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Las modificaciones realizadas al protocolo de purificación de virus incrementaron el rendimiento partículas virales, ocho veces más para BMV y cuatro veces mayor para CCMV, con respecto a los rendimientos previamente obtenidos en el grupo de investigación.

Se lograron sintetizar nanopartículas tipo virus de CCMV y BMV que contienen el péptido DCD-1L en su interior. A su vez, fue posible optimizar el protocolo de síntesis de VLPs tal que el volumen de los reactivos utilizados fue disminuido a volúmenes menores a los 10 mL. Esto también agilizó la reacción, disminuyendo el tiempo de síntesis de 36 horas a 3 horas lo cual establece un escenario favorable para escalar el proceso fuera de condiciones de laboratorio.

La variación en la relación de masa entre el péptido y la proteína de cápside produce estructuras distintas, donde incrementar la masa de proteína de cápside deja de favorecer la formación de VLPs íntegras y produce partículas rotas.

Las VLPs obtenidas en condiciones ideales presentaron una geometría cuasi-esférica con una distribución de tamaño de una población predominante con número de triangulación igual 3. Este valor fue determinado mediante la medición de tamaño de partículas a través de dispersión dinámica de luz y microscopía electrónica de transmisión, donde el tamaño promedio de las VLPs fue de 29.69 nm.

Se determinó que hay 554.4 moléculas de DCD-1L por cada VLP mediante análisis por densitometría.

Es posible funcionalizar la superficie de la cápside del virus nativo con antibióticos, así como de las VLPs mediante el método de la carbodiimida. Se comprobó la presencia del antibiótico aztreonam mediante espectrometría ATR-FTIR, mientras que los análisis por DLS y TEM determinaron que las partículas mantienen su estructura y solo presentan un incremento en el diámetro menor a 10 nm.

Suspender las VLPs en una solución amortiguadora enriquecida con Mg2+ _{estabiliza las VLPs para su}

funcionalización. Así mismo, la medición adicional por DLS sugiere que las VLPs se mantienen estables en esta disolución a los 30 días de su almacenamiento a 4 °C. Esto aplica tanto para BMV VLPs como para CCMV VLPs.

De manera resumida, se observó que el péptido DCD-1L también puede ser encapsidado en CCMV al replicar las condiciones de síntesis de VLPs utilizadas para el BMV. Similarmente, el análisis por DLS mostró que la población de estas nanopartículas permanece estable un mes tras su almacenamiento a 4 °C. Las similitudes estructurales del CCMV con el BMV sugieren que, el virus nativo de CCMV también puede ser funcionalizado con antibióticos mediante el método de la carbodiimida, por lo cual atraviesa la misma formación de enlaces covalentes entre proteínas de cápside dada por la activación de los grupos carboxilo de la superficie de la cápside del virus como fue observado mediante SDS-PAGE. Esto incita a explorar con profundidad el potencial del CCMV como base para VLPs antimicrobianas y comparar su efectividad contra las VLPs sintetizadas a través del BMV.

El ensayo de actividad antimicrobiana muestra que las VLPs funcionalizadas con el antibiótico aztreonam poseen un efecto antimicrobiano superior sobre Escherichia coli en comparación con Staphylococcus aureus. Futuros experimentos podrán determinar el potencial real de estas nanopartículas dado que este es el primer trabajo de encapsidación de un péptido antimicrobiano en partículas tipo virus.

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