Instrumental Variables Approach

En los últimos años evidencias crecientes involucran a la vía canónica y a sus efectores en diversos desórdenes psiquiátricos, relacionando la ausencia o deficiencia de algunas de las proteínas relacionadas con la vía (como Frizzled-3, GSK3β y el regulador de su actividad, Akt) con la susceptibilidad frente al desarrollo de neuropatologías tales como Alzheimer y esquizofrenia [7-10]. A pesar de que la adicción a cocaína, al igual que la esquizofrenia, afecta al sistema dopaminérgico mesocorticolímbico, no se había propuesto una participación de las vías de señalización Wnt durante la adicción. Dentro de las observaciones que sugerirían una posible relación entre el uso repetido de drogas y los efectores de las vías de Wnt podemos citar: que tanto la administración de anfetamina como de antagonistas de receptores dopaminérgicos, modifican la expresión de la βcatenina y la GSK3β en áreas del cerebro que contienen cuerpos neuronales dopaminérgicos tales como en el ATV y la SN [165, 166]. Más aún, estudios in vitro han demostrado que antagonistas de los receptores dopaminérgicos del tipo D2 (drogas

antipsicóticas) modifican la expresión de los efectores de la vía canónica de Wnt a través de Dvl [167]. Particularmente para el caso de la cocaína se observó que en animales adultos, la administración crónica de esta droga induce cambios en la actividad de GSK3β que estarían relacionados con la sensibilización comportamental [168-171]. Si bien los trabajos citados involucran a distintos efectores de la vía canónica de Wnt en mecanismos relacionados con el fenómeno de adicción, en ninguno de los casos anteriores los autores proponen a la vía de señalización Wnt/βcatenina como un posible blanco de acción de los efectos de la cocaína.

36

OBJETIVOS

37 La adicción a drogas es un problema mundial no resuelto que afecta no sólo a la persona que consume sino a todo su entorno. Particularmente para el caso de la dependencia de cocaína, hasta la actualidad no se ha establecido una medicación eficiente para su tratamiento, por lo que el estudio de las bases moleculares que median la adicción sigue revistiendo gran importancia tanto a nivel clínico como social. Si bien se ha demostrado que la vía canónica de Wnt estaría involucrada en una serie de mecanismo similares a los que dan lugar a los cambios plásticos asociados con la adicción, hasta la fecha no se ha propuesto una relación directa entre la vía Wnt/βcatenina y el consumo crónico de cocaína. Es por esto que el objetivo general del presente trabajo de tesis es determinar el posible rol de la vía canónica de Wnt, y sus efectores, en las neuroadaptaciones desencadenadas por la exposición a cocaína, en un modelo animal de adicción como es la sensibilización comportamental. Para ello se plantearon los siguientes objetivos específicos:

1) Evaluar si el desarrollo de sensibilización motora inducido por cocaína involucra modificaciones en los niveles de expresión de distintos efectores de la vía canónica de Wnt, como son la βcatenina y la GSK3β, en homogenados totales de áreas cerebrales pertenecientes al circuito de la motivación.

2) Examinar si la modificación en los efectores de la vía en los homogenados totales de los animales que desarrollaron la sensibilización se relaciona con la actividad de la vía canónica de Wnt. Para esto se realizará la determinación de los niveles de βcatenina en subfracciones nucleares y de membrana, y se medirán los niveles de expresión del ARNm de diversos genes codifican de uno de los genes blanco de la vía, el de la Axina2; así como los factores Wnt.

3) Determinar la importancia de la modificación en los niveles del efector final de la vía, la βcatenina, en el desarrollo de la sensibilización inducido por cocaína. Para ello, se propone:

a. Examinar los niveles de βcatenina en aquellos animales que no desarrollaron la sensibilización comportamental a cocaína.

38 b. Evaluar si el bloqueo del desarrollo de la sensibilización provocado por un pretratamiento sistémico con un activador de la vía (LiCl), está asociado con el restablecimiento de los niveles de βcatenina, tanto en los homogenados totales como en las fracciones nucleares de las áreas del circuito de la motivación.

c. Analizar la importancia de la modificación en la actividad de la vía canónica de forma área específica. Para ello se trabajará con un pretratamiento que consistirá en la infusión intracerebral en distintas áreas de interés de una droga inhibidora de la vía canónica, el Sulindac.

4) Estudiar si la expresión de la sensibilización motora inducida por cocaína involucra modificaciones en los niveles de expresión de distintos efectores de la vía canónica de Wnt, como son la βcatenina y la GSK3β, en homogenados totales de las áreas cerebrales del circuito mesocorticolímbico.

5) Examinar si la modificación en los homogenados totales de alguno de los efectores en animales que expresaron la sensibilización, se relaciona con la actividad de la vía canónica de Wnt. Para esto lograr esto se realizará la determinación de los niveles de βcatenina en subfracciones nucleares.

6) Determinar la importancia en la modificación de los efectores de la vía canónica para la expresión de la sensibilización. Para lograr esto, se evaluarán los niveles de βcatenina en animales que desarrollaron la sensibilización y permanecieron un período sin contacto con la droga y en animales que no expresaron la sensibilización.

7) Evaluar si el bloqueo de la sensibilización con LiCl tiene efectos a largo plazo sobre la respuesta comportamental y la expresión de βcatenina.

39

MATERIALES Y

40