PIC Case Study: An In-depth Reflection of the Relationship Between

Para la determinación de este parámetro a continuación se describe la metodología a seguir.

 Se Llevó a peso constante la cápsula de porcelana por una hora a 550°C

 Se dejó enfriar en el desecador y se pesó (peso 1)

 Se homogenizo la muestra y se midió para después llevarla a la capsula.

 Se evaporo la muestra hasta que solamente quedo 2 ml, aproximadamente.

 Posteriormente se llevó la muestra a la estufa a una temperatura de 105°C hasta que se secara.

 Finalmente se enfrió en el desecador y se tomó nuevamente el peso (peso 2).

Cálculos:

Sólidos Totales mg/lt =

Dónde:

Peso 1= Peso de la cápsula sin la muestra Peso 2= Peso de la cápsula con el residuo seco Muestra =Muestra en ml o gr.

Sólidos Totales Volátiles mg/lt =

Muestra Peso Peso2 1)*1000*1000 ( 

Muestra

Peso

Peso2

3)*1000*1000

(



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Dónde:

Peso 3= Peso de la cápsula después de 30 minutos en combustión. Peso 2= Peso de la cápsula con el residuo seco

Muestra =Muestra en ml o gr.

3.3.1.10. Coliformes totales (CT) y Coliformes fecales (CF)

Para la determinación del número más probable (NMP) de Coliformes Totales y Fecales en este tipo de aguas, fue necesario preparar diluciones decimales de la muestra, debido a que se espera que la concentración de coliformes sea superior en estas muestras. El número de diluciones varía mucho, dependiendo del origen de la muestra a tratar. Por lo demás, para su análisis se procedió en la misma forma que para una muestra de agua potable.

Técnica Prueba presuntiva:

Todas las operaciones se realizaron en absolutas condiciones de esterilidad.

 Se agitó vigorosamente la muestra por lo menos 20 veces para lograr una distribución uniforme de los microorganismos.

 Dependiendo del origen de la muestra y el contenido bacteriano esperado, se prepararon las diluciones.

 Para preparar las diluciones, con una pipeta estéril se tomó una muestra de 1 ml de la muestra original y se llevó a uno de los tubos conteniendo 9 ml de agua de dilución estéril, obteniendo de esta manera una dilución de 10-1.

 Se agito el tubo de la dilución 10-1 y con otra pipeta estéril se tomó una muestra de 1 ml y se llevó a otro tubo con 9 ml de agua de dilución estéril para obtener una dilución de 10-2.

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 Se Inoculó asépticamente con 1 ml de muestra por quintuplicado de cada dilución, tubos de fermentación conteniendo caldo lactosado.

 Se incubaron todos los tubos a una temperatura de 35 °C durante 24-48 horas.

 Después de 24 horas de incubación se tomó una primera lectura para observar si hay tubos positivos, es decir, con producción de ácido, si el medio contiene un indicador de pH, turbidez o producción de gas en el interior de la campana Durham.

 De los tubos que en la primera lectura den positivos, ya se pueden hacer las pruebas confirmatorias para coliformes totales y coliformes fecales.

 En caso de no apreciarse crecimiento en el resto de los tubos, continuarán en incubación 24 horas más.

 Después de 48 horas (±2h) a partir de la inoculación, se hace la lectura final.

 Si pasadas 48 hr tampoco se aprecia crecimiento ni producción de gas, los tubos se toman como negativos.

Interpretación:

 Si el total de tubos son NEGATIVOS: El examen se da por terminado, reportando la AUSENCIA DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES en la muestra analizada.

 Todos aquellos tubos que den POSITIVOS para prueba presuntiva se anotarán convenientemente y se procederá a realizar la PRUEBA CONFIRMATORIA para Coliformes Totales y Fecales.

Prueba confirmatoria para coliformes totales:

 A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba presuntiva, agitándolos para homogenizar, inocular con tres asadas tubos conteniendo caldo Lactosa Bilis Verde Brillante (LBVB).

 Incubar durante 48 ± 3 hr a 35 ± 0.5 °C.

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Interpretación:

 Si se observa turbidez y producción de gas: La prueba se considera POSITIVA, debiendo anotar el número de tubos positivos para posteriormente hacer el cálculo del NMP.

 Si en ninguno de los tubos se observa producción de gas, aun cuando se observe turbidez: Se consideran NEGATIVOS, estableciéndose el Código 0,0,0 para efecto del cálculo del NMP.

 Si todos los tubos dan negativos o todos dan positivos, con base en los grados de dilución analizados, considerar la necesidad de repetir el análisis a partir de grados de dilución menores (mayores volúmenes de muestra) o mayores (menores volúmenes de muestra), respectivamente. Prueba confirmatoria para coliformes fecales:

 A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba presuntiva, agitándolos para homogeneizar, inocular con tres asadas tubos conteniendo caldo E.C. (Escherichia coli).

 Incubar durante 24 horas a 44.5 ± 0.2 °C. y después de este período, observar presencia de turbidez y gas.

Interpretación:

 Si se observa turbidez y producción de gas: La prueba se considera POSITIVA, debiendo anotar el número de tubos positivos y establecer el código para posteriormente hacer el cálculo del NMP.

 Si no se observa producción de gas, aun cuando se observe turbidez: Se consideran negativos, estableciéndose el Código 0,0,0 para efecto del cálculo del NMP.

 Si todos los tubos dan negativos ó todos dan positivos, con base en los grados de dilución analizados, considerar la necesidad de repetir el análisis a partir de grados de dilución menores (mayores volúmenes de muestra) ó mayores (menores volúmenes de muestra), respectivamente.

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A continuación se muestra en la figura 5 los procedimientos para la determinación de coliformes totales y fecales, y en la figura 6 podemos ver la interpretación de los coliformes totales y fecales, puesto que en ella podemos observar el índice del NMP y límite confiable de 95 por ciento para varias combinaciones de resultados positivos y negativos.

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Figura 5. Procedimiento y análisis de los resultados de los coliformes totales y fecales.

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Figura 6. Índice del NMP y límite confiable de 95% para varias combinaciones de resultados positivos y negativos cuando se usan: 5 tubos con porciones

de 10 cm3 en cada uno, 5 con porciones de 1cm3 y con 5 porciones de 0.1 cm3 (Bolívar y Moreno, 2012).

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Resultados y Cálculos:

De acuerdo a los tubos positivos en las pruebas confirmativas para Coliformes Totales y Fecales, establecer los códigos correspondientes para calcular por referencia en las tablas estadísticas el NMP de Coliformes Totales y Fecales en 100 mL de agua.

En general se tiene:

Los resultados obtenidos se expresarán de la siguiente manera:

NMP DE COLIFORMES TOTALES: __________ / 100 mL NMP DE COLIFORMES FECALES: __________ / 100 mL

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