i d e s l'aide d'un g r a d i e n t de d i s c o n t i n u d e d e n s i t ~
Cette ~tape p e r m e t d'isoler les s p e r m a t o z o i d e s de morphologie n o r m a l e et d'initier l e u r mobi- lit6.
Dans les cas trop limites en n o m b r e de sper- matozo~des, u n e t e c h n i q u e de lavage seule est r~alis~e a v a n t l'injection du spermatozo~de d a n s le cytoplasme de l'ovocyte.
Lorsque le pr~l~vement est tr~s fiche en cel- lules, il ~tait n~cessaire de r~aliser u n g r a d i e n t discontinu (95 % - 47,5 %) sur deux couches de Percoll, C e p e n d a n t u n e perte i m p o r t a n t e en spermatozoides d'environ 90%, ~tait observ6 par les a u t e u r s 118]. La m~thode m~canique de dilac6ration en fins l a m b e a u x associ~e ~ u n g r a d i e n t de Percoll a donn~ le m e i l l e u r r e n d e - m e n t en n o m b r e t o t a l de s p e r m a t o z o i d e s mobiles et en p o u r c e n t a g e de formes n o r m a l e s . Ce proc~d~ p e r m e t d'isoler u n e fraction tr~s enrichie en spermatozoYdes. C e p e n d a n t d a n s le cas d'azoospermie s6cr6toire, les s u s p e n s i o n s recueillies sont b e a u c o u p moins riches en cel- lules et nous ne pouvons pas nous p e r m e t t r e d'avoir u n e p e r t e en s p e r m a t o z o i d e s a u s s i i m p o r t a n t e . C l a s s i q u e m e n t , dans notre 6quipe, nous utilisons u n e couche de P u r e S p e r m (JC Diffusion, S c a n d i v i a n IVF Science, Lyon, France) 50 % qui p e r m e t d'isoler les cellules les plus petites et d ' e n r i c h i r la fraction en s p e r m a - tozo~des. De cette mani~re, la perte en s p e r m a - tozoides est limit~e.
L'initiation de la mobilit6 est r6alis~e en lais- s a n t i n c u b e r d a n s l'~tuve ~ 37~ sous 5% de CO 2 p e n d a n t 1 ~ 2 h e u r e s . L'injection de sper- matozoides immobiles e n t r a i n e u n e c h u t e dra- m a t i q u e du t a u x de f6condation [3]. D a n s les cas d'akin6sie totale des spermatozo~des, soit u n test hypoosmotique, soit l'addition de sti- m u l a n t tel que la pentoxifylline, soit la c u l t u r e in vitro p e u v e n t ~tre propos6s.
t e n i r u n t a u x de f~condation h 30 % et 2 gros- sesses. Ce t e s t est d'utilisation facile et p e r m e t r o b t e n t i o n de grossesses.
L'utilisation de Pentoxifylline p e r m e t d'aug- m e n t e r r a p i d e m e n t la mobilit~ des spermato- zoides t e s t i c u l a i r e s et d'obtenir des grossesses l o r s q u ' a u c u n e mobilit~ n'~tait o b t e n u e apr~s p r e p a r a t i o n [8, 11]. S u r 10 ~chantillons test~s, incubus p e n d a n t 10 m i n u t e s avec 3,6 M de Pentoxifylline, la mobilit~ des spermatozoides ~tait toujours initi~e avec u n e mobilit~ moyen- ne de 13,6 % p o u r les ~chantillons de sperma- tozoides t e s t i c u l a i r e s , , frais ~ ou apr~s cong~-
lation [17]. Les a u t e u r s n'ont pas montr~ de difference s u r l'~volutivit~ des e m b r y o n s et r o b t e n t i o n de grossesses e n t r e le groupe de spermatozoides ~ p i d i d y m a i r e s ou t e s t i c u l a i r e s immobiles, avec u n e mobilit~ i n i t i ~ e p a r la Pentoxifylline et le groupe t~moin qui m o n t r e u n e mobilit~ s p o n t a n ~ e apr~s p r e p a r a t i o n . C e p e n d a n t , afin d'~viter l'addition de stimu- l a n t d a n s les p r e p a r a t i o n s de spermatozoides testiculaires en vue d'ICSI, d ' a u t r e s ~quipes pr~conisent la c u l t u r e in vitro h 37~ p e n d a n t 48 h 96 h e u r e s pour i n i t i e r la mobilit~ de m a n i ~ r e c o m p a r a b l e h l'action de la Pentoxifylline p e n d a n t 30 m i n u t e s [2]. Cette t e c h n i q u e p o u r r a i t ~tre envisag~e lorsque les ovocytes ne sont pas i m m ~ d i a t e m e n t pr~ts pour la f~condation.
De plus, d a n s les cas d'azoospermie obstructi- ve, la c u l t u r e in vitro s u r 3 j o u r s a p p a r a i t don- n~e des r ~ s u l t a t s s a t i s f a i s a n t s en t e r m e de qualit~ de I'ADN avec u n e a u g m e n t a t i o n des spermatozoides m o n t r a n t u n ADN double brin de 22 % h 50 % en u t i l i s a n t u n e coloration l'Acridine O r a n g e . C e p e n d a n t d a n s le cas d ' a z o o s p e r m i e s~cr~toire, il n'y a u r a i t pas d'am~lioration [6].
Dans u n p r o g r a m m e d'Assistance M~dicale la Procreation, l'addition de s t i m u l a n t appa- r a i t ~tre la solution la plus r a p i d e pour obtenir des s p e r m a t o z o ~ d e s mobiles. D a n s le cas d'azoospermie s~cr~toire, la c u l t u r e in vitro n'a pas prouv~ son efficacit~.
III. M E T H O D E S D E C R Y O C O N S E R V A - T I O N D E S S P E R M A T O Z O I D E S
T E S T I C ~ R E S
Le but de la cong~lation des spermatozoides est d'~viter des ponctions testiculaires it~ra- tives dans le cadre d ' u n e Assistance M~dicale la Procreation. La fraction exc~dentaire de spermatozoides isol~s l o r s q u ' u n e FIV a ~t~ pro- g r a m m ~ e en s y n c h r o n e ou la fraction totale de spermatozoides d a n s les cas a s y n c h r o n e s sont congel~s selon le protocole s t a n d a r d en utili- s a n t le glycerol c o m m e c r y o p r o t e c t e u r . P l u s i e u r s ~quipes ont m o n t r ~ des r~sultats t o u t h fait c o m p a r a b l e s e n t a u x de f~condation, de s e g m e n t a t i o n et en obtention de grossesses en u t i l i s a n t des s p e r m e s t e s t i c u l a i r e s soit ,, frais ~, soit congel~s d a n s le cas d'azoospermie non obstructive [12, 3, 7]. Afin de r~duire la quantit~ de s p e r m a t o z o i d e s congelds dans u n e m~me unit~, il a ~t~ propos~ de congeler les s p e r m a t o z o i d e s d a n s d e s zones p e l l u c i d e s d'ovocytes vides [19]. D e u x n a i s s a n c e s de j u m e a u x et u n e grossesse u n i q u e ont ~t~ obte- n u e s dans cette ~tude.
IV. R E S U L T A T S
Trente six biopsies t e s t i c u l a i r e s , dans le cas d'azoospermie s~cr~toire, ont ~t~ programm~es dans notre c e n t r e : 26 cas p u r e m e n t s~cr~toires et 10 cas d'origine mixte, h la fois excr~toires et s~cr~toires.
D a n s 19 cas (53 %), la r e c h e r c h e de spermato- zoides a ~t~ positive et u n e FIV avec micro- injection, a pu ~tre r~alis~e soit de m a n i ~ r e a s y n c h r o n e soit de m a n i ~ r e synchrone.
D a n s 13 cas (36 %), la r e c h e r c h e de spermato- zoides a ~t~ n~gative ; u n e seule a ~t~ r~alis~e en synchrone. D a n s ce d e r n i e r cas, u n e biopsie avec ~tude a n a t o m o p a t h o l o g i q u e a v a i t ~t~ faite les ann~es pr~c~dentes et m o n t r a i t la p r e s e n c e de r a r e s s p e r m a t o z o i d e s d a n s quelques tubes s~minif'eres.
o n t r e n o n c ~ h l ' e x p l o r a t i o n t e s t i c u l a i r e a p r ~ s a v o i r v u l ' e n s e m b l e d e l ' ~ q u i p e y c o m p r i s le bio- l o g i s t e . D ' a u t r e s c a s d ' a b a n d o n s , e t o r i e n t a t i o n v e r s l ' a d o p t i o n ou le d o n de s p e r m e o n t l i e u h l a s u i t e d e l ' i n v e s t i g a t i o n a n d r o l o g i q u e i n i t i a l e .
D a n s u n d e r n i e r c a s , l ' e x p l o r a t i o n n ' a p a s enco- r e ~t~ r ~ a l i s ~ e .
N o u s a v o n s o b t e n u 3 g r o s s e s s e s d o n t 2 gros- s e s s e s g ~ m e l l a i r e s s u r 20 c y c l e s r~alis~s. L a d e r n i S r e g r o s s e s s e a ~t~ o b t e n u e h p a r t i r d e s p e r m a t o z o i d e s t e s t i c u l a i r e s congel~s.
D a n s les 13 c a s d ' a b s e n c e de s p e r m a t o z o i d e s a u c o u r s d e l a T E S E , n o u s a v i o n s 6 c a s d ' i n v o - l u t i o n s e r t o l i e n n e t o t a l e , u n s y n d r o m e de cel- l u l e s de S e r t o l i s e u l e s , 6 b l o c a g e s a u s t a d e s p e r m a t o c y t a i r e . D a n s 3 cas, il e x i s t a i t u n e m i c r o d ~ l ~ t i o n d a n s u n e d e s r ~ g i o n s A Z F e t d a n s u n c a s , u n e a n o m a l i e c h r o m o s o m i q u e : t r a n s l o c a t i o n 9 ;19.
V. C O N C L U S I O N
I1 n ' e x i s t e p a s de c r i t ~ r e s p r ~ d i c t i f s de la p r e - s e n c e d e s p e r m a t o z o i d e s d a n s l e s t u b e s s~mi- nif'eres q u i p e r m e t t r a i e n t de t r a n c h e r e n t r e les p r ~ l ~ v e m e n t s s y n c h r o n e s d ' u n e A M P ou a s y n - c h r o n e s . L a b i o p s i e t e s t i c u l a i r e , a v e c e x t r a c - t i o n d e s s p e r m a t o z o i d e s r e s t e la t e c h n i q u e l a p l u s f i a b l e p o u r d ~ c i d e r d ' u n e I C S I . D a n s l e s c a s d ' a z o o s p e r m i e s ~ c r ~ t o i r e ( F S H ~lev~e, volu- m e t e s t i c u l a i r e r ~ d u i t ) , l a r d a l i s a t i o n de l a p o n c t i o n t e s t i c u l a i r e a v e c u n e ~ t a p e de cryo- c o n s e r v a t i o n d e s s p e r m a t o z o i d e s e s t a c t u e l l e - m e n t p r i v i l ~ g i ~ e d a n s n o t r e ~ q u i p e .
C e t t e t e c h n i q u e e x i g e u n e ~ t r o i t e c o l l a b o r a t i o n e n t r e le c h i r u r g i e n e t le b i o l o g i s t e a i n s i q u e l ' ~ q u i p e g y n ~ c o l o g i q u e l o r s q u ' u n e A M P e s t pro- g r a m m ~ e e n s y n c h r o n e . I1 e s t t r ~ s i m p o r t a n t d ' ~ v i t e r d e r ~ p ~ t e r c e s b i o p s i e s t e s t i c u l a i r e s . T a s h e t S c h l e g e l [16] o n t m o n t r ~ q u e la T E S E e n t r a i n e u n e d i m i n u t i o n d u v o l u m e d e s t u b e s s ~ m i n i f ' e r e s a u t o u r d u s i t e de l a biopsie. U n i n t e r v a l l e m i n i m u m d e 6 m o i s [1] e s t p r ~ c o n i s ~ e n t r e d e u x b i o p s i e s t e s t i c u l a i r e s p o u r u n e b o n n e c i c a t r i s a t i o n . D e p l u s , a u c o u r s de la chi- r u r g i e p o u r l ' e x t r a c t i o n t e s t i c u l a i r e d e s s p e r - m a t o z o Y d e s ( T E S E ) , il f a u t r ~ d u i r e a u m a x i -
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d u c t i o n o f ICSI. T h e h i l m a n r e p r o d u c t i o n bio- l o g i s t a c t i v e l y c o l l a b o r a t e s w i t h t h e s u r g e o n in t h e s e a r c h f o r a n d e x t r a c t i o n o f s p e r m f r o m t e s t i c u l a r t i s s u e (TESE).
T h e p r e s e n c e o f t h e b i o l o g i s t d u r i n g s u r g e r y is m a n d a t o r y t o g u i d e e x p l o r a t i o n a n d t o a v o i d an e x c e s s i v e n u m b e r o f b i o p s i e s . S p e r m e x t r a c t i o n is p e r f o r m e d i n t h e l a b o r a t o r y b y m e c h a n i c a l e x t r a c t i o n w i t h f i n e f o r c e p s . E n z y m a t i c e x t r a c t i o n w i t h c o l l a g e n a s e IV c a n b e u s e d i n c a s e s o f n o n o b s t r u c t i v e a z o o s p e r - m i a t o o p t i m i z e t i s s u e d i s p e r s i o n a n d t o i m p r o v e r e t r i e v a l o f m a t u r e cells. T h e u s e o f o n l y o n e f r a c t i o n (50%) o f P u r e S p e r m (JC D i f f u s i o n , L y o n F r a n c e ) l i m i t s t h e l o s s o f sper- m a t o z o a . To o p t i m i z e t h e r e s u l t s i n c a s e s o f a k i n e s i a , it m a y b e u s e f u l , t o i n d u c e s p e r m m o t i l i t y b y p e n t o x i f T l l i n e o r p e r f o r m i n v i t r o c u l t u r e f o r t h r e e d a y s .
S p e r m c r y o p r e s e r v a t i o n is c o m p u l s o r y i n t h e c a s e o f n o n o b s t r u c t i v e a z o o s p e r m i a . T h i s a l l o w s p r o g r a m m i n g o f T E S E f o r a d i f f e r e n t t i m e f r o m t h a t o f ICSI. All r e s u l t s o b t a i n e d w i t h c r y o p r e s e r v e d t e s t i c u l a r s p e r m , i n r e c e n t y e a r s , a r e e n c o u r a g i n g . It i s a l s o r e c o m m e n d e d t o f r e e z e s e v e r a l s m a l l frac- t i o n s o f s p e r m i n o r d e r t o l i m i t t h e n u m b e r o f s u r g i c a l p r o c e d u r e s o n t h e t e s t i c l e . T h i s a r t i c l e p r e s e n t s t h e r e s u l t s o f o u r e x p e r i e n c e i n 36 c a s e s o f n o n o b s t r u c t i v e a z o o s p e r m i a . E x t r a c t i o n w a s n e g a t i v e i n 13 c a s e s (36%), s i m i l a r to t h e r a t e r e p o r t e d i n t h e l i t e r a t u r e .
K e y - W o r d s : N o n o b s t r u c t i v e a z o o s p e r m i a - e x t r a c -
t i o n - c r y o p r e s e r v a t i o n - t e s t i c u l a r s p e r m
A B S T R A C T
T h e t e s t i c u l a r s p e r m e x t r a c t i o n i n m e n w i t h n o n o b s t r u c t i v e a z o o s p e r m i a : t h e r e p r o d u c - t i o n b i o l o g i s t ' s p o i n t o f v i e w o n i n t e r p r e t a -
t i o n o f b i o p s i e s .
L O R N A G E J., G I S C A R D D ' E S T A I N G S., L E J E U - N E H., B E N C H A I B M., C O T T I N E T D., S A L L E B.,
B O U L I E U D., H A D J S., G U E R I N J.F.
