129 occupy our attention.

CLAUDE BERNARD a finales del siglo XIX, estableció por primera vez las bases teóricas para crear un sistema artificial en el que pudieran sobrevivir las células o tejidos extraídos de un organismo vivo, independientemente de él. No obstante, se considera a ROSS HARRISON (1907) el iniciador de los cultivos de tejidos, puesto que fue quien comenzó a cultivar tejidos de anfibios. Durante esa época, la limitación más importante para el establecimiento de los cultivos era poder conseguir un medio nutritivo adecuado.

A principios del siglo XX, se inició el uso de los cultivos celulares y tisulares, que proporcionaron un método que permitía estudiar órganos y tejidos aislados del medio original, lo que hizo posibles conocer mejor la composición, fisiología, metabolismo, bioquímica y biología molecular de los cultivos.

Los estudios in vitro con cultivos de células animales permiten obtener datos preliminares del efecto biológico de cualquier molécula, sustancia o medicamento sobre células eucariotas en un sistema de variables ambientales muy controladas.

Entre las aplicaciones de los cultivos destacan: - mantenimiento y propagación de líneas tumorales, - requerimientos nutricionales y de factores de crecimiento, - estudio de las interacciones célula-sustrato y célula-célula, - estudios sobre la diferenciación y desdiferenciación celular, - manipulación genética de células eucarióticas,

- obtención de sustancias del sobrenadante producidas por el cultivo (anticuerpos monoclonales, enzimas, factores de crecimiento),

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- estudio del crecimiento y características antigénicas de una población celular,

- efectos citostáticos y citotóxicos de sustancias, etc.

Así, mediante tests de proliferación y citoxicidad bien contrastados pueden determinarse, como es objetivo de este trabajo, valores de crecimiento y viabilidad celular de cultivos en contacto con la sustancia a ensayar respecto de cultivos control sin tratamiento. Cuantitativamente, uno de los datos farmacéuticos más relevantes que suele extraerse de estos tests biológicos es el valor de IC 50, que permite conocer la concentración a la cual una sustancia provoca una inhibición de funciones sobre un sistema biológico in vitro, de modo que puede determinarse de manera precisa la concentración de sustancia que provoca una inhibición de la proliferación celular de un 50 % respecto del control.

En particular, la línea celular Vero se utiliza en investigación fundamentalmente para realizar bioensayos de nuevos fármacos en los que se pretende comprobar en primera instancia su citotoxicidad o el efecto sobre la proliferación de células animales sanas. Presenta características genotípicas favorables, relativamente libre de variabilidad con el tiempo frente a otras líneas de células sanas sin genes tumorales naturales ni inducidos, ausencia de agentes externos o contaminantes, su cariotipo aneuploide estable que no forma tumores dentro de un rango amplio de subcultivos y su rápido crecimiento y adaptabilidad rentabiliza los ensayos. Además de todo ello ha sido la línea celular de elección para nuestro estudio debido a la relativamente escasa bibliografía en la que se relaciona a sustancias extraídas de materias primas vegetales con estructuras moleculares determinadas. Además la línea celular Vero se emplea como sustrato para la formación de colonias víricas y ensayos posteriores con diferentes sustancias antivirales y sus efectos en diversas especies de virus. Sin embargo el principal uso de esta línea es la producción industrial de varias vacunas, entre la que destaca la de la

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poliomielitis, ampliamente distribuidas en la actualidad, en cuyo proceso de síntesis cultivos masivos de células Vero se usan como sustrato para la multiplicación vírica masiva y la obtención y posterior tratamiento de los antígenos producidos o virus inactivos.

La línea celular CaCo-2, derivada de un adenocarcinoma de colon

humano, fue desarrollada por el Instituto para la Investigación oncológica Sloan-Kettering en la investigación coordinada por el profesor Jorgen-Fogh. Aunque derivan de adenocarcinoma de intestino grueso, cuando se cultivan bajo condiciones específicas se diferencian y polarizan sus núcleos de tal manera que su fenotipo, morfológica y función, se asemeja a los enterocitos que recubren el intestino delgado. Las células Caco-2 expresan uniones estrechas, microvellosidades, y un número de enzimas y transportadores que son características de estos enterocitos: peptidasas, esterasas, P-glicoproteína, transportadores de captación de aminoácidos, ácidos biliares, ácidos carboxílicos, etc.

Las células Caco-2 se usan más comúnmente en confluencia que de forma aislada, formándose una monocapa de células epiteliales polarizadas que proporciona una barrera física y bioquímica para el paso de iones y moléculas pequeñas. La monocapa Caco-2 se utiliza ampliamente en toda la industria farmacéutica como un modelo in vitro de la mucosa intestinal humana para predecir la absorción de fármacos administrados por vía oral. La correlación entre la permeabilidad aparente vitro a través de monocapas de Caco-2 y la fracción absorbida in vivo (FA) está bien establecida.

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- Estudiar el efecto de los extractos de semilla de uva, extracto de cacao, extracto de pomelo, extracto de piel de limón y extractos vegetales purificados de apigenina potásica y de naringenina potásica sobre la

viabilidad y proliferación de las líneas celulares Vero y CaCo-2.

- Determinar la influencia sobre la apoptosis y el ciclo celular de diversas concentraciones de dichos extractos vegetales sobre ambas líneas clelulares.

- Establecer un orden en la capacidad antiproliferativa atendiendo a la conformación molecular de flavonoides, flavonoides glicosilados y polímeros de flavonoides.

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