Para analizar los resultados de las contorsiones abdominales, se realizaron análisis estadísticos SPSS versión 22,0 consistentes en prueba de Normalidad (KS), la prueba de homogeneidad de varianza, análisis de varianza (ANOVA), la prueba de T de Dunnett y la prueba Post hoc de HSD Tukey, para determinar si existían diferencias significativas entre las medias de los tratamientos respecto del grupo control con un nivel de p < 0,05.
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VI. RESULTADOS
4.1. Prueba de solubilidad de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” 54.
El extracto etanólico del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur”, es soluble en solventes polares; principalmente en metanol, etanol y agua destilada e insoluble en n-butanol, acetona, acetato de etilo, cloroformo, hexano, benceno, éter etílico y éter de petróleo (tabla 4 y figura 10).
Tabla 4. Prueba de solubilidad del extracto etanólico del fruto de Vallea
stipularis L.f. “chuillur”. Solventes Solubilidad Agua Destilada + Etanol + Metanol + N-butanol - Acetona - Acetato de Etilo - Cloroformo - Hexano - Benceno - Éter etílico - Éter de petróleo -
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Figura 10. Prueba de solubilidad del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” 54.
Se observa que el extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” muestra solubilidad principalmente en metanol, etanol y agua destilada. En donde se deduce que los componentes químicos mayoritarios son de estructura y naturaleza polar.
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4.2. Análisis fitoquímico de la especie Vallea stipularis L.f. “chuillur” 14, 15.
El análisis fitoquímico permite determinar cualitativamente los principales metabolitos de la planta medicinales. En la tabla 5 y figura 11, se muestra los resultados del extracto etanólico del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur”, se observa la presencia de flavonoides, taninos, compuestos fenólicos, grupo amino libre, esteroides y/o triterpenos y ausencia de alcaloides y azúcares reductores.
Tabla 5. Análisis fitoquímico del extracto etanólico del fruto de Vallea
stipularis L.f. “chuillur”.
Reactivos Metabolitos primarios y secundarios
Resultados
Tricloruro de aluminio. Flavonoides +
Shinoda. Flavonoides +
Tricloruro férrico 1 %. Compuestos fenólicos y/o taninos
+
Gelatina + NaCl. Taninos +
Mayer. Alcaloides -
Dragendorff. Alcaloides -
Popoff. Alcaloides -
Wagner Alcaloides -
Salkowski Esteroides +
Liebermman - Burchard Esteroides y/o Triterpenos
+
Fehling A y Fehling B Azúcares reductores -
Ninhidrina. Grupo amino libre +
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Figura 11. Análisis fitoquímico del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” 14, 15. Se observa que el extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” presenta metabolitos como los flavonoides, compuestos fenólicos, taninos, esteroides, triterpenos y grupo amino libre.
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4.3 .Análisis estadístico SPSS versión 22,0 del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur”.
Tabla 6. Promedio y porcentaje de inhibición (%) de las contorsiones abdominales del extracto etanólico del fruto de Vallea
stipularis L.f. “chuillur”.
Grupos Tratamientos Promedio Contorsiones
abdominales
Inhibición (%) Contorsiones abdominales
Grupo I Grupo sin tratamiento (agua destilada). 0 0
Grupo II Grupo control AcOH 0,8 %. 35,00 0
Grupo III Grupo extracto EtOH 50 mg/kg. 22,00 37,14
Grupo IV Grupo extracto EtOH 100 mg/kg. 17,75 49,29
Grupo V Grupo extracto EtOH 200 mg/kg. 10,50 70,00
Grupo VI Grupo paracetamol Q.P. 300 mg/kg. 15,63 55,34
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En la tabla 7 se muestra la prueba de normalidad (Kolmogorov - Smirnov) (p > 0,05), determinó que el tipo de distribución de los grupos experimentales fue Gaussiana, esta prueba compara la eficacia de los fármacos con los extractos empleados, determinando que no hay diferencias significativas.
Tabla 7. Prueba de normalidad (KS) de las contorsiones abdominales de todos los grupos experimentales. Pruebas de normalidad
Tratamiento Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Estadístico gl Sig. Estadístico gl Sig.
Contorsiones Grupo control (AcOH 0,8 %). ,198 8 ,200* ,956 8 ,773
Extracto EtOH 50 mg/ kg. ,138 8 ,200* ,957 8 ,780
Extracto EtOH 100 mg/kg. ,196 8 ,200* ,931 8 ,521
Extracto EtOH 200 mg/kg. ,128 8 ,200* ,983 8 ,975
Paracetamol 300 mg/kg. ,186 8 ,200* ,957 8 ,783
Clorhidrato de Tramadol 40 mg/kg. ,250 8 ,150 ,860 8 ,120
*. Esto es un límite inferior de la significación verdadera. a. Corrección de significación de Lilliefors
50
En la tabla 8 la prueba de homogeneidad de varianza de Levene (estadístico: 1,679; gl1: 5 y gl2: 42; p > 0,05) esta prueba compara la eficacia de los fármacos con los extractos empleados, indicando la igualdad de varianzas entre los grupos tratados.
Tabla 8. Prueba de homogeneidad de varianza de contorsiones abdominales de todos los grupos experimentales
Prueba de homogeneidad de varianzas
Contorsiones
Estadístico de Levene gl1 gl2 Sig.
51
En la tabla 9 la prueba de ANOVA mostró un valor (p < 0,05) esta prueba compara el grupo control con los grupos experimentales, determinando que existe diferencias significativas entre los efectos de los tratamientos empleados.
Tabla 9. Prueba de ANOVA de las contorsiones abdominales de todos los grupos experimentales. ANOVA
Contorsiones
Suma de cuadrados gl Media cuadrática F Sig.
Entre grupos 4712,938 5 942,588 248,400 ,000
Dentro de grupos 159,375 42 3,795
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De acuerdo con la tabla 10 la prueba Post hoc de T de Dunnett se observa que hay diferencias significativas de los tratamientos empleados comparadas con el tratamiento del grupo control (p < 0,05). Las últimas columnas muestran los límites para un intervalo de confianza de estas diferencias al 95 %, notemos que los límites de los intervalos son del mismo signo, esto nos está indicando que los promedios son diferentes.
Tabla 10. Prueba de T de Dunnett de las contorsiones abdominales de todos los grupos experimentales. Comparaciones múltiples
Variable dependiente: Contorsiones
T de Dunnett (bilateral)a
(I) Tratamiento (J) Tratamiento Sig. 95% de intervalo de confianza
Límite inferior Límite superior
Extracto EtOH 50 mg/ kg. Grupo control (AcOH 0,8 %) ,000 -15,55 -10,45
Extracto EtOH 100 mg/kg. Grupo control (AcOH 0,8 %) ,000 -19,80 -14,70
Extracto EtOH 200 mg/kg. Grupo control (AcOH 0,8 %) ,000 -27,05 -21,95
Paracetamol 300 mg/kg. Grupo control (AcOH 0,8 %) ,000 -21,92 -16,83
Clorhidrato de Tramadol 40 mg/kg. Grupo control (AcOH 0,8 %) ,000 -34,55 -29,45
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En la tabla 11 se muestra la prueba de Post hoc de HSD Tukey en la cual se observa que las diferencias significativas se encuentran entre estos cuatro grupos: clorhidrato de tramadol 40 mg/kg 3,00; extracto EtOH 200 mg/kg 10,50 y extracto EtOH 50 mg/kg 22,00 y un grupo conformado por el paracetamol 300 mg/kg 15,63 y el extracto EtOH 100 mg/kg 17,75 que estadísticamente tienen efectos ligeramente similares.
Tabla 11. Prueba de Post hoc de HSD Tukey de contorsiones abdominales de todos los grupos experimentales. Contorsiones
HSD Tukeya
Tratamiento N Subconjunto para alfa = 0.05
1 2 3 4 Clorhidrato de Tramadol 40 mg/kg. 8 3,00 Extracto EtOH 200 mg/kg. 8 10,50 Paracetamol 300 mg/kg. 8 15,63 Extracto EtOH 100 mg/kg. 8 17,75 Extracto EtOH 50 mg/ kg. 8 22,00 Sig. 1,000 1,000 ,268 1,000
Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 8,000.
54 35,0 22,0 17,8 10,5 15,6 3,0 0,0 5,0 10,0 15,0 20,0 25,0 30,0 35,0 40,0
Grupo control (AcOH 0,8 %) Extracto EtOH 50 mg/ Kg. Extracto EtOH 100 mg/Kg. Extracto EtOH 200 mg/Kg. Paracetamol 300 mg/Kg. Tramadol 40 mg/Kg.
Contorsiones
Porcentaje de inhibición de las contorsiones inducidas con AcOH 0,8%.
Figura 12. Promedio del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” sobre las contorsiones abdominales inducidas por ácido acético 0,8 % en ratones.
Los valores del eje de las ordenadas representan la media de cada grupo. Los valores sobre la barras representan el número promedio de contorsiones. Se puede apreciar que transcurrido 20 minutos después de la administración del extracto, todos los grupos lograron disminuir significativamente (p < 0,05) el número de contorsiones abdominales comparadas con el grupo control, el extracto EtOH de 200 mg/kg presentó una reducción superior al grupo de paracetamol 300 mg/kg.
Tratamientos
M
edia de
c
on
tor
s
io
nes
55 0 37,14 49,29 70 55,34 91,43 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Grupo control (AcOH 0,8 %)
Extracto EtOH 50 mg/ Kg. Extracto EtOH 100 mg/Kg. Extracto EtOH 200 mg/Kg. Paracetamol 300 mg/Kg. Tramadol 40 mg/Kg.
Contorsiones
Tratamientos
¿
Figura 13. Porcentaje de inhibición del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” sobre las contorsiones abdominales inducidas por ácido acético 0,8 % en ratones.
Los valores sobre la barras representan los porcentajes de inhibición de las contorsiones. Todos los grupos lograron disminuir significativamente el número de contorsiones abdominales comparadas con el grupo control, el efecto máximo se alcanzó a la dosis 200 mg/kg con un 70 %.
M
edia de
C
o
nt
or
s
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56
V. DISCUSIÓN
En el proceso de la prueba de solubilidad del extracto etanólico del fruto
Vallea stipularis L.f. “chuillur” se determinó que es altamente soluble en metanol, etanol y agua destilada (tabla 4 y figura 10) por lo tanto la mayoría de los componentes químicos son de estructura y naturaleza polar 54. La solubilidad de los flavonoides, depende de la forma en que se encuentren y el número y clase de sustituyentes presentes, las agliconas flavonoides altamente hidroxiladas son solubles en alcohol (etanol, metanol y n-butanol), mientras que las poco hidroxiladas lo son en solventes como éter etílico, acetato de etilo y acetona. Las agliconas flavonoides altamente metoxiladas son solubles en solventes menos polares como el éter de petróleo y el cloroformo 56, 57.
En el análisis fitoquímico del extracto etanólico del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur” se demostró la presencia de flavonoides, compuestos fenólicos, taninos, esteroides, triterpenos y grupo amino libre (tabla 5 y figura 11). En otros estudios realizados también determinaron la presencia de estos metabolitos en el extracto etanólico de las hojas Vallea stipularis L.f. 14 - 16.
Otros estudios realizados determinan que los flavonoides presentan numerosas actividades farmacológicas, entre ellas la actividad analgésica y antiinflamatoria 26, 28 - 32. En la investigación realizada del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” se determinó la presencia de los flavonoides mediante los ensayos de coloración (Shinoda) y con tricloruro de aluminio (AlCl3) se observó una formación de halo amarillo que se observa en la lámpara UV visible a 365 nm 54.
Otros estudios realizados determinan que la familia Elaeocarpaceae de diferentes especies (Aristotelia chilensis (Mol) Stutnz “maqui” 17, 33, 34,
57
21, presenta la actividad analgésica en sus extractos de hojas y frutos. Posiblemente el extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur” perteneciente a la familia Elaeocarpaceae presente actividad analgésica.
La mayoría de las investigaciones experimentales aplican el método de contorsiones abdominales en ratones a diferentes dosis de ácido acético (0, 75 %; 0,8 %; 1,0 %; 1,5 %), determinando la evaluación de la actividad analgésica 8, 9, 11, 58. En esta investigación se determinó por el método de contorsiones abdominales inducidas por un agente irritante como el ácido acético a una dosis de 0,8 % por vía intraperitoneal, determinando la actividad analgésica del extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur”.
Generalmente para determinar la actividad analgésica se emplea medicamentos como los AINE y opioides 8, 9, 11, 58. El extracto etanólico del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur” a diferentes concentraciones (50, 100 y 200 mg/kg) se comparó la actividad analgésica con dos medicamentos farmacéuticos paracetamol Q.P. 300 mg/kg y clorhidrato de tramadol Q.P. 40 mg/kg obteniéndose un mejor resultado en la eficacia de 200 mg/kg del extracto etanólico como se observa en la (figura 12 y 13) 58.
Los resultados presentados en este estudio demuestran por primera vez, que el extracto etanólico del fruto de Vallea stipularis L.f. “chuillur”, está constituido por una mezcla de compuestos capaces de inhibir con una elevada eficacia farmacológica el dolor inducido por agentes irritantes, estos efectos fueron similares y en algunos casos superiores a los observados en fármacos (paracetamol 300 mg/kg y clorhidrato de tramadol 40 mg/kg) comúnmente utilizados en la práctica clínica 55, 58.
La prueba de ANOVA (tabla 9) mostro un valor p < 0,05 determinando que existe diferencias significativas entre los extractos a diferentes
58
concentraciones (50, 100 y 200 mg/kg), los fármacos (paracetamol 300 mg/kg y clorhidrato de tramadol 40 mg/kg) y el grupo control 9.
La prueba de normalidad (KS) y la prueba de homogeneidad de varianza (tabla 7 y 8) mostro un valor de p > 0,05 determinando que no existe diferencias significativas entre los extractos a diferentes concentraciones (50, 100 y 200 mg/kg) y los fármacos (paracetamol 300 mg/kg y clorhidrato de tramadol 40 mg/kg) 9.
Todos los grupos lograron disminuir significativamente el número de contorsiones abdominales comparadas con el grupo control, podemos determinar que a medida que aumentamos la concentración del extracto etanólico, obtenemos mejores resultados (figura 12).
El efecto analgésico de Vallea stipularis L.f. “chuillur”, se evaluó en 3 dosis diferentes, llegándose a determinar que a dosis menores de 100 mg/kg el efecto fue escaso, lo que indica que su actividad farmacológica es menor a un opioide como clorhidrato de tramadol pero es similar a un AINE como paracetamol. La dosis de 200 mg/kg si tiene efecto analgésico, presentando un efecto máximo de inhibición con un 70 % (figura 13).
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VI. CONCLUSIONES
Se determinó la actividad analgésica del extracto etanólico del fruto Vallea
stipularis L.f. “chuillur” logrando una reducción de 70 % de inhibición en las contorsiones abdominales a partir de la dosis de 200 mg/kg.
Se realizó el análisis cualitativo del extracto etanólico del fruto Vallea
stipularis L.f. “chuillur” observando la presencia de compuestos fenólicos, flavonoides, taninos, esteroides, triterpenos y grupo amino libre.
Se comprobó que la dosis de 100 mg/kg y 200 mg/kg del extracto etanólico del fruto Vallea stipularis L.f. “chuillur” presento actividad analgésica mediante el método de contorsiones abdominales inducidas con ácido acético 0,8 % con un 49,29 % y un 70 % de inhibición respectivamente muy similar al paracetamol con un 55,34 % de inhibición.
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VII. RECOMENDACIONES
1. Continuar y contribuir al conocimiento con otros estudios