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Part II. Key Components and Stages of M&E Systems

10. Baseline Surveys and Data Management

10.4 Data collection process

Con la finalidad de indicar en los perfiles cromatográficos el o los picos potencialmente responsables de la actividad antiinflamatoria de las muestras, el coeficiente de regresión antes y después del alineamiento entre especies fue evaluado (Figura 16). Picos de metabolitos potencialmente responsables corresponden a picos negativos en el coeficiente de regresión.

Estudio del coeficiente de regresión de los perfiles no-alineados resulto en la indicación de 8 picos principales (8.15, 16.52, 16.77, 17.68, 17.82, 19.78, 19.93 y 27.03 minutos) señalados con (

), así como otros de menor intensidad que también contribuyen con la actividad observada. Además, se encontró que los picos indicados en los perfiles no-alineados eran parecidos a los identificados en el modelo construido con los perfiles alineados (

), tomando en cuenta pequeñas fluctuaciones en los tiempos de retención debido al proceso de alineamiento. Es importante mencionar, además, que en este último se observó la presencia de picos

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adicionales (

), cuyo origen está relacionado con el des-alineamiento visto durante el alineamiento entre especies (Figura Y. Alineamiento entre 8 especies); motivo por el cual se consideró conveniente realizar sólo la interpretación de los perfiles no- alineados. Lo anterior indica que el alineamiento de especies sin información analítica adicional, introduce una alta probabilidad de alinear información no correspondiente.

En la Figura 17 se observan los perfiles cromatográficos de S. microphylla y S. albiflora, las dos especies con mayor actividad antiinflamatoria a dosis de 2 mg/oreja (no se incluye a S. lasiocephalla con actividad similar a S. albiflora) graficadas junto con el coeficiente de regresión OPLS. Para ambas especies, se observó coincidencia en los picos potencialmente antiinflamatorios a 16.77, 19.93, 22.83 y 28.67 minutos; adicionalmente, S. microphylla presento dos picos más, uno al minuto 16.52 y otro al 27.03. La mayor actividad antiinflamatoria de S. microphylla puede estar relacionada a una interacción (e.g. efecto aditivo o sinergia) positiva entre los metabolitos de los picos adicionales y los otros metabolitos indicados. Los perfiles químicos observados para estas dos especies, señalan una probable semejanza en cuanto a metabolitos con actividad antiinflamatoria. Análisis fitoquímicos de S. albiflora serían de particular importancia, debido a que actualmente no se cuenta con reportes para esta especie.

En la Figura 18 se comparan las especies con actividad media, esto es, S. misella, S. coccinea y S. mocinoi con el coeficiente OPLS. En S. mocinoi sólo se visualizaron 4 picos activos a los minutos 18.52, 19.93, 20.23 y 28.67. La muy baja concentración observada en los primeros tres picos es posiblemente la causa de su menor actividad respecto a las otras dos especies. Para S. coccinea solamente se identificaron 3 picos a los minutos 14.42, 14.60 y 28.98; este último, aunque ligeramente más adelantado que su pico correspondiente en el coeficiente, fue tomado en cuenta por presentar un patrón similar al resto de las especies en la sección comprendida entre los minutos 27.97 a 29.40 (ver Figura 9). Pese a sólo presentar 3 picos potencialmente activos, la actividad antiinflamatoria observada fue buena (48.95%), probablemente el pico a 14.42 min presente solamente en esta

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especie y S. purpurea intervenga en mayor medida. En relación a S. misella se identificaron 5 picos potencialmente activos a los minutos 9.25, 12.22, 20.38, 22.83 y 28.67, los últimos dos picos presentes también en S. microphylla y albilfora. Cabe mencionar que esta especie fue la única en presentar dos picos (9.25 y 12.22) con carácter más polar respecto al resto de picos señalados en las demás especies, considerando el gradiente de elución empleado.

En el Figura 19 se visualizan los cromatogramas de las tres especies con menor actividad antiinflamatoria, es decir, S. tiliifolia, S. purpurea y S. xalapensis, así como el coeficiente de regresión. En S. tiliifolia fue posible apreciar 4 picos con potencial actividad a los minutos 16.77, 17.55, 22.83 y 28.67. La notable concentración en el primer pico permite inferir una mayor participación respecto a los otros constituyentes en la actividad observada. Para S. purpurea se observaron 5 picos activos a los minutos 16.40, 16.53, 19.93, 22.83 y 28.67. Respecto a S. xalapensis se identificaron 9 picos potenciales a los 8.15, 16.52, 17.68, 17.82, 18.53, 19.78, 22.83, 27.03 y 28.67 minutos. Los resultados para estas dos últimas especies sugerían una mayor actividad antiinflamatoria en el modelo de inflamación aguda; sin embargo, biológicamente no fue así. La notable menor actividad para estas dos especies, permite suponer la presencia de constituyentes con actividad antagónica a las moléculas activas, ya que como se sabe moléculas con similar estructura química, bioquímicamente pueden competir por el mismo sitio de unión a un blanco, o interaccionar entre ellas, con una consecuente disminución del efecto farmacológico.

De acuerdo a los tiempos de retención observados para los picos potencialmente activos, es posible considerar que moléculas con polaridad media como terpenos y flavonoides previamente reportados en diversas especies de Salvia, son las responsables de la actividad antiinflamatoria observada. Algunos de estos metabolitos aislados también en otras plantas han sido probados en el mismo modelo del presente trabajo con buenos resultados; por ejemplo el ácido ursólico (AU) y su isómero estructural el ácido oleanólico (AO) cuya actividad antiinflamatoria fue demostrada por N. Banno et al. (2004)[109] al inhibir el edema auricular en un

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90 y 73% respectivamente. AU ha sido reportado para las especies de S. mic[67],

S. pur[77], y S. xal[78], mientras AO en S. mic[70], y S. pur[77].

Otro metabolito con propiedades antiinflamatorias es el diterpeno 10β- hidroxilinearolactona, aislado de hojas y flores en S. mic por Bautista Redonda F.E, (2012)[75]. Dicho terpeno mostró un efecto inhibitorio del 54.26% en el modelo de TPA. Adicionalmente S. mic[67],S. pur[77] y S. coc[84] presentan el metabolito β-

sitosterol, del cual se han realizado numerosos estudios validando su acción antiinflamatoria, uno de ellos fue el efectuado por Backhouse N, 2007[110]. En dicho estudio se demostró el potente efecto inhibitorio del β-sitosterol al ser aplicado tópicamente en el modelo ya comentado, obteniendo valores de inhibición de 83.7%. Dos metabolitos más con probada actividad son el betulinol y ácido betulínico, triterpenos presentes en S. coc[84], S. xal[78], y S. purpurea[77], I. Huguet et al. (2000)[111] evaluaron su efecto antiinflamatorio en el mismo modelo de TPA, encontrando porcentajes de inhibición del 45 y 48% respectivamente. Finalmente y considerando los resultados de trabajos realizados previamente por C. Tistaert et al. (2011, 2012)[59,62], en los cuales identificaron diversas moléculas con probada actividad antioxidante (mallananoside A y B, quercetina y kaempferol 7-O-ramnósido) [60,61] y citotóxica (malloapelta A y B) respectivamente, mediante el modelo de regresión OPLS, se puede considerar la utilidad del modelo en la determinación de metabolitos bioactivos.

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Figura 16. Coeficiente de regresión antes y después del alineamiento -0.21 -0.16 -0.11 -0.06 -0.01 0.04 0.09 0.14 0.19 0.24 0.02 0.72 1.42 2.12 2.82 3.52 4.22 4.92 5.62 6.32 7.02 7.72 8.42 9.12 9.82 10.52 11.22 11.92 12.62 13.32 14.02 14.72 15.42 16.12 16.82 17.52 18.22 18.92 19.62 20.32 21.02 21.72 22.42 23.12 23.82 24.52 25.22 25.92 26.62 27.32 28.02 28.72 29.42 30.12 30.82 31.52 32.22 32.92 33.62 34.32 35.02 35.72 36.42 37.12 37.82 38.52 39.22 39.92 AU -0.26 -0.16 -0.06 0.04 0.14 0.24 0.02 0.72 1.42 2.12 2.82 3.52 4.22 4.92 5.62 6.32 7.02 7.72 8.42 9.12 9.82 10.52 11.22 11.92 12.62 13.32 14.02 14.72 15.42 16.12 16.82 17.52 18.22 18.92 19.62 20.32 21.02 21.72 22.42 23.12 23.82 24.52 25.22 25.92 26.62 27.32 28.02 28.72 29.42 30.12 30.82 31.52 32.22 32.92 33.62 34.32 35.02 35.72 36.42 37.12 37.82 38.52 39.22 39.92 AU Especies no alineadas Especies alineadas min min

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Figura 17. Perfiles cromatográficos de S. microphylla y S. albiflora vs coeficiente de regresión.

0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 min AU S. microphylla S. albiflora OPLS

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Figura 18. Perfiles cromatográficos de S. coccinea, S. misella y S. mocinoi vs coeficiente de regresión.

0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 min AU OPLS S. coccinea S. mocinoi S. misella

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Figura 19. Perfiles cromatográficos de S. purpurea, S. xalapensis y S. tiliifolia vs coeficiente de regresión.

OPLS S. tiliifolia S. purpurea S. xalapensis min 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 AU

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9. Conclusiones

Habiéndose llevado a cabo tanto la evaluación farmacológica como los análisis quimiométricos (PCA y OPLS) para los extractos etanólicos de las nueve especies del género Salvia, colectadas en Xalapa y municipios aledaños, es posible concluir lo siguiente:

Todas las especies de Salvia presentaron diferencia estadística significativa cuando se aplicaron tópicamente a dosis de 2 mg/oreja.

A excepción de Salvia tiliifolia y Salvia lasiocephala, el resto de las especies evaluadas también disminuyeron el edema auricular a dosis menor (1 mg/oreja).

Existe linealidad entre los resultados predichos por el modelo OPLS y los valores experimentales, respecto a la actividad antiinflamatoria, con un rango de desviación de -1.33 a 0.71%.

En el presente estudio se obtuvo evidencia que las especies de Salvia utilizadas en padecimientos de tipo inflamatorio, presentan todas actividad antiinflamatoria.

Mediante el modelo de regresión OPLS fue posible determinar los picos responsables de la actividad antiinflamatoria en las especies de Salvia evaluadas.

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