Psychological approach

defectos observados.

Más tarde en el desarrollo, la vía de Wg es responsable desde el segundo estadío larvario de la especificación de territorios dentro del región presuntiva del ala (Whitworth and Russell, 2003). En este período la actividad de Wg está regulada en parte por la señal de Notch en el borde D/V. Notch es capaz de activar a wg excepto en las células del borde D/V debido a la expresión de Cut. Ambas señales actúan sinérgicamente para promover el crecimiento y la supervivencia del primordio de ala (Buceta et al., 2007; de Celis and Bray, 1997; Klein and Arias, 1998; Micchelli et al., 1997). La activación observada de la vía de Notch en los clones Lines- _{podría explicar la represión de la vía de Wg, pese a la expresión ectópicamente de Wg}

en estas células, ya que Cut es capaz de reprimir la vía de Wg a nivel de Arm (Buceta et al., 2007). Sin embargo, hemos mostrado que la sobreexpresión de ArmS10 _{no rescata los fenotipos}

causados por la falta de lines, indicando que Lines está actuando en la vía de Wg en paralelo o por debajo de a Arm.

Por otra parte, la activación de las dianas de Notch (Wg y Cut) y la represión de las dianas de Wg (Sens) ocurren simultáneamente, sugiriendo que Lines funciona independientemente como un modulador sobre cada una de ellas en las células del borde D/V. Estos experimentos también nos han permitido mostrar que los cambios de proliferación y de identidad celular observados en las células Lines- _{son posteriores a la modulación de la vía de Notch y Wg.}

Las vías de Notch y de Wg representan dos de los principales canales de comunicación intercelular usados por las células durante el desarrollo, y las actividades de ambas vías están interrelacionadas en diferentes contextos del desarrollo tales como la especificación de la banda germinal de los erizos de mar (Angerer and Angerer, 2003; McClay et al., 2000; Sherwood and McClay, 2001; Sweet et al., 2002), el desarrollo de los precursores de la piel (Estrach et al., 2006), la formación de los rombómeros (Cheng et al., 2004) y la somitogénesis en vertebrados (Aulehla and Herrmann, 2004; Aulehla et al., 2003; Pourquie, 2003).

6.-La función reguladora de la red génica Drm/Lines/Bowl

La siguiente pregunta a responder es si Lines durante el desarrollo imaginal del ala esta funcionando dentro de la vía Drm/Lines/Bowl del mismo modo que se ha descrito en el embrión (Green et al., 2002; Hatini et al., 2000; Hatini et al., 2005; Johansen et al., 2003). La red génica formada por Drm/Lines/Bowl está emergiendo como una nueva vía de regulación que actúa durante el desarrollo en la formación de patrones de diferenciación (de Celis Ibeas and Bray, 2003; Hao et al., 2003; Hatini et al., 2005). Se ha demostrado que las tres proteínas Drm/Lines/Bowl interaccionan física y funcionalmente. Por ejemplo, durante el desarrollo embrionario de la epidermis, las interacciones competitivas proteína-proteína entre Lines y Bowl o entre Drm y Lines en el núcleo, regulan el estado de acumulación de la proteína Bowl

DISCUSIÓN

93 red génica también se ha observado en otros contextos el desarrollo, como en la diferenciación epidermica, el desarrollo morfogenético del intestino, la formación de las estructuras dístales y de las articulaciones de las patas o la formación del ojo (Iwaki et al., 2001; Green et al., 2002; de Celis Ibeas and Bray, 2003; Johansen et al., 2003; Hatini et al., 2005; Bras-Pereira et al., 2006).

El ARNm de bowl se expresa en todas las células del disco de ala, sin embargo la proteína Bowl sólo se detecta en aquellas células donde Lines está localizado en el citoplasma. La eliminación de la función de lines en cualquier parte del disco imaginal, permite la acumulación de Bowl. Ambas observaciones indican que la presencia de Lines en el núcleo impide la acumulación de Bowl. En el disco imaginal de ala, Bowl es el efector principal de los cambios observados en los clones linG1_{; ya que los fenotipos de falta de función de lines}

causados por la expresión del transgen UAS-linesARNi son revertidos cuando se co-expresa la forma UAS-bowl ARNi. De la misma manera, los clones dobles mutantes para bowl y lines no dan lugar a la característica proliferación de los clones sólo mutantes para linG1_{. Todos estos}

resultados indican que la acumulación de Bowl en las células linG1 _{es la responsable de los}

fenotipos observados en las células mutantes.

El patrón de expresión de la proteína Bowl coincide con el del ARNm de drm, en todos los disco imaginales examinados. Los resultados obtenidos a partir de experimentos realizados in vivo e in vitro, muestran que la proteína Drm regula los niveles de Lines en el núcleo desplazándola hacia el citoplasma y esta relocalización de Lines permite que la proteína Bowl se acumule en el núcleo. Por eso la expresión ectópica de Drm es capaz de bloquear la regulación negativa que ejerce Lines sobre Bowl, y reproduce los fenotipos causados por la falta de lines tanto en identidad celular como en proliferación.

7.-Mecanismo de regulación de los niveles de proteína Bowl

En otros procesos en lo que lines interviene durante el desarrollo, se ha demostrado que Lines regula a Bowl post-transcripcionalmente, promoviendo directa o indirectamente la degradación de Bowl. Nuestros datos en el disco imaginal de ala indican que también sucede así; Bowl se acumula en el núcleo tras 6 horas de la inducción de la inhibición de Lines, y este tiempo no es suficiente para que la proteína Bowl se traduzca. Los ensayos in vitro corroboran estos resultados y muestran que la presencia de Lines, hace que el nivel de la proteína Bowl disminuya en las células S2. Por tanto, Lines impide la acumulación de Bowl en las células del disco imaginal mientras que Drm favorece la acumulación de Bowl, actuando sobre la relocalización subcelular de Lines.

Durante el desarrollo del disco de ala, Bowl se acumula en las células de la membrana peripodial, donde Lines se localiza en el citoplasma. De esta forma Lines especificaría las células del disco propio y Bowl regularía la determinación de la membrana peripodial. La

DISCUSIÓN