3.2 Conceptual Framework
3.2.2 Leadership Evaluation
Una vez montado el dispositivo de permeación, el segmento intestinal, es sumergido en la solución mucosal. En el interior del segmento intestinal, se colocó 1 mL de solución serosal por medio de una cánula insertada en su interior. Transcurridos 10 min, se retira el volumen agregado y se lava con 1 mL de solución serosal, tras lo cual se vuelve a introducir 1 mL de solución serosal fresca. De esta manera, la muestra de permeación está compuesta por 2 mL provenientes de la solución serosal retirados del interior de la cánula (muestra de permeación + muestra de lavado), a los cuales se le adicionó 80 µL de HCl 2 M y 50 µL de EI. La solución de EI para la cuantificación de AZT, AZT-Suc y AZT-Adi, fue preparada utilizando AZT-Glu (0,15 mg/mL), mientras que para AZT-Glu, se utilizó una solución de AZT-Suc (0,15 mg/mL). Este procedimiento se repitió cada 10 min durante 60 min. Luego se acondicionaron las muestras por extracción en fase sólida y posteriormente se cuantificaron mediante los métodos analíticos desarrollados y validados para tal fin, los cuáles se describen en el Capítulo 4.
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2.5 Conclusiones parciales
Se sintetizaron 3 nuevos derivados AZT-Espaciadores, denominados AZT-Suc, AZT-
Glu y AZT-Adi, como intermediarios de la síntesis de profármacos más complejos, conteniendo
aminoácidos esenciales como complemento molecular (AZT-Espaciadores-Aa-O-met). Debido a que estos últimos pueden ser metabolizados generando como producto los AZT-Espaciadores correspondiente, se evaluaron propiedades de estabilidad química y plasmática, unión a proteínas plasmática y propiedades de permeabilidad intestinal, con el objetivo de determinar, si 1-3 presentan propiedades optimizadas con respecto a AZT y su predecesor AZT-Oxa.
Los nuevos derivados, se obtuvieron mediante una estrategia sintética simple que permite la utilización de diácidos de diferente longitud de cadena alquílica lineal, ampliando así el espacio químico disponible de ser explorado para la síntesis de este tipo de profármacos de AZT. Se evaluó la estabilidad química de los derivados en soluciones de pH 2,0, 7,4 y 10,0 obteniendo buenos y prometedores perfiles de estabilidad. Se determinó que AZT-Suc, AZT-
Glu y AZT-Adi pueden regenerar AZT en condiciones alcalinas, y que estos presentan un perfil
de estabilidad química superior con respecto a AZT-Oxa. Asimismo, los derivados 1-3 demostraron que al aumentar la separación de los grupos carbonilos disminuye la estabilidad en soluciones acuosas, probablemente debido a un efecto de catálisis intramolecular que no fue estudiado en mayor detalle debido a que no forma parte de los objetivos de este Trabajo de Tesis. Con relación a los estudios en plasma humano, se pudo observar que los nuevos derivados también presentan buena estabilidad plasmática, siendo AZT-Suc el que exhibe el mayor t1/2. En cuanto a la unión a proteínas plasmáticas, los nuevos derivados presentan una mayor afinidad con respecto a AZT y AZT-Oxa, en el siguiente orden AZT-Oxa < AZT <
AZT-Glu < AZT-Suc = AZT-Adi. Todos los derivados ácidos evaluados fueron desplazados
por el marcador del sitio I (SAL) de la ASH, confirmando su afinidad por este sitio. Éstos estudios se complementaron mediante estudios teóricos de unión a ASH, en los cuales se observó que AZT-Suc, AZT-Glu y AZT-Adi presentan interacciones similares a SAL, confirmando que se unen al sitio I de la ASH, estableciendo interacciones del tipo iónico con Arg257, aumentando así la afinidad de AZT-Suc, AZT-Glu y AZT-Adi por la ASH, respecto a AZT.
Por otra parte, se puede decir que 1-3 no presentan permeabilidad intestinal mejorada con respecto al principio activo original, debido a que sus Papp son inferiores al de AZT. A pesar de ello, los estudios realizados sugieren que los mismos conducirían a una disminución en la tasa de
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metabolismo hepático del AZT debido a que en su forma de profármaco, no son hidrolizados completamente durante el pasaje por el segmento intestinal, lo cual inhibiría el metabolismo que presenta AZT a nivel hepático.
Para estudiar si 1-3 y el AZTreg que se produce a partir de éstos, son o no sustratos de proteínas de eflujo, se determinó la permeabilidad intestinal de los mismos en presencia de VER. En estos ensayos se pudieron observar diversos fenómenos de eflujo a nivel intestinal. Particularmente para AZT-Glu y el correspondiente AZTreg, se observó una mayor acción de proteínas de eflujo a nivel basal. Dicho fenómeno tuvo lugar en menor medida, para AZT-Adi. En cambio, AZT-Suc presentó una leve disminución del Papp, indicando la intervención de fenómenos de eflujo a nivel basal. Al comparar las permeabilidades globales (AZTeq), obtenidas a partir de AZT-Suc en presencia y ausencia de VER, no se observaron cambios significativos, por lo cual podría traducirse en una potencial optimización en la biodisponibilidad del fármaco a nivel intestinal
En el caso particular de AZT-Suc, se observó que el Papp depende de la concentración del derivado en la solución mucosal, evidenciando un mecanismo de difusión facilitada.
Sobre la base de lo discutido, se puede concluir que los profármacos AZT-Suc, AZT-Glu y AZT-Adi presentan mejores propiedades biofarmacéuticas que AZT-Oxa, en cuanto a una mayor estabilidad química, enzimática y a un aumento en la afinidad por la ASH. Esto lleva a la conclusión que al separar los grupos carbonilos presentes en el “espaciador”, se pueden modular las propiedades mencionadas anteriormente.