En el presente trabajo de investigación, se logró determinar la capacidad antioxidante in vitro de flavonoides totales obtenidos de los extractos de las hojas de Bixa orellana que fue recolectada en el caserío Cormot-Compin, Región Gran Chimú, con el propósito de poder darle una aplicabilidad y contribuir con la sociedad.
Antes de empezar la valoración de un principio activo, es necesario realizar un tamizaje fitoquímico, que permita determinar cualitativamente los principales grupos de constituyentes químicos de la planta, a partir del cual, puede orientarse las extracciones y/o el fraccionamiento de los extractos eligiendo los grupos de mayor interés para el investigador.
El tamizaje fitoquímico realizado al extracto metanólico (Anexo 01), infuso, decocto (Anexo 02) evidenció la presencia de flavonoides, mediante la reacción de shinoda, dato que sirvió como base para continuar con la valoración de los flavonoides totales presentes en los extractos.
En la Tabla 01 se observa que 100 g de droga contienen 1.15 g de flavonoides totales, expresados en quercetina. La cuantificación se llevó a cabo mediante espectrofotometría UV/Visible a 256 nm (longitud de onda de máxima absorción) la cual fue determinada con la solución patrón de 8 ppm, corroborado por el trabajo de investigación realizado por Mercado G (2012). Compuestos polifenólicos y capacidad antioxidante de especies típicas consumidas en México, el cual reporta que por cada 100 gramos de droga contiene 1.25 g de flavonoides totales, expresados en quercetina. 13, 34
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Inicialmente es necesario investigar in vitro las propiedades antioxidantes de cualquier fármaco o sustancia natural antes de considerarlo un antioxidante, para ello existe tres maneras de expresarlo, tales como; porcentaje de captura del DPPH*, la concentración necesaria para reducir al 50% la concentración inicial del DPPH* (IC50), y la eficiencia antiradicalaria (E.A.). 19
En el presente trabajo de investigación, se evaluó mediante IC50 y porcentaje
de captura de DPPH*, método in vitro quepermite tener una idea aproximada de lo que ocurre en situaciones complejas in vivo, el cual utiliza radicales libres coloreados y estables que presenten una fuerte absorción en la región visible. 19, 20,21
En la Tabla 02, se observa que a mayor concentración de los flavonoides totales enfrentados con la solución de DPPH*, mayores son los porcentajes de captura de radicales de DPPH* a un tiempo de 45 minutos; para la solución de mayor concentración de flavonoides totales contenidos en 100 uL, el extracto metanólico fue de 92.75% equivalente a una concentración de 36.04 µg/mL de DPPH* capturado; del decocto e infuso fue 95.15 % equivalente a 36.96 ug/mL y 91.14 % equivalente a 35.42 ug/mL de DPPH* capturados, respectivamente.
El valor P encontrado mediante análisis de varianza (ANOVA) de un factor, con un nivel de significancia del 95% (p<0.05), de los porcentaje de captura de DPPH* de los cinco sets de cada antioxidante, fue menor a 0.05; lo que indica que existe una desigualdad entre estas medias poblacionales; excepto entre el extracto Metanólico y Decocto de Bixa orellana a la concentración contenida a un volumen de 20 uL, no presentan una diferencia estadísticamente significativa (p>0.05), es decir su efecto es el mismo. Asimismo se realizó un análisis estadístico, HSD de
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Tukey, el cual nos ayudó a determinar donde se encuentra el mayor poder antioxidadante (Anexo 7-34).
Bartolo R., Chávez C. (2010) demostraron que la capacidad antioxidante del decocto de Zea mays L. variedad morado procedente de Cajamarca aumenta a medida que aumenta la concentración del extracto, obteniendo un valor máximo de porcentaje de inhibición de DPPH de 87.02 %, correspondiente a un tiempo de 60 minutos. Rojas M., Rumay A.(2009) obtuvieron un valor máximo de porcentaje de inhibición de DPPH para un extracto hidroalcoholico de la hoja de Piper aduncum
procedente de Cajamarca de 49.98 %, correspondiente a un tiempo de 30 minutos. Horna C, López A. determinaron la capacidad antioxidante in vitro de los flavonoides totales obtenidos de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. (sauco), proveniente de la ciudad de Huamachuco en el cual concluyeron que mientras mayor es la concentración, y el tiempo, mayor es este porcentaje de captura de DPPH; razón por la cual se realizó las lecturas a un tiempo de 45 minutos. 20, 21, 22
La capacidad antioxidante in vitro también fue expresada como, la concentración necesaria para reducir al 50% la concentración inicial del DPPH* (IC50), la Tabla 03 muestra los valores obtenidos mediante correlación lineal,
encontrando un IC50 para extracto metanólico, infuso, decocto de 33.14 ug/mL-1,
46.02 ug/mL-1,25.44 ug/mL-1, respectivamente (Anexo 35-37).
Un estudio realizado por Shilpi J. 2006 en el cual utiliza el extracto metanólico de las hojas de Bixa orellana L. mostró un IC50=22,36 µg/mL-1 en la
prueba de DPPH*, es decir mostró una actividad atrapadora de radicales libres. 18 Realizando una comparación entre los extractos se observa que el mayor porcentaje de captura de radicales libres de DPPH* y menor IC50 se da en el
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decocto, esto es posible a que en este extracto existen otras variedades de, fitoconstituyentes presentes que le podrían estar dando esta capacidad antioxidante, como la presencia de compuestos polifenólicos, taninos y alcaloides.
La capacidad antioxidante de los compuestos polifenólicos, entre ellos los flavonoides y los ácidos polifenólicos, está determinada por la estructura química, el número y la localización de los grupos hidroxilo dadores de electrones; lo que tendría una posible implicancia en nuestros resultados obtenidos. 34