3.2 Materials and Methods 61
3.2.3 Point Cloud-based Terrestrial Lidar Metrics 69
Los reactivos que se usan dentro de este medio específico, son indispensables para
el desarrollo del hongo en la realización de la caja madre, que se efectúa en el
aislamiento, estos le ayudan al hongo a desarrollarse dentro de la caja en busca de
obtener mayores colonias del hongo en una misma caja en este proceso, los reactivos
que se utilizan para el medio T son los que se enumeran a continuación:
3.4.1 Agar
Este nos ayuda a que el medio T se gelifique una vez que el medio está dispensado
en la caja petri, que será la caja madre dentro del proceso de aislamiento.
3.4.2 Sacarosa
Este reactivo nos ayuda a darle cierto nivel de azúcar al medio con lo cual el
hongo se podrá desarrollar eficientemente.
3.4.3 Ácido Cítrico
Este ayuda a acidificar el medio.
Estos sirven como fuente nutricional para el desarrollo del hongo dentro del
medio, que debido a las características de Trichoderma tienden a un mejor
desarrollo. Nitrato de Calcio Sulfato de Magnesio Fosfato de Potasio Cloruro de Calcio 3.4.5 Agua Destilada
Nos ayuda a diluir todos los reactivos que se usan para el medio T que
dependiendo de la cantidad de medio que se realiza, dependerá de la cantidad de
agua destilada que se utilizará.
3.4.6 Antibióticos
Los antibióticos nos ayudan a inhibir otro tipo de microorganismos dentro del
proceso de asilamiento, estos inhiben a bacterias y otro tipo de hongos que pudieran
crecer dentro de la caja o reducir su incidencia dentro de la misma y puedan
comenzar a purificar las cepas que se obtengan de cada caja en este proceso. Para
Sulfato de Estreptomicina: Este reactivo nos ayuda a inhibir la presencia de bacterias que pudieran surgir dentro de la caja.
Benomil: Con la ayuda de este reactivo se inhibe el crecimiento de otro tipo de hongo en la caja, lo cual es muy común dentro del aislamiento, por lo que
el uso de éste es importante.
3.4.7 Alcohol Alílico
El Alcohol alílico nos ayuda a inhibir a otro tipo de hongos al igual que bacterias,
con respecto al uso de este reactivo se debe de tener mucho cuidado, ya que es el
reactivo más peligroso que puede causar problemas respiratorios con solo inhalarlo,
por lo que se puede prescindir del uso de este dependiendo del nivel de
contaminación que se tenga en la caja, o de la cantidad de cepas de Trichoderma que
se tengan dentro de la misma.
3.4.8 Agua Destilada Estéril
El agua destilada estéril se la usa para realizar las diluciones de las muestras del
suelo, ésta es estéril con el fin de evitar la presencia de otro tipo de microorganismo
y que solo salgan los que se encuentran en las muestras del suelo.
Este lo usa para esterilizar y limpiar todos los materiales que se usan en el proceso
de aislamiento, incluyendo a la cámara de flujo laminar antes de comenzar el
proceso.
3.4.10 Azul de Metileno
El azul de metileno lo utilizamos en el proceso de identificación de las estructuras
del hongo, de cada cepa que se vaya purificando, lo cual nos dará una idea de que
tipo de Trichoderma tenemos.
3.5Cuarto de Propagación
Este es un espacio del laboratorio en el cual se realizará la propagación del hongo
en donde se debe tener todos los elementos necesarios para este fin; en este cuarto no
es tan preciso la asepsia, pero si se debe trabajar con todos los cuidados necesarios.
En este espacio debemos de tener lo siguiente:
3.5.1 Fundas para Esterilizar.
Estas son fundas especiales que soportan las altas temperaturas con el fin de poder
3.5.2 Perchas
Las perchas serán utilizadas para colocar las cepas del hongo que estén en
sustratos dentro del cuarto de propagación.
3.5.3 Frascos
Los frascos tienen el mismo fin que las fundas, son utilizados para la propagación
de Trichoderma en sustratos y sean almacenados hasta su posterior uso en el
producto.
FIGURA No. 3.20 Frascos
3.5.4 Balde
Éste es utilizado para remojar el sustrato en el que será colocado el hongo para
luego ser esterilizado.
3.5.5 Autoclave
El autoclave nos ayuda a esterilizar todos los materiales que se van a utilizar tanto
en el proceso de aislamiento como en el proceso de propagación, ya que nos
permitirá eliminar todos los microorganismos que puedan tener dichos materiales.
3.5.6 Cámara de Flujo
La cámara de flujo laminar servirá para colocar dentro de las fundas o frascos para
la propagación del hongo, se trabaja dentro de la cámara para evitar o reducir al
máximo la contaminación que pudiéramos tener.
3.5.7 Incubadora
Este equipo nos ayudará a mantener una temperatura estándar y adecuada en la
cual el hongo se desarrollará perfectamente.
Es de suma importancia dentro de este proceso, para lo cual se debe de usar agua
destilada en todos los procesos.
3.5.9 Arrocillo o Arroz
Estos son los medios en los cuales se va a propagar el hongo, el cual sabemos que
es el ideal para que este se desarrolle y se mantenga por un tiempo determinado.
Además se pueden utilizar ambos a la vez dentro de un mismo frasco o funda
haciendo un solo sustrato.
3.6 Aislamiento de especies de Trichoderma del suelo.
3.6.1 Fase de Campo:
Significa la recolección del 5% de las muestras de suelo en las haciendas, ésta
consiste en tomar una pequeña cantidad de suelo en zig-zag a una profundidad de 5 a
10 cm. Estas muestras están constituidas por varias sub-muestras colocadas en
recipientes y luego mezclarlas e introducirlas en fundas de plástico y cada muestra
3.6.2 Determinación de Número de Propàgulo por gramo del Suelo.
3.6.2.1 Metodología
Verificación de la presencia de Trichoderma mediante los siguientes mecanismos:
Se seca una parte de la muestra de suelo a temperatura ambiente en una bandeja de
plástico por dos días, después de secadas las muestras tienen que ser trituradas y
tamizadas, con un tamiz que posea una malla de 2 mm, de diámetro.
Se determinará el peso seco de dos gramos de cada muestra secados en estufa por
una hora a 105ºC.
Luego se tomarán 10g. de suelo de la misma muestra a analizar, ésta es colocada
en un enlenmeyer con 90 ml de agua destilada estéril y luego serán agitados por 20
minutos con el fin de obtener una suspensión terrosa homogénea.
Muestra de suelo tamizada Muestra de suelo diluida
Fuente: PMBA ESPOL Fuente: PMBA ESPOL
Se realiza una caja madre en la cual se coloca con una pipeta 1 ml de suspensión
terrosa homogénea y luego se verterán 15 ml de sustrato nutritivo selectivo llamado
Medio T para Trichoderma, o en su caso puede utilizarse PDA (Papa Dextrosa
Agar), la gota de la suspensión terrosa tiene que ser repartida uniformemente con
movimientos circulares sobre la caja petri madre.
FIGURA No. 3.23 FIGURA No. 3.24 Medio T dentro de la Cámara de flujo Cajas Madres y Cajas Hijas
Una vez solidificado el medio de cultivo, se perforará con un sacabocados de 8
mm. de diámetro más o menos de 70 a 80 círculos de la caja petri madre, siendo
luego transferidos los círculos proporcionalmente a 5 cajas petri que contienen el
mismo sustrato selectivo o PDA utilizando para ello un asa de transferencia.
FIGURA No. 3.25 FIGURA No. 3.26
Cajas Madres y Cajas Hijas Caja hija con muestra de caja madre
Fuente: PMBA ESPOL Fuente: PMBA ESPOL
Las cajas petri con los círculos serán colocados en incubación en oscuridad a 28ºC
por 5 días luego serán retirados y dejados a la luz y temperatura ambiente por 2 días.
Caja hija con muestra caja madre Caja hija
Fuente: PMBA ESPOL Fuente: PMBA ESPOL
Al séptimo día se contarán las colonias de Trichoderma que estuvieran presentes
sobre los círculos.
FIGURA No. 3.29 Caja Hija
La densidad de la población de Trichoderma viene medida por propágulos/gr de
tierra seca, que está calculada mediante la fórmula de Davet (1979) oportunamente
modificada por D´ercale y otros:
.2 200 2 × × × = ps n X
d
D
Donde: X= número de propágulos/gr de suelo seco.
n= número de colonias/círculo D= diámetro de la caja petri madre d= diámetro del círculo
ps= peso seco de la muestra puesta en dilución.
Por cada muestra de suelo serán tomadas en consideración las colonias con
características morfológicas diversas, las cuales fueron remultiplicadas en cultivo
puro con la clasificación de los diferentes aislamientos basados en la observación
morfológica ramas de conidiosporos, forma y dimensión de los conidios.
Los pasos 3, 4, y 5 deben ser realizados dentro de la Cámara de Flujo procurando
tener una asepsia total para evitar una posible contaminación.
% peso seco = peso húmedo – peso seco x 100 Peso total Medio Trichoderma (T). Nitrato de Calcio 1.0 gr Nitrato de Potasio 0.25 gr Sulfato de Magnesio 0.25 gr Fosfato de Potasio 0.25 gr Cloruro de Calcio 0.1 gr Ácido Cítrico 0.15 gr Sacarosa 1.0 gr Agua 1 Lt Agar 25 gr/L Luego se le añade: Sulfato de Estreptomicina 30 mg Ronilan-Benlate-benomyl 2.5 mg Alcohol Alílico 0.50 ml
Mezclar en un litro de agua destilada todos los compuestos de la primera fase y
llevar ésta mezcla a un pH de 4.5, y luego se le añade el Agar.
Se coloca al medio ácido al Autoclave por 15 minutos a 121°C o 15 A° de presión.
Se coloca en baño María a 50°C y se le añade los antibióticos segunda fase a la
vez, se los va agitando, luego se los dispensa en las cajas petri.
Nota: Ronillan se lo puede reemplazar con Benlate o Benomyl.
3.6.2.4 Medio Alternativo PDA (Papa Dextrosa Agar).
El medio T puede ser reemplazado con PDA, agregándole los antibióticos
Benomil y Sulfato de estreptomicina, pudiendo obtener resultados similares en las
pruebas que se han realizado.
Se usa PDA en una cantidad de 39 gr por litro de agua destilada, la cual es
esterilizada a 121°C o 15 A° de presión, y una vez regulada la temperatura del medio
en el baño María se procede a dispensarla en las cajas stock que se necesita para el
Una vez identificado las posibles cepas del hongo que se encuentran en las cajas
hijas se procede a la purificación de las mismas y en ésta etapa se procede a realizar
la identificación morfológica de cada una de las cepas que se posea a través de las
estructuras que posee Trichoderma con lo cual se puede continuar la purificación de
esta cepa hasta obtener en cada caja petri una cepa pura del hongo.
Para el proceso de purificación se utilizará como medio solo PDA, ya que el hongo
se desarrolla muy bien en este medio teniendo en cuenta todas las medidas que
impidan la contaminación de otros microorganismos dentro de la caja, los más
comunes son contaminación por bacterias.
Luego de obtener las cepas purificadas e identificadas a través de sus estructuras
se procede a la masificación de dicha cepa en sustratos como arroz o arrocillo, en
éste caso ambos pueden ser utilizados en un solo sustrato, esto se lo hace con el fin
de que el hongo se mantenga activo mucho más tiempo, además para el proceso de
obtención de un inóculo.
El producto que se va a obtener para comienza a partir de Trichoderma en el
sustrato el cual será sometido a un proceso de molido para lograr obtener un polvo
mojable el cual se podrá utilizar para el control de diferentes enfermedades en
3.7 Personal de Laboratorio.
El laboratorio deberá de contar con el siguiente personal:
Investigador.- Es el encargado de llevar a cabo el proceso de aislamiento y propagación de Trichoderma dentro del laboratorio.
Técnico de Laboratorio.- Es el que ayuda a realizar todo el proceso y deberá de tener el conocimiento necesario para tal efecto.
Personal de Lavandería.- Personas encargadas de lavar los materiales que se utilicen dentro del proceso y mantener el stock suficiente para que no haya
retrasos dentro del trabajo de laboratorio.
Pasantes.- Personal de pre-grado que quisiera obtener experiencia en la obtención de un inóculo.
CAPÌTULO IV
EVALUACIÓN Y ANÁLISIS FINANCIERO
4.1 Inversiones, Capital de Operación y Financiamiento.
4.1.1 Inversión Inicial.
Dentro de la Inversión Inicial estimaremos todos los costos que se originan en la
implementación del proyecto y esto será la inversión en el año cero que se reflejará
Capital de Trabajo
Para determinar la inversión de capital de Trabajo hemos utilizado el método de
máximo déficit acumulado que será presentado en el Anexo No. 4.2.
Equipos
Los equipos que utilizaremos en la implementación del proyecto los detallamos a
continuación:
Tabla No. 4.1
Costos de Equipos y Muebles de Oficina Equipos y Muebles de Oficina
Descripción Cantidad Precio Unit. Precio Total Computadoras 9 600,00 5.400,00 Escritorios 10 200,00 2.000,00 Archivadores 6 270,00 1.620,00 Sillas de Escritorios 20 70,00 1.400,00 Muebles 3 100,00 300,00
Elaborado por: Los Autores
Vehículos
Contaremos con un mini furgón marca Chevrolet, el cual tendrá un costo de $
distribuidores; también se usará para la adquisición de insumos y materiales
necesarios para la elaboración de nuestro producto.
Otros
Debemos tomar en cuenta los gastos correspondientes a la pre-operación para la
puesta en marcha de la compañía, así como también los desembolsos para la
constitución de la misma, trámites y permisos legales para empezar con la actividad
de AGROS.
Tabla No. 4.2 Gastos Pre- operativos Gastos Pre-operativos Constitución de Compañía 400,00 Registro Mercantil 50,00 Ministerio 50,00 Cámara de Comercio 20,00 Varios 1.480,00 Total 2.000,00
Tabla No. 4.3 Otras Inversiones Otras Inversiones Necesarias
Gastos Pre- operativos 2.000,00 Imprevistos 1.500,00
Elaborado por: Los Autores
El Detalle de activos fijos se refleja en el Anexo No. 4.3.
4.1.2 Financiamiento
Para la financiación del proyecto de producción de bioproductos con
microorganismos se considerará la siguiente estructura de capital: 40% financiado
por medio de deuda y 60% mediante aportaciones de capital por parte de los socios.
No se procede a la emisión de acciones al público en general, sino al aporte por
parte de los dueños del negocio; debido a que nuestro país no es tan desarrollado en
el mercado de capitales.
Consideramos conveniente que los socios posean el 60% del valor de los activos,
porque un elevado nivel de endeudamiento podría resultar muy riesgoso para el
perjudicarían a los propietarios del negocio. Por lo tanto la estructura de capital de
nuestro proyecto será detallada en la Tabla No. 4.4.
Tabla No. 4.4
Estructura de Capital del Proyecto Estructura de Capital del
Proyecto Efectivo 57.852,70 Inversión Inicial 62.217,00 TOTAL: 120.069,70 Deuda 40% 48.027,88 Capital 60% 72.041,82 TOTAL: 120.069,70
Elaborado por: Los Autores
4.1.3 Determinación del Costo de Capital
El cálculo del costo del capital es de importancia, ya que representa la tasa mínima
de rendimiento que debe de obtenerse para generar valor. El modelo utilizado para
obtenerlo es el (CAPM).
Para calcular el costo del capital primeramente tenemos que determinar la
estructura de capital; el cual lo mostramos en el punto 4.1.2., con un 40% deuda y
60% capital.
Después deducimos el costo que tiene cada uno de los componentes de la
financiamiento con capital lo calculamos con las fórmulas y datos siguientes:
también ver Anexo No. 4.4.
) ( m f f e R R R K = +β − ) (% ) )(% 1 ( 0 K tc deuda K capital K = i − + e Tabla No. 4.5 Costo de Capital Costo de Capital K0 = 10,80% (1-tc)= 0,75 % Capital = 0,60 Ke= 12% % Deuda = 0,40 Rf = 8% Ki= 12% Rm= 12% Β = 1,00
Elaborado por: Los Autores
Los resultados para el Rendimiento Exigido por el Capital Propio (Ke) es igual a
12% y Tasa del Costo de Capital (Ko) es igual a 10.80%, esta tasa es con la que se
descontará el Flujo de Caja para el cálculo del Valor Actual Neto (VAN).
4.2 Presupuesto de Ingreso, Costo y Gastos.
4.2.1 Ingresos
La fuente de ingreso del proyecto será por la venta de Trichogreen, el cual será
comercializado en paquetes de un kilogramo a un costo de $ 15,00 cada uno;
La estimación de las ventas y producción de nuestros productos es a diez años con un
incremento anual del 10% considerando la inflación en los últimos años y se reflejan
en el Anexo No. 4.5 y Anexo No. 4.6.
Costos y Gastos del Proyecto.
4.2.2 Gastos de Administración
A continuación detallamos el costo del personal administrativo que contrataremos
para la implementación de nuestro proyecto: ver Tabla No. 4.6.
Tabla No. 4.6
Costos de Gastos Administrativos Gastos Administrativos No.
Empleados Personal Sueldo/persona
Sueldo Mensual Sueldo Anual 1 Director 650,00 650,00 7.800,00 1 Secretaria 250,00 250,00 3.000,00 1 Contador 400,00 400,00 4.800,00 2 Asistentes 200,00 400,00 4.800,00 2 Jefes 350,00 700,00 8.400,00 4 Vendedores 250,00 1.000,00 12.000,00 TOTAL: 3.400,00 40.800,00
Mano de Obra Directa e Indirecta
En las tablas No. 4.7 y 4.8 detallamos los costos de la mano de obra directa e
indirecta, donde nombramos el personal a necesitar para el desarrollo y elaboración
del producto.
Tabla No. 4.7
Costos de Mano de Obra Directa Costos de la Mano de Obra Directa No.
Empleados Personal Sueldo/persona
Sueldo Mensual Sueldo Anual 1 Investigador 300,00 300,00 3.600,00 1 Técnico de Laboratorio 250,00 250,00 3.000,00 TOTAL: 550,00 6.600,00
Elaborado por: Los Autores
Tabla No. 4.8
Costos de Mano de Obra Indirecta Costo de la Mano de Obra Indirecta No.
Empleados Personal Sueldo/persona Mensual Sueldo Sueldo Anual 1 Personal de Lavandería 160,00 160,00 1.920,00 1 Bodeguero 200,00 200,00 2.400,00 1 Seguridad 160,00 160,00 1.920,00 TOTAL: 520,00 6.240,00
4.2.3 Gastos Financieros
Amortizaciones
Para ver la amortización de la deuda del proyecto revisar Anexo No. 4.7.
4.2.4 Depreciaciones
Detallamos el cuadro de depreciaciones de todos los activos fijos en el Anexo No.
4.8.
Valor de Desecho
Ya que el método de depreciación utilizado en este proyecto es de porcentaje fijo
el valor de desecho fue calculado aplicando la siguiente fórmula:
Valor en Libros = Costo Inicial * (1-R)N Donde:
R: es la tasa de depreciación fija.
Aplicando la fórmula para todos los activos obtuvimos que el valor de desecho es
$ 17.292,39
4.2.5 Costo de Producción
En la Tabla No. 4.9, detallamos los costos de recolección de la tierra para obtener
las cepas de Trichoderma.
Tabla No. 4.9 Costos de Recolección
Destinos de Recolección Movilización Gtos. Viaje Naranjal, Balao, Puerto
Inca. 20 10
Península de Santa Elena. 20 10
Milagro, Naranjito 20 10
Santa Lucia , Balzar, El
Empalme 20 10
Total 80 40
Elaborado por: Los Autores
Adicionalmente detallamos en las tablas No. 4.10 y 4.11 los costos de los
Tabla No. 4.10
Costos de Materiales Indirectos Costos Materiales Indirectos
Medida Cant. Materiales Costo Unit. Costo Total
6 Enlemeyer 100 ml 14,00 84,00 4 Viker 10,00 40,00 4 Pipetas 280,00 1.120,00 Pq. 1 Agitadores 4unid. X pq. 10,00 10,00
Docena 4 Cajas Petri
25,00
100,00
Pq. 10 Puntas Amarillas 1000 uni. X pq.
10,55
105,50
Pq. 10 Puntas Azules 1000 uni. X pq.
11,20 112,00 2 Espátulas 8,00 16,00 4 Sacabocados 1,00 4,00 2 Mortero 15,00 30,00 1 Mechero 20,00 20,00 2 Tamiz 2mm de diámetro 1,00 2,00
Caja 1 Placas Porta objeto 100 uni. X caja 7,8 7,80
Caja 1 Placas Cubre objeto 100 uni. X caja
6,00 6,00 2 Perchas 10,00 20,00 2 Balde 2,00 4,00 TOTAL: 1.681,30
Tabla No. 4.11
Costos de Materiales Directos Costos de Materiales Directos
Medida Cant. Materiales Costo Unit. Costo Total
Cartón 4 Frascos 50 uni. X cartón
25,00 100,00
Quintal 60 Arrocillo
10,00 600,00
Frasco 2 Sulfato de Magnesio 500 gr.
22,64 45,28
Frasco 2 Sulfato de Estreptomicina 50 gr.
60,00 120,00 Frasco 1 Benomil 1 kg. 5,00 5,00 Garrafón 1 Alcohol 25,00 25,00
Frasco 1 Azul de Metileno 25 gr.
38,00 38,00
Garrafón 1 Alcohol Alílico para síntesis
48,23 48,23
Frasco 2 Papa Dextrosa Agar 500 gr.
61,60 123,20
Frasco 2 Calcio Cloruro 500 gr.
80,08 160,16
Frasco 2
Fosfato de Potasio Monobásico 500 gr.
13,51 27,02
Frasco 2 Nitrato de Calcio 500 gr.
36,96 73,92
Frasco 2 Acido Cítrico 500 gr.
48,16 96,32 Frasco 2 Sacarosa 500 gr. 34,72 69,44 TOTAL: 1.531,57
Elaborado por: Los Autores