Discussion and Policy Implications

El FT es una glicoproteína de 263 aminoácidos, compuesta por tres dominios: un dominio extracelular representando la parte NH2-terminal de la molécula,

que contiene los 219 primeros residuos. El siguiente dominio estructural del FT es un dominio transmembrana de 23 aminoácidos que une la molécula a la membrana celular. Finalmente, el tercer dominio es el citoplasmático, que está formado por 21 aminoácidos y constituye la parte carboxiterminal [84] de la molécula. Tanto el dominio extracelular como el transmembrana ejercen una función en el proceso de coagulación, bien porque permiten el acoplamiento del FT a la membrana celular (dominio transmembrana), o bien porque

59 permiten la unión del FT al FVII (dominio extracelular), formándose el complejo FT-FVIIa mediante el cual el FT desarrolla su máxima actividad procoagulante [85, 86]. El dominio citoplasmático del FT, por su parte, tiene un papel relevante en la transducción de señalización celular [87].

Se han identificado diferentes formas del FT: el FT de longitud completa o full length tissue factor (flTF), que suele encontrarse acoplado a la membrana celular, y el FT truncado o alternatively spliced tissue factor (asTF) [88], carente de dominio citoplasmático y transmembranal, que se presenta en forma soluble en la circulación (Figura 11). Además, se han detectado formas del flTF y del asTF asociadas a micropartículas presentes en el torrente sanguíneo (FT+- MPs) [89, 90]. Al conjunto del FT circulante se le llama FT de la sangre o blood- borne TF y, debido a que posee una mayor capacidad procoagulante que el FT de la superficie celular, ha sido objeto de estudio de varios grupos de investigación en los últimos años [91, 92].

Figura 11. Variantes de la estructura del FT. Adaptado de Butenas, S. et al., 2007 [93].

Así pues, según la forma en la que se presenta el FT, se le atribuyen diferentes funciones. El flTF se encarga principalmente de desencadenar la cascada de la coagulación, aunque se le ha reconocido una participación en procesos de

flTF asTF Citoplasma Membrana celular Espacio extracelular

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señalización celular. El flTF puede unirse a integrinas expresadas en la superficie celular aunque no actúan como receptores de éste. También puede formar un complejo proteico junto con el FVIIa que, de manera dependiente o independiente del receptor activado por proteasas 2 (PAR2), puede inducir la expresión de determinados factores pro-angiogénicos [45, 94].

El asTF desarrolla un papel clave en la supervivencia celular, en la proliferación celular y en la angiogénesis, sin embargo, su actividad procoagulante es reducida [95]. Debido a su solubilidad, es capaz de acumularse en la matriz extracelular e interaccionar con las integrinas αvβ3 y α6β1 [96, 97]. El asTF está

presente en la circulación y en los tejidos, en concentraciones de alrededor de 1nM [98].

El FT presente en micropartículas (FT+-MPs) se ha encontrado en la sangre, en la orina y en la saliva. Las FT+-MPs derivan principalmente de plaquetas, aunque también de otros tipos celulares como las CEs y los monocitos, y desarrollan un papel en la homeostasis [99]. Además, se han asociado alteraciones de los niveles de FT+-MPs con algunas enfermedades, por ejemplo, pacientes de síndrome coronario agudo presentan concentraciones más elevadas de FT+-MPs que los individuos sanos. También se han observado altos niveles de FT+-MPs en pacientes con cáncer, diabetes mellitus, hipertensión y trombo-embolismo venoso [100, 101]. Por esta razón, se ha planteado utilizar los niveles de FT+-MPs como un marcador de enfermedades como las que se acaban de comentar. Aleman et al. [101] defiende que las FT+- MPs derivadas de monocitos incrementan en condiciones patológicas y pueden iniciar la generación de trombina y fibrina, de manera que el riesgo trombótico está influenciado por la concentración de micropartículas. Sin embargo, hay estudios que contradicen esta correlación entre la cantidad de FT+-MPs y la actividad procoagulante [102-104].

5.2.1. Proceso de splicing

Dependiendo del proceso de transcripción, el FT puede presentarse en dos isoformas distintas, como se ha comentado anteriormente, el flTF y el asTF. A partir de un proceso de splicing, un pre-ARNm primario da lugar a flTF. Sin embargo, en determinadas ocasiones se produce un splicing alternativo que provoca la exclusión del exón 5 del transcrito génico del FT. Esta exclusión produce un cambio del marco de lectura y da lugar a la isoforma de asTF [105].

61 A partir del splicing del transcrito primario del FT se produce, además de las dos isoformas funcionales de FT, la expresión de diversas variantes de ARNm que no codifican para ninguna proteína. En este sentido, la variante más conocida es el FT-A, detectada en múltiples pacientes de cáncer [106, 107], cuya función aún no ha sido esclarecida.

5.2.2. Modificaciones post-traduccionales

Una vez se ha sintetizado el FT, se somete a una serie de modificaciones post- traduccionales que cambian algunos aspectos de su estructura y función. Las modificaciones más comunes son la fosforilación, la S-palmitoilación, la N- glicosilación y la S-nitrosilación (Figura 12).

x Fosforilación: El FT tiene tres lugares de fosforilación en la cola citoplasmática: Ser253, Ser258 y Ser263, que permiten regular la actividad del FT en la señalización celular, migración y angiogénesis [108] además de su incorporación a las micropartículas [109].

x Glicosilación: La estructura del FT presenta cuatro lugares de N- glicosilación: Asn11, Asn124 y Asn137 en el dominio extracelular, y Asn261 en el citoplasmático. La importancia de la glicosilación del FT aún no está totalmente definida, aunque los últimos estudios señalan que su actividad procoagulante puede verse modulada por N-glicosilos [110, 111].

x Palmitoilación: El FT solamente contiene un residuo de cisteína en el dominio citoplasmático: Cys245 [112]. No existen datos suficientes sobre cómo afecta la S-palmitoilación sobre la función del FT, sin embargo, resultados obtenidos hasta el momento señalan que cuando se inhibe la palmitoilación, aumenta la fosforilación de la Ser258, ya que la palmitoilación promueve la interacción entre el FT y las caveolinas contenidas en las balsas lipídicas (lipid rafts), inhibiéndose así la proteína quinasa C (PKC) responsable de la fosforilación de FT [113]. x Nitrosilación: El FT tiene dos parejas de cisteínas en el dominio

extracelular entre las que se forman puentes disulfuro: Cys49-Cys57 y Cys186-Cys209. La primera pareja se encarga de conectar dos hojas β (β- sheets) con el dominio N-terminal, la segunda estabiliza el FT en la superficie celular y conecta el C-terminal con el dominio transmembrana. La mutación de estas cisteínas provoca una reducción de la actividad procoagulante del FT [114].

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Figura 12. Estructura del FT. En azul, los residuos de Cys; en rojo, los de Ser y en amarillo

los de Asn; esenciales para las modificaciones post-traduccionales. Adaptado de Chu A.J., 2011 [115].