La tabla de solución de problemas de separación está diseñada para solucionar la mayoría de los problemas de separación que surgen durante una separación típica. La tabla indica: el Problema del instrumento, los Síntomas que presenta dicho problema, las Causas posibles del problema y las Medidas correctivas que deben adoptarse para solucionarlo.
Para realizar el uso más eficaz posible de la Tabla 2.11, tenga en cuenta los siguientes puntos: r Lea y considere todas las Medidas correctivas que se indican para un problema específico
antes de aplicar cualquiera de ellas. Probablemente le ofrezcan información útil e importante.
r Muchos de los problemas pueden solucionarse con diversas medidas correctivas. r Algunos problemas presentan síntomas similares pero requieren la aplicación de medidas
correctivas diferentes.
r Las causas posibles son generalmente la raíz del problema y pueden manifestarse de muy diversas formas que aparentemente no presentan ninguna relación entre ellas.
La sensibilidad es más baja de lo esperado (los datos se acumulan en los canales inferiores).
Problema en el sistema hidráulico. Compruebe si hay burbujas u obstrucciones parciales. La potencia del láser es demasiado baja. Aumente la potencia del láser. La lámpara de alineación del LED de
prueba está encendida.
Apague la lámpara del LED de prueba.
Cámara de flujo sucia. Limpie la cámara de flujo. Consulte la sección LIMPIEZA DE LA PUNTA DE LA CÁMARA DE FLUJO (SIN QUITARLA) del manual Procedimientos especiales y solución de problemas.
El sistema óptico está desalineado. Alinee el sistema óptico. Consulte la
sección 2.20, ALINEACIÓN ÓPTICA
PARCIAL.
Tabla 3.11 Separación
Problema/Síntomas Causas posibles Medidas correctivas
PUNTO DE RUPTURA INESTABLE:
r La última gota unida se desplaza lentamente hacia arriba y hacia abajo. r La última gota unida vuelve
a cambiar de nuevo tres minutos después de estabilizarse.
r Dificultades para obtener el punto de ruptura deseado.
Tubos de muestras antiguos. Cambie los tubos por otros nuevos. Consulte la
sección 2.10, SUSTITUCIÓN DEL CONJUNTO DE
TUBOS FLEXIBLES DE LA MUESTRA.
Fisura o ligera obstrucción en la cámara de flujo.
Inspeccione la cámara de flujo y sustitúyala o límpiela en caso necesario.
Cristal bimorfo inestable. Sustituya el cristal bimorfo, asegúrese de utilizar un cristal bimorfo protegido.
Fugas en el sistema neumático. Localice la fuga y repárela. La cámara de flujo no es adecuada
para la aplicación.
Utilice la cámara de flujo de cuarzo de alta velocidad y 76 µm para conseguir la mejor estabilidad en la separación.
La separación permanece estable durante 1 o 2 horas pero nunca vuelve al mismo lugar hasta la mañana siguiente.
Temperatura ambiente demasiado alta. Revise las variaciones de temperatura a diario. Una variación de la temperatura ambiente de >1 °C en 1 hora puede provocar un cambio en la formación de gotas.
Encienda (o apague) el aire acondicionado. La temperatura de servicio debe encontrarse entre 18 y 29 °C.
NO SE OBTIENE NITIDEZ NI ENFOQUE DE LAS GOTAS CAUDAL ABAJO:
r Ningún ajuste de frecuencia genera gotas
suficientemente enfocadas y nítidas.
r Las gotas satélite no desaparecen.
Obstrucción o burbujas en el cuerpo
de la cámara de flujo. 1. Pulse 2 o 3 veces y después .
2. Limpie la cámara de flujo. Consulte la sección LIMPIEZA DE LA PUNTA DE LA CÁMARA DE FLUJO (SIN QUITARLA) del manual
Procedimientos especiales y solución de problemas.
Problema o fuga en el sistema hidráulico o neumático.
1. Inspeccione el tapón del depósito de líquido envolvente, el filtro de líquido envolvente, los tubos de líquido envolvente de todo el sistema (cuando detecte burbujas, utilice agua jabonosa para localizar las fugas).
2. Compruebe que los reguladores de líquido envolvente y muestra funcionan correctamente. Un funcionamiento cíclico del regulador demasiado frecuente (<de 5 a 10 segundos entre ciclos repetitivos) indica un problema. Llame al servicio de atención al cliente.
NO SE OBTIENE LA SEPARACIÓN DE GOTAS SUFICIENTE CON EL 90% DE LA
UNIDAD DE CRISTAL:
Con el 90% o más de la unidad de cristal, la separación de gotas se sigue realizando demasiado caudal abajo (todavía por debajo de la placa base).
Problema o fuga en el sistema hidráulico o neumático. Cristal bimorfo defectuoso.
1. Inspeccione el tapón del depósito de líquido envolvente, el filtro de líquido envolvente, los tubos de líquido envolvente de todo el sistema (cuando detecte burbujas, utilice agua jabonosa para localizar las fugas).
2. Compruebe que los reguladores de líquido envolvente y muestra funcionan correctamente. Un funcionamiento cíclico del regulador demasiado frecuente (<de 5 a 10 segundos entre ciclos repetitivos) indica un problema. Llame al servicio de atención al cliente. La cámara de flujo o el cuerpo no
están suficientemente apretados.
Asegúrese de que la cámara de flujo y el cuerpo estén suficientemente apretados.
r Cámara de flujo obstruida o agrietada.
r Burbujas en la cámara de flujo.
1. Retire, limpie e inspeccione la cámara de flujo. Consulte la sección LIMPIEZA DE LA PUNTA DE LA CÁMARA DE FLUJO (DESPUÉS DE
QUITARLA) del manual Procedimientos especiales y solución de problemas. Si la cámara está agrietada, sustitúyala. Consulte la
sección 2.8, SUSTITUCIÓN DE LA PUNTA DE
LA CÁMARA DE FLUJO.
2. Pulse 2 o 3 veces y después .
CAUDALES LATERALES DOBLES:
Aparece claramente un segundo caudal lateral entre el correcto y el centro a ambos lados.
El valor Front Porch no está correctamente configurado.
Con la prueba de separación activada, 3 gotas separadas, ajuste el valor de Front Porch, observe los caudales laterales hasta que formen un único caudal lateral (ajuste predeterminado 8).
Indicios de problemas en la cámara de flujo.
Sustituya la cámara de flujo. Consulte la
sección 2.9, SUSTITUCIÓN DEL CUERPO DE LA
CÁMARA DE FLUJO.
GOTAS INESTABLES TRAS UN PERÍODO DE TIEMPO:
r Las gotas no permanecen estables durante más de 3 o 4 horas
r Se necesita un cambio de más del 10-15% en la unidad de cristal para obtener la separación de gotas antes.
Inestabilidad en el sistema hidráulico o neumático.
1. Ajuste ligeramente la presión del líquido envolvente (±1,0-2,0 psi).
2. Realice el procedimiento de configuración de la separación desde el principio. Consulte la sección Ajuste de la frecuencia del capítulo SEPARACIÓN de la Guía del usuario. Cristal bimorfo inestable. Llame al servicio de atención al cliente para
sustituir el cristal bimorfo. Asegúrese de que el cristal está correctamente colocado y de que se utiliza un cristal bimorfo protegido.
DISPERSIÓN HORIZONTAL ENTRE LOS CAUDALES LATERAL Y CENTRAL:
r Dispersión horizontal constante de los caudales laterales hacia el caudal central.
r Placas deflectoras húmedas. r Líquido acumulado en la
parte superior de los tubos de separación.
r Mala recuperación y pureza de separación.
El filamento que conecta la última gota unida es demasiado fino o demasiado grueso.
Aumente o reduzca la unidad de cristal para estrechar los caudales laterales.
La velocidad de datos es demasiado alta para el tipo de muestra
específico.
1. Reduzca la velocidad de datos.
2. Filtre la muestra con una malla de nailon. 3. Retire las placas, límpielas con H2O
desionizada, séquelas concienzudamente y vuelva a instalarlas. Consulte el manual de Procedimientos especiales y solución de problemas, sección LIMPIEZA DE LAS PLACAS DEFLECTORAS.
r Dispersión horizontal irregular de los caudales laterales hacia el caudal central.
r Las válvulas (reguladores) emiten un sonido como si estuvieran continuamente girando (chasquidos).
La presión del líquido envolvente no es constante.
1. Localice la fuga en el líquido envolvente y corríjala.
2. Cambie el regulador.
La dispersión horizontal vuelve a aparecer poco después de haber arreglado el problema provisionalmente con un procedimiento de limpieza o eliminación de burbujas.
Los tubos de líquido envolvente están pinzados.
1. Enderece los tubos desde el cuerpo de la cámara para eliminar los pinzamientos. 2. Algunas veces el problema se soluciona tirando
ligeramente del tubo antes de que se oculte detrás del área de recogida para separación. Partículas negras o verdosas en
la varilla de inserción del cuerpo de la cámara de flujo.
1. Corrosión en la varilla de inserción que provoca la carga irregular de gotas y
obstrucciones en la cámara de flujo.
2. Los empalmes de paso del flujo del soporte de la válvula no son los correctos (metálicos) o los empalmes de PVC (correctos) se han agrietado.
El problema debe solucionarse antes de continuar con la separación. Llame al servicio técnico para repararlos.
Localice el empalme agrietado o dañado y limpie todo el sistema para eliminar los restos metálicos generados por la electrólisis de la varilla de inserción.
La dispersión horizontal se produce después de sustituir o ajustar la cámara de flujo.
El cuerpo, la punta o la pinza de carga del flujo están sueltos.
Compruebe que la cámara de flujo y el cuerpo de flujo están suficientemente apretados.
Cristal bimorfo inestable. Sustituya el cristal bimorfo, asegúrese de utilizar un cristal bimorfo protegido.
Tabla 3.11 Separación (continuación)
LA ÚLTIMA GOTA UNIDA SE DESPLAZA MÁS DE 3 GOTAS AL
ENFOCAR LAS GOTAS:
1. La última gota unida se desplaza más de 3 gotas caudal abajo (hacia la izquierda) cuando la frecuencia se ajusta para que las gotas sean más nítidas.
2. Determinadas frecuencias ofrecen una separación mayor, pero cuando la frecuencia se aumenta o se reduce un 0,1%, la última gota unida se desplaza caudal abajo y queda muy desenfocada.
No se ha determinado la frecuencia correcta.
1. Ajuste la frecuencia hasta lograr la separación más alta posible (próxima a la cámara de flujo) y que las gotas aparezcan enfocadas y nítidas. 2. Coloque la tangente del cursor en la parte
inferior de la última gota unida. Si la última gota unida no está visible sobre la parte superior del área del collar de carga, baje el cuerpo de deflexión ligeramente o aumente la unidad de cristal para ver la última gota unida.
El cristal bimorfo no está lo suficientemente caliente.
Deje que el cristal bimorfo se caliente al menos 30 minutos antes de determinar la frecuencia correcta del cristal.
Obstrucción o burbujas en el cuerpo
de la cámara de flujo. 1. Pulse 2 o 3 veces y después .
2. Limpie el cuerpo de la cámara de flujo.
SE REQUIERE UNA UNIDAD DE CRISTAL BAJA PARA ESTABLECER LA RUPTURA CON SEPARACIÓN ESTÁNDAR (NO HPSS):
El porcentaje de unidad de cristal normalmente se encuentra entre el 20 y el 40%; ahora tan sólo es necesario un 10% o menos para obtener un punto alto de separación de gotas.
Pequeña obstrucción en la cámara de flujo.
Retire, limpie e inspeccione la cámara de flujo antes de sustituirla. Consulte la sección LIMPIEZA DE LA PUNTA DE LA CÁMARA DE FLUJO (DESPUÉS DE QUITARLA) del manual Procedimientos especiales y solución de problemas.
La punta instalada es de orificio pequeño (76 µm).
Compruebe que ha instalado la punta correcta.
SE REQUIERE UNA FRECUENCIA BAJA PARA ESTABLECER LA RUPTURA:
La frecuencia normalmente se encuentra alrededor de 30 kHz; ahora se obtiene un punto alto de ruptura por debajo de 20 kHz.
Los tubos de líquido envolvente
están pinzados. 1. Retire la muestra y pulse varias veces
para volver a colocar la última gota en el cursor de referencia.
2. Compruebe que los caudales laterales son estables y que no se disgregan.
3. Sin la muestra activada, pulse para lavar la línea de muestras y eliminar las posibles burbujas de aire restantes. Cuando la máquina esté "procesando", active la muestra. (La muestra se procesa automáticamente, la presión se aplica durante el período de tiempo especificado y la última gota unida no debería moverse.)
Filtro de líquido envolvente atascado. Cambie el filtro de líquido envolvente. Consulte la
sección 2.12, SUSTITUCIÓN DEL FILTRO DEL LÍQUIDO ENVOLVENTE O DE PURGADO DE
RESIDUOS.
Presión del líquido envolvente demasiado baja.
Aumente la presión del líquido envolvente a 12 psi.
La punta instalada es de orificio grande (140 µm).
Compruebe que ha instalado la punta correcta.
Tabla 3.11 Separación (continuación)
PUREZA DE SEPARACIÓN BAJA: Reprocesamiento de muestras separadas <90%. No se ha utilizado Coincidence ni PPU en la configuración de la separación.
Active Coincidence Abort y PPU.
Los tubos de separación están demasiado cerca del caudal central.
Aumente la deflexión entre un 5 y un 10%, retire un poco los tubos de separación.
Las regiones de separación incluyen células no deseadas que no se detectaron en el histograma presentado.
Incluya todas las delimitaciones del histograma en la ecuación de separación.
El valor del discriminador es demasiado alto.
Reduzca el discriminador.
Retardo y fase de separación incorrectamente ajustados.
Revise el procedimiento de configuración de la separación (consulte la sección Ajuste de la frecuencia del capítulo SEPARACIÓN de la Guía del usuario) y compruebe que las gotas se separan con el retardo correcto.
Demasiadas gotas separadas. Utilice el modo de separación 3 o 6. Tubos de separación demasiado
abajo.
Utilice soportes de tubos de separación que eleven el tubo de ensayo de 12 x 75 mm para corregir la altura en el área de separación.
Se han utilizado tubos de plástico para la separación.
Utilice tubos de cristal con 200-500 µl de líquido en el fondo.
Ruptura inestable. Revise la estabilidad de la última gota unida y compruebe que el sistema es estable.
Adopte las mismas medidas correctivas que las indicadas en la página anterior para el síntoma “La última gota unida se desplaza más de 3 gotas al enfocar las gotas.”
RECUPERACIÓN DE SEPARACIÓN BAJA:
El contenido del tubo de recogida para separación es <50% del recuento de separación.
Los tubos de separación recogen todo el caudal de separación.
1. Utilice soportes de tubos de separación que eleven el tubo de ensayo 12 x 75-mm para corregir la altura en el área de separación. 2. Aumente la deflexión.
3. Utilice tubos de cristal que contengan 200-500 µl de líquido.
La matriz de separación no es correcta.
Retardo o fase de separación incorrectamente ajustados.
Consulte la sección SEPARACIÓN de la Guía del usuario.
VAHO EN EL ÁREA DE SEPARACIÓN:
r La parte superior de los tubos de separación recoge gran cantidad de líquido. r Mala pureza de separación. r Placas deflectoras húmedas.
Las gotas satélite caudal abajo no se han recombinado.
1. Ajuste la frecuencia del cristal mientras observa las gotas caudal abajo para comprobar que no aparecen gotas satélite.
2. Retire las placas, límpielas con H2O desionizada, séquelas concienzudamente y vuelva a instalarlas. Consulte el manual de Procedimientos especiales y solución de problemas, sección LIMPIEZA DE LAS PLACAS DEFLECTORAS.
NO HAY DEFLEXIÓN:
No hay deflexión de los caudales laterales cuando la prueba de separación está activada y la deflexión es de ~85%.
Placas deflectoras con arco eléctrico y cortocircuito.
Pulse RESET en el citómetro, retire las placas deflectoras, límpielas con H2O desionizada,
séquelas concienzudamente y vuelva a instalarlas. Consulte el manual de Procedimientos especiales y solución de problemas, sección LIMPIEZA DE LAS PLACAS DEFLECTORAS.
NO HAY RUPTURA DE GOTAS:
Al intentar ajustar la unidad de cristal, la frecuencia no respondió.
1. Las placas deflectoras con arco eléctrico provocan el bloqueo del circuito de la unidad de cristal. 2. Problema de suministro
eléctrico.
1. Apague el interruptor de alimentación del citómetro (guarde primero los ajustes si lo desea).
2. Limpie y seque las placas deflectoras. Consulte el manual de Procedimientos especiales y solución de problemas, sección LIMPIEZA DE LAS PLACAS DE DEFLECTORAS.
3. Llame al servicio de atención al cliente para revisar el suministro eléctrico.
EL PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA AFECTA AL PUNTO DE RUPTURA:
Cuando se pulsa el botón RUN y se aplica "presión" a la muestra, el punto de ruptura se desplaza una gota.
1. Aire en la línea de muestras. 2. Hay una perturbación en el tubo
de muestra a medida que entra en el líquido envolvente.
1. Retire la muestra. Pulse varias veces para volver a colocar la última gota en el cursor de referencia.
2. Compruebe que los caudales laterales son estables y que no se disgregan.
3. Sin la muestra activada, pulse para lavar la línea de muestras y eliminar las posibles burbujas de aire restantes. Cuando la máquina esté "procesando", active la muestra. (La muestra se procesa automáticamente, la presión se aplica durante el período de tiempo especificado y la última gota unida no debería moverse.)
Tabla 3.11 Separación (continuación)