Chapter 3 MAPPING THE INTRAMOLECULAR ELECTROSTATIC INTERACTIONS INVOLVED IN
3.1 Introduction
Síntomas Causas y comentarios
Los picos de tartamudeos no se El archivo de tartamudeos no se importó en el Administrador
filtraron de paneles cuando se importaron los archivos de panels
y bins.
La distancia de los tartamudeos no se definió en la pestaña Método de análisis de alelos.
Las muestras en el proyecto no La ventana de Resumen de requisito de análisis no estaba se analizaron. activada, y no se cumplió con un requisito de análisis. Active
el Resumen de requisito de análisis en el menú Opciones, y corrija los requisitos de análisis necesarios para continuar el análisis.
Las ediciones en el visor de la Para visualizar las ediciones realizadas a un proyecto, edición de etiquetas no se puede primero se debe guardar el proyecto. Cierre la ventana de
visualizar visualización de gráficos, regrese a la página principal de
GMID-X y guarde el proyecto. Muestre la ventana de gráficos de nuevo, luego visualice la tabla de edición de etiquetas. Las barras de encabezamiento del Cuando se realiza una edición a un locus, los indicadores de marcador para algunos lugares calidad y la barra de encabezamiento del marcador cambian
son grises automáticamente al color amarillo. Para cambiar el GQ y la
barra de encabezamiento del marcador para un locus al color verde, anule el GQ en la ventana de gráficos.
Alelos no definidos Para analizar las muestras con el software GeneMapper®ID-X, al menos se debe definir una escalera alélica.
Se definió un número insuficiente de los fragmentos CC5 ILS 500. Asegúrese de definir al menos un fragmento CC5 ILS 500 más pequeño que el menor pico de muestra y al menos un fragmento CC5 ILS 500 más grande que el mayor pico de muestra. En este ejemplo, la escalera alélica debe haber fallado la verificación de calidad de la escalera alélica.
7.B. Software GeneMapper®ID-X (continuación)
Síntomas Causas y comentarios
Alelos no definidos (continuación) La ejecución fue demasiado breve, y los picos más grandes en ILS no se capturaron. No todos los picos CC5 ILS 500 definidos en el estándar de tamaño se detectaron durante la ejecución.
• Cree un nuevo estándar de tamaño utilizando los fragmentos del marcador interno de tamaños presentes en la muestra.
• Vuelva a ejecutar las muestras utilizando un tiempo de ejecución más prolongado.
Una escalera alélica de mala calidad se utilizó durante el análisis. Asegúrese de que sólo las escaleras alélicas de alta calidad se utilicen para el análisis.
Alelos fuera de la escalera Se utilizó una escalera alélica de una ejecución diferente a las muestras. Vuelva a analizar las muestras con una escalera alélica de la misma ejecución. El software GeneMapper®ID-X requiere que la escalera alélica se importe de la misma carpeta donde se encuentra la muestra. Asegúrese de que la escalera alélica esté en la misma carpeta donde se encuentra la muestra. Cree un nuevo proyecto y vuelva a analizar, como se describe en la Sección 6.D o 6.E.
El archivo de panel seleccionado para el análisis no fue correcto para el sistema de las repeticiones cortas en tándem utilizado. Asigne el archivo de panel correcto que
corresponde al sistema de las repeticiones cortas en tándem utilizado para la amplificación.
La escalera alélica no se identificó como una escalera alélica en la columna Tipo de muestra.
El marcador interno de tamaños no se identificó
correctamente en la muestra. Vuelva a definir manualmente los tamaños de los fragmentos de estándar de tamaño en la muestra.
Una escalera alélica de mala calidad se utilizó durante el análisis. Asegúrese de que sólo las escaleras alélicas de alta calidad se utilicen para el análisis.
El tamaño de estándar no se El punto de partida de los datos no fue correcto para el rango definió correctamente parcial elegido en la Sección 6.E. Ajuste el punto de partida de
los datos en el método de análisis. Alternativamente, utilice un rango completo para el análisis.
Picos adicionales en el estándar de tamaño. Abra el Editor para hacer coincidir el tamaño. Resalte el pico adicional, seleccione “Edit” (Editar) y seleccione “delete size label” (elimine la etiqueta de tamaño). Seleccione “auto adjust sizes” (tamaños de ajuste automático).
La ejecución fue demasiado breve, y los picos más grandes en ILS no se capturaron. No todos los picos CC5 ILS 500 definidos en el estándar de tamaño se detectaron durante la ejecución. • Cree un nuevo estándar de tamaño utilizando los
fragmentos del estándar de carril interno presentes en la muestra.
• Uelva a ejecutar las muestras utilizando un tiempo de ejecución más prolongado.
Síntomas Causas y comentarios
Faltan picos en el estándar de tamaño Si los picos están por debajo del umbral, disminuya el umbral de picos en el método de análisis para el canal de color naranja para incluir los picos.
Si los picos son de mala calidad, vuelva a definir el estándar de tamaño para la muestra para saltarse estos picos. Estado basal significativamente Calibración espectral insuficiente para el Analizador ABI
PRISM®3100 y el 3100-Avant Genetic Analyzers y los Analizadores Genetic Analyzers 3130, 3130xl, 3500 y 3500xL Genetic Analyzers de los Sistemas Applied Biosystems. Realice una nueva calibración espectral, y vuelva a ejecutar las muestras.
El espectral G5 incorrecto fue activo. Vuelva a realizar las muestras, y confirme que el PowerPlex®5-dye G5 spectral es un conjunto para G5. Consulte las instrucciones sobre la preparación del instrumento en la Sección 5.