But Melisa is at school, how can that be?

Para determinar la linealidad del método, se evaluaron 5 soluciones estándares comprendidas entre 5 y 25 µg/mL de cianidina-3- glicosido por triplicado, empleándose un cromatógrafo Agilent 1100 con arreglo de diodos, se utilizó un detector UV-Visible con una columna Octadecilsilano (C18) de 150 mm de longitud y 4,6 mm de diámetro interior; como fase móvil se empleó una solución A (HCOOH/H2O/MeOH proporción 1:4:5) y una solución B (HCOOH/H2O proporción 1:9), con un tiempo de recorrido de 20 minutos, en una gradiente lineal de 10% de A hasta 73% de A por 10 minutos, seguida de una elusión isocrática (73% de A) por 2 minutos y finalmente una gradiente lineal de 73 % de A hasta 10% de A por 8 minutos; leyéndose a una longitud de onda de 520 nm, con una velocidad de flujo de 1,2 mL/min., se inyectó una muestra de 10 µL, a una temperatura de 30 °C

2.2.6. DETERMINACIÓN DEL LÍMITE DE DETECCION

Se preparó soluciones estándares de cianidina-3-glicosido menores a 5 µg/mL, hasta encontrar la concentración, a la cual en el cromatograma aparezca un pico en el tiempo de retención

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característico del analito, pero que no sea cuantificable por el equipo. Luego de encontrar dicha concentración se corrió por triplicado, obteniéndose un promedio.

2.2.7. DETERMINACIÓN DEL LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN

Se obtuvo aplicando la fórmula:

L.C.= (10/3) L.D.

Dónde:

L.C.: Limite de cuantificación. L.D.: Limite de detección.

2.2.8. DETERMINACIÓN DE LA PRECISIÓN DEL SISTEMA

Para determinar la precisión del sistema, se evaluó mediante cinco determinaciones. Se preparó una muestra de 15 µg/mL de cianidina-3-glicosido, y se analizaron mediante un cromatógrafo Agilent 1100 con arreglo de diodos, se utilizó un detector UV-Visible con una columna Octadecilsilano (C18) de 150 mm de longitud y 4,6 mm de diámetro interior; como fase móvil se empleó una solución A (HCOOH/H2O/MeOH proporción 1:4:5) y una solución B (HCOOH/H2O proporción 1:9), con un tiempo de recorrido de 20 minutos, en una gradiente lineal de 10% de A hasta 73% de A por 10 minutos, seguida de una elusión isocrática (73% de A) por 2 minutos y finalmente una gradiente lineal de 73 % de A hasta 10% de A por 8 minutos; leyéndose a una longitud de onda de 520 nm,

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con una velocidad de flujo de 1,2 mL/min., se inyectó una muestra de 10 µL, a una temperatura de 30 °C.

2.2.9. DETERMINACIÓN DE LA PRECISIÓN DEL MÉTODO

Para determinar la precisión del método, se evaluó mediante nueve determinaciones con tres niveles de concentración. Se prepararon muestras de 12 µg/mL, 15 µg/mL y 18 µg/mL de cianidina-3- glicosido por triplicado, y se analizaron mediante un cromatógrafo Agilent 1100 con arreglo de diodos, se utilizó un detector UV- Visible con una columna Octadecilsilano (C18) de 150 mm de longitud y 4,6 mm de diámetro interior; como fase móvil se empleó una solución A (HCOOH/H2O/MeOH proporción 1:4:5) y una solución B (HCOOH/H2O proporción 1:9), con un tiempo de recorrido de 20 minutos, en una gradiente lineal de 10% de A hasta 73% de A por 10 minutos, seguida de una elusión isocrática (73% de A) por 2 minutos y finalmente una gradiente lineal de 73 % de A hasta 10% de A por 8 minutos; leyéndose a una longitud de onda de 520 nm, con una velocidad de flujo de 1,2 mL/min., se inyectó una muestra de 10 µL, a una temperatura de 30 °C.

2.2.10. DETERMINACIÓN DE LA EXACTITUD

La exactitud del método se evaluó mediante nueve determinaciones con tres niveles de concentración. Se añadieron

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cantidades conocidas de cianidina-3-glicósido a la muestra problema analizada previamente para obtener concentraciones finales de 27 µg/mL, 30 µg/mL y 33 µg/mL por triplicado y se analizaron mediante un cromatógrafo Agilent 1100 con arreglo de diodos, se utilizó un detector UV-Visible con una columna Octadecilsilano (C18) de 150 mm de longitud y 4,6 mm de diámetro interior; como fase móvil se empleó una solución A (HCOOH/H2O/MeOH proporción 1:4:5) y una solución B (HCOOH/H2O proporción 1:9), con un tiempo de recorrido de 20 minutos, en una gradiente lineal de 10% de A hasta 73% de A por 10 minutos, seguida de una elusión isocrática (73% de A) por 2 minutos y finalmente una gradiente lineal de 73 % de A hasta 10% de A por 8 minutos; leyéndose a una longitud de onda de 520 nm, con una velocidad de flujo de 1,2 mL/min., se inyectó una muestra de 10 µL, a una temperatura de 30 °C.

2.2.11. DETERMINACIÓN DE LA ROBUSTEZ

La robustez del método se evaluó mediante doce determinaciones con dos parámetros a evaluar (cambio en la temperatura y cambio en la velocidad de flujo). Para el cambio de temperatura se evaluó a tal cual, a 20 °C y a 40 °C, para el cambio en la velocidad de flujo de evaluó tal cual, a -0,1 mL (1,1 mL/min) y a +0,1 mL (1,3 mL/min), cada una por duplicado. Se preparó una muestra de 15 µg/mL de cianidina-3-glicosido y se analizaron mediante un cromatógrafo Agilent 1100 con arreglo de diodos, se utilizó un detector UV-Visible

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con una columna Octadecilsilano (C18) de 150 mm de longitud y 4,6 mm de diámetro interior; como fase móvil se empleó una solución A (HCOOH/H2O/MeOH proporción 1:4:5) y una solución B (HCOOH/H2O proporción 1:9), con un tiempo de recorrido de 20 minutos, en una gradiente lineal de 10% de A hasta 73% de A por 10 minutos, seguida de una elusión isocrática (73% de A) por 2 minutos y finalmente una gradiente lineal de 73 % de A hasta 10% de A por 8 minutos; leyéndose a una longitud de onda de 520 nm, con una velocidad de flujo de 1,2 mL/min., se inyectó una muestra de 10 µL, a una temperatura de 30 °C.

2.2.12 DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACION DE CIANIDINA-3- GLICOSIDO EN EL MAIZ MORADO (Zea mays L.)

Preparada las muestras se procedieron a analizar mediante un cromatógrafo Agilent 1100 con arreglo de diodos, se utilizó un detector UV-Visible con una columna Octadecilsilano (C18) de 150 mm de longitud y 4,6 mm de diámetro interior; como fase móvil se empleó una solución A (HCOOH/H2O/MeOH proporción 1:4:5) y una solución B (HCOOH/H2O proporción 1:9), con un

tiempo de recorrido de 20 minutos, en una gradiente lineal de 10% de A hasta 73% de A por 10 minutos, seguida de una elusión isocrática (73% de A) por 2 minutos y finalmente una gradiente lineal de 73 % de A hasta 10% de A por 8 minutos; leyéndose a una longitud de onda de 520 nm, con una velocidad de flujo de 1,2

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mL/min., se inyectó una muestra de 10 µL, a una temperatura de 30°C.