El California Mastitis Test (CMT) estima el número de células somáticas de la leche y puede realizarse al pie de la vaca para detectar mastitis. Los valores del CMT se relacionan con el número de células somáticas en la leche. El número es alto porque las células somáticas migran de la sangre hacia la leche como respuesta a la infección. Cuanto más severa es la infección, mayor será el número de células somáticas.
Cuando el mismo supera las 200.000/mL, estamos en presencia de condiciones anormales en la ubre. El número de células somáticas en la leche tiende a crecer durante el ordeño y permanece alto durante varias horas. Por eso, para obtener resultados confiables, el CMT debe realizarse justo antes del ordeño, pero después de la estimulación y el despunte.
El reactivo del CMT es un detergente que reacciona con el material nuclear de las células somáticas formando un gel. A mayor presencia de células se libera una mayor concentración de ADN, por lo tanto mayor será la formación del gel, traduciéndose en nuestra lectura e interpretación del resultado como el grado más elevado de inflamación. Es decir,
60 permite determinar la respuesta inflamatoria con base en la viscosidad del gel que se forma al mezclar el reactivo (púrpura de bromocresol) con la leche, permitiendo evaluar cada cuarto independientemente. Esta reacción se clasifica en 0, T (Trazas), 1, 2, ó 3 dependiendo de la cantidad de gel formado. Muchos productores prefieren utilizar el sistema simplificado de: negativo para ausencia o trazas de gel, sospechoso para algo de formación de gel y positivo para gelificación marcada.
Escala de CMT Rango relativo del nivel de células somáticas (cs/mL) Negativo <200.000 Trazas 150.000 - 500.000 1 400.000 - 1.500.000 2 800.000 - 5.000.000 3 >5.000.000
Las investigaciones han demostrado que las reacciones del CMT se correlacionan bien con el promedio del número de células en la leche.
El CMT es un método de diagnóstico que posee una sensibilidad del 97% y una especificidad del 93%. Es valioso para detectar infecciones subclínicas que, de no realizarse, podrían pasar por desapercibidas hasta alcanzar un estado más avanzado o clínico. Sin embargo, el CMT no señala qué vacas deben ser tratadas.
Pasos a seguir para la realización de la Prueba de California para Mastitis: 1. Se desecha la leche del pre-ordeño.
2. Se ordeñan uno o dos chorros de leche de cada cuarto en cada una de las placas de la paleta.
3. Se inclina la paleta de modo que se desecha la mayor parte de esta leche. 4. Se añade a la leche un volumen igual de reactivo.
5. Se mezcla el reactivo y se examina en cuanto a la presencia de una reacción de gelificación. Antes de continuar con la vaca siguiente se debe enjuagar la placa.
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Prueba de Wisconsin para Mastitis (WMT)
La Prueba de Wisconsin para mastitis (WMT), fue diseñada para el uso en el laboratorio, y es utilizada para estimar el contenido de células somáticas de muestras de leche fresca mezclada o leche de tanques de enfriamiento, así como para muestreo de vacas individuales. Se utiliza una solución similar a la que se emplea con la prueba de California (CMT), pero en contraste con esta última, los resultados se miden cuantitativamente dependiendo de la viscosidad, no cualitativamente o de estimarla como en el CMT.
La técnica consiste en utilizar un tubo graduado en milímetros en donde se depositan 2 mL de leche y una mezcla de 2 mL de reactivo para CMT con agua destilada (1:1) ambas a temperatura ambiente. Enseguida se agita durante 10 segundos, horizontalmente y de izquierda a derecha. Se deja reposar 10 segundos y posteriormente se invierten los tubos durante otros 10 segundos.
Una vez transcurrido el tiempo, se procede a realizar la lectura en el tubo por debajo de la espuma que se forma. Los resultados se relacionan con la escala graduada en mililitros del tubo y su valor de células somáticas, empleando para su interpretación una tabla específica para la prueba.
Referencias. Procedimiento WMT para el diagnóstico de la mastitis subclínica.
Método de Prescott - Breed
El recuento microscópico directo se realiza comúnmente sobre una muestra de leche. Para obtener el perfil de un rodeo debemos considerar una serie de muestras con intervalos de 15 o 30 días.
Se hacen dos extendidos sobre un portaobjetos limpio y desengrasado. Se trabaja con 0,01 mL de leche que extendemos sobre una superficie de 1cm2. Se seca, se desengrasa, se colorea y se hace el recuento con objetivo de inmersión (100 X). De cada uno de los dos
3ml leche + 3ml de reactivo,
dejar reposar 15 segundos Agitación durante 10 segundos
62 extendidos de 1 cm2 en un portaobjetos, se cuentan entre 20 y 50 campos (la mitad en forma horizontal y la otra mitad en forma vertical). Por lo tanto de cada muestra de leche contamos entre 40 y 100 campos microscópicos.
El total de las células somáticas contadas se dividen por el número de campos microscópicos contados para obtener el promedio de células somáticas por campo. Ese promedio se multiplica por el factor microscópico y así obtenemos el número de células somáticas por ml de leche.
Como reactivos se pueden utilizar tanto la solución Breed como la solución alcohólica de azul de metileno.
Referencias. Método de Breed. Observación microscópica. Con flechas se indica células somáticas y bacterias.
Método Somaticell
Es un método que puede ser utilizado para analizar la leche proveniente de una o muchas vacas. En el caso de las muestras individuales de leche, se determina la probablidad de la presencia de mastitis Se utiliza un kit con un procedimiento similar al de la prueba de WMT.
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