Chapter 2 Determination of Rice Critical Y-leaf Potassium Concentrations by Traditional
Y- leaf-K Concentration as Affected by K-Rate and Sample Time
GENERALIDADES DE LOS VIRUS Y PRINCIPALES FAMILIAS
DE VIRUS
DE VIRUS
VIRUS
Los virus constituyen un grupo peculiar de gentes infecciosos, se van a caracterizar los virus en su organización, composición y mecanismo de replicación. Una partícula vírica completa o virión se considera como un bloque de material genético rodeado por una cubierta proteica que sirva de vehículo para su transmisión. En la actualidad se considera que tienen únicamente un solo tipo de ácido nucleico (ARN ó ADN), una cubierta proteica y algunos presentan lípidos y carbohidratos, carecen de los constituyentes fundamentales para el crecimiento y multiplicación. Si pueden presentar algunas enzimas especiales (transcriptazas) y esto se utiliza en la moderna terapéutica antivírica. Cada tipo de virus es susceptible de infectar un determinado tipo de células (animales ó vegetales).
El tamaño de los virus es variable y oscila entre los más pequeños como pueden ser los parvovirus o picornavirus que miden de entre 20-25 nm y los más grandes como pueden ser poxvirus que miden entre 200-300 nm.
Para su observación se requiere en la mayor parte de los casos a acudir a la microscopia electrónica.
Su estructura comprende un ácido nucleico que junto a las proteínas que se le asocian constituyen el core ó núcleo del virus. Estos están rodeados por una cápside. Ambos forman la nucleocápside que está compuesta por la repetición de una serie de subunidades o capsómeros. En función de la disposición que adopten se clasifican a los virus en: simetría helicoidal, simetría icosaédrica y simetría compleja. Pueden estar provistas de una envoltura que está compuesta de glucoproteínas asociadas a una capa bilipídica.
CICLO DE VIDA DEL VIRUS
Los virus son parásitos intracelulares, necesitan un célula para persistir y multiplicarse ya que carecen de la maquinaria necesaria para realizarla por si misma. El ciclo de vida de los virus es variado y complejo. Se pueden esquematizar del siguiente modo:
A·- Adsorción a la célula diana: esta unión e específica y está mediada por receptores para el virus en la membrana citoplasmática.
B·- Penetración: puede estar mediada por: endocitosis, fusión y traslocación.
C·- Liberación de la partícula viral de modo que pueda llevarse a cabo la trascripción y la replicación de sus proteínas y la replicación de su ADN.
D·- Expresión del genoma viral: en función del ácido nucleico del virus y del tipo de cadena a seguir un tipo de estrategia distinta.
E·- Ensamblaje de las nuevas partículas virales F·- Salida de la célula para infectar otras. MÉTODOS DE LA VIROLOGÍA CLÍNICA
El diagnóstico en el laboratorio de las infecciones virales se basa en 2 métodos generales: microscopia, cultivo y serología. Con ellos se intenta detectar el virus que cusa la enfermedad. Tanto la microscopia electrónica como el cultivo el virus están reservados par laboratorios especializados mientras que los métodos serológicos están hoy al alcance de los laboratorios.
Con ellos (serología) se intenta detectar un aumento significativo del título de anticuerpos par un determinado virus en el curso de la enfermedad. Normalmente se requiere tomar una muestra de sangre sin anticoagulantes ni conservantes durante la fase aguda y una segunda a los 15-20 días en la fase de convalecencia par su estudio en paralelo.
Las muestras para el aislamiento del virus se deben recoger lo antes posible, no después de 3-7 primeros días del inicio de la enfermedad.
Para el aislamiento de los virus se pueden utilizar animales de laboratorio ó embriones de pollo pero estos métodos actualmente sólo se utilizan en laboratorio de investigación o de referencia.
En laboratorios de diagnóstico se utilizan los cultivo celulares, para ello se utilizan distintas líneas celulares, donde pueda crecer y multiplicarse el virus investigar. Se distinguen los cultivos celular primario que proceden directamente de tejidos que suelen tener una morfología epiteloide ó fibroblástica. Los cultivos celulares secundarios que proceden de repetidos pases de los anteriores. Estos cultivos tienen una vida limitada pero en ocasiones se consiguen células alteradas que son capaces de crecer indefinidamente dando lugar a una línea celular que es el método más utilizado en la actualidad. La más conocidas son: Hela, Hep-2 y KB que son derivadas de carcinomas humanos.
Las muestras clínicas que se utilizan con mayor frecuencia son las siguientes: secreciones nasales, frotis faríngeos, exudados conjuntivales, líquido vesicular y raspados de piel, heces, orina, líquido cefalorraquídeo, biopsia, muestra de autopsia.
La detección del crecimiento del virus se puede realizar de diferentes modos: inmuno- fluorescencia, hemo-adsorción, hemoaglutinación, métodos bioquímicos, interferencias, métodos inmuno-enzimáticos y efecto citopático (daño de los virus a una célula).
REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
Es un método muy sensible ya que mediante ella se pueden detectar cantidades efímeras de ADN. El fundamento de la técnica s basa en al ampliación de un ADN buscado al cual previamente desnaturalizamos. Para ello se añade unos indicadores o cebadores a la reacción, que van a ser complementarios de los que buscamos y por lo tanto inespecíficos. A continuación se separan las cadenas de la doble hélice de ADN uniéndose los cebadores en 2 puntos específicos, por lo tanto se dará una hibridación formándose ADN de doble cadena de 2 puntos. Al añadir la polimerasa de thermus aquaticus y los componentes necesarios para la síntesis de ADN comenzará a sintetizarse este ADN y se ha acotado
A continuación se repite de nuevo la reacción: ~ Desnaturalización del ADN sintetizado ~ Unión de los cebadores
~ Síntesis del ADN
Repitiendo estos ciclos sucesivamente se consigue una elevación exponencial del ADN buscado. El resultado es que a partir de pocas unidades del microorganismo va a poder detectarse aplicando su ADN, y revelando la obtención por hibridación con una sonda específica por método de ELISA o por electroforesis en gel de agarosa.
Inconvenientes: dificultad de la realización d la técnica. Existen falsos negativos y falsos positivos.
TAXONOMÍA
Los virus se dividen en familias según el tipo y la forma del genoma. También según la forma y el tamaño la estructura y el modo de replicación de la partícula viral por lo tanto una primera clasificación divide a los virus según contengan ARN ó ADN.
• Las principales familias de virus ADN que afectan al hombre son: ~ Pavoviridae
~ Papovaviridae ~ Adenoviridae ~ Hepadnaviridae ~ Herpesviridae
• Las principales familias de virus ARN que afectan al hombre son: ~ Reoviridae ~ Picornaviridae ~ Retroviridae ~ Orthomyxoviridae ~ Paramyxoviridae ~ Phabdoviridae