Se realizó una prueba T para comparar los Ct promedios obtenidos para cada gen PIN1, ACT1, SOD1 y PR4.
Tabla 5
Prueba bilateral de T con una p: 0,001
Gen Variable n Media DE T p (Bilateral)
ACT Promedio Ct 6 25,65 2,03 30,97 <0,0001
PIN 1 Promedio Ct 6 31,05 2,78 27,34 <0,0001
PR 4 Promedio Ct 6 30 2,3 31,91 <0,0001
SOD Promedio Ct 6 26,82 3,06 21,46 <0,0001 Fuente:( Autor,2019)
Los promedios Ct de los genes evaluados (ACT, PIN1, PR4 y SOD1) son estadísticamente similares, lo que quiere decir que los datos de las medias utilizados para los cálculos de expresión relativa se encuentran dentro de los límites de confianza (p:0,001).
CAPÍTULO V
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
5.1 Conclusiones
En el proceso de formulación de la bacteria B. subtilis Bs-S2-1 se obtuvo el 79% de eficiencia con la inclusión de 20% de MgSO4 como material de soporte, en cuanto a la viabilidad
del producto en polvo obtenido, se fijó que contiene una concentración de 1,9 x 109 UFC/g.
La expresión relativa de genes fue cuantificada mediante el método de Delta (△△Ct) lo que demostró una interacción beneficiosa en el tratamiento con patógeno + Bacillus atomizado en cuanto a la expresión del gen SOD importante en la conservación de las células del daño oxidativo y respuestas patogénicas, para el gen PR4 se observó que el tratamiento patógeno + Bacillus presentó una sobreexpresión de 3:1 en relación al testigo, en cuanto al gen PIN1 los tratamientos presentaron expresión similar, permitiendo concluir que las propiedades de Bacillus atomizado estimulan genes relacionados a mecanismos de defensa en la planta hospedera.
El gen con mayor expresión genética inducido por Bacillus spp. atomizado en plántulas de chocho (Lupinus mutabilis) fue el superóxido dismutasa (SOD) presente en los procariotas y los eucariotas aeróbicos y es la primera enzima antioxidante en el sistema de captación de oxígeno activo que juegan un papel importante en la protección de las células del daño oxidativo y respuestas patogénicas, el tratamiento con el valor más alto y significativo fue el T2: Patógeno +
B. subtilis Ctpx S2-1 cuya relación en expresión de genes con el tratamiento testigo fue de 20:1,
lo cual establece que la interacción del patógeno en la planta de chocho previa a la aplicación de
5.2 Recomendaciones
Realizar estudios complementarios sobre la aplicación de Bacillus spp. atomizando en la expresión de otros genes que intervienen en procesos de crecimiento, defensa contra patógenos, con la finalidad de aprovechar los beneficios del control biológico en enfermedades fitopatógenas como la antracnosis C. acutatum en el cultivo de chocho Lupinus mutabilis.
Continuar la investigación en formulación de Bacillus spp. atomizando, en ensayos de campo para evaluar los cambios y respuestas en la planta de chocho mediante parámetros fisiológicos y productivos.
Utilizar otro tipo de genes endógenos o “housekeeping” como 18S, Ubiquitina, Helicasa,
que permitan validar y normalizar la expresión de genes de interés.
Para eventuales investigaciones sobre formulación de Bacillus spp. atomizando se recomienda usar cepas endémicas aisladas a partir de la rizosfera.
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