ray Photoelectron Spectroscopy

La metodología propuesta en el presente estudio mostró resultados muy diferentes a los obtenidos en otros ensayos (Fernández et al., 1992; INISAV, 2010). De otras metodologías utilizadas, esta mostró ser más viable y económica para el país ya que reduce el costo en equipamiento como autoclave y equipos de enfriamientos, además de toda la electricidad que estos consumen. En ningún caso se registraron contaminaciones con otros hongos no siendo el medio de cultivo esterilizado debido a la actividad antagonista que presenta Trichoderma, sin embargo, otras metodologías requieren del proceso de esterilización de los productos previamente (Elósegui, 2006). Igual es presentado por Mas Diego et al. (2001), quien afirma que se debe esterilizar durante15 min en una autoclave a 1 atm y 121°C. En la metodología presentada por el INISAV (2010) precisan de autoclavear las bandejas a 121ºC por 40 min.

Todos los productos utilizados como sustratos son subproductos de la agricultura. Se preparó en un medio de cultivo sólido ya que los cultivos sumergidos presentan grandes ventajas desde el punto de vista tecnológico, sin embargo, los procesos en fase sólida permiten que el hongo crezca en condiciones muy semejantes a las que el mismo encuentra en la naturaleza. De esta manera son capaces de producir conidios aéreos que son más resistentes, duraderos y con mejores rendimientos de conidios puros y homogéneos (Mas Diego, et al., 2001). Esto coincide con lo propuesto por Sandoval et al. (2011) quien plantea que en medios de cultivos líquidos, Trichoderma, produce paredes celulares más delgadas, mayor susceptibilidad a la deshidratación y radiación solar y la disolución en el medio de las proteínas (hidrofobinas).

5.1. Determinación de la humedad óptima para la imbibición del serrín de madera blanca

En la determinación de la humedad óptima se determinó que 10 mL de agua eran los idóneos para 10 g de serrín. La humedad mínima para el crecimiento

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vegetativo es del 92% y para su esporulación es de 93 al 95% (Romero et al., 2009). Estos resultados son óptimos debido a que cuando la humedad es demasiado baja las esporas germinan disminuyendo la producción total de esporas y por el contrario cuando la humedad aumenta T. viride no se desarrolla adecuadamente en las zonas inundadas, ya que un exceso de humedad provocaría baja disponibilidad de oxígeno y por ende pobre desarrollo del microorganismo. Además compactaría el sustrato impidiendo una colonización total de su superficie; por lo que la humedad debe oscilar entre ambos valores (Elósegui, 2006).

5.2. Evaluación de diferentes sustratos para la producción de T. viride

Como sustrato inerte se utilizó el serrín ya que cuando Trichoderma es utilizado para el control de hongos del suelo, pueden mezclarse con materia orgánica, al

ser T. viride un hongo celulolítico puede extraer la celulosa de restos vegetales

(Fernández, 2001). Todos los polvos de cereales ensayados resultaron igualmente apropiados para el crecimiento y desarrollo de T. viride, puesto que éste se desarrolla solo en la superficie de las partículas nutritivas y en el caso de los polvos, la sumatoria de superficie útil para el crecimiento es mayor que si se empleara los granos no divididos y gruesamente (Villalba, 2009). Por tanto, se obtuvo altas concentraciones de conidios resultando una opción favorable para la producción de este hongo en momentos de carencia de alguno de estos cereales. Sandoval (2009) utilizó como sustrato para la producción de Trichoderma el maíz, siendo también una vía favorable para obtención masiva del hongo. Se han empleado cereales como agentes nutritivos (arroz, trigo, cáscara de trigo, cáscara de arroz) y como agentes inertes de soporte la vermiculita, gránulos de minerales arcillosos, tela. Con el uso de sustratos inertes las soluciones nutritivas en los que estos se embeben pueden ser balanceados cuidadosamente para asegurar una casi completa utilización de los nutrientes y acá despliegan un papel clave también el balance C:N (Elósegui, 2006). Altos niveles de esporulación con valores de 108 y 109 conidios/g se alcanzan con sustratos como el arroz y el maíz poseen un

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balance de nutrientes adecuado para el crecimiento y esporulación de este hongo (Cuadra et al., 2005).

El arroz, sin embargo, es el que se utiliza y está disponible en el país para la producción de Trichoderma por lo cual fue elegido para continuar los experimentos. Esto coincide con INISAV (2010), donde como sustratos, se toman granos de arroz entero y cascarilla o arroz partido y cascarilla. Según Soto (2005) la cascarilla de arroz es el sustrato idóneo ya que presenta propiedades físico- químicos los cuales posibilitan la rápida colonización del hongo. Sandoval et al.

(2011) utiliza como sustrato harina de arroz y trigo obteniendo buenos resultados. Que se utilice arroz con preferencia puede estar dado porque constituye un sustrato rico en carbono, proteínas y micronutrientes (Mg, Zn y Cu) necesarios para el crecimiento de Trichoderma.

5.3. Determinación del momento óptimo para la producción de T. viride

El momento óptimo para la producción de T. viride es a los 5 días después de montados los experimentos. Estos resultados permiten mantener la producción en cualquier local sin tener que mantener una temperatura fija, esto difiere con lo estipulado por INISAV (2010) donde se deben mantener permanentemente durante todo el proceso productivo a 25-30oC. Se plantea por otras tecnologías que debe incubarse durante ocho días a 25°C para favorecer una abundante esporulación del hongo (Sandoval, 2011). La presentación sólida se incuba durante 7-15 días para llegar a formar conidios con concentración de 2-3 x109 conidios/g (Fernández, 2001) y durante todo el proceso la regulación de la temperatura ambiental es esencial la que debe ser lo más próxima posible a la temperatura óptima de desarrollo del microorganismo (Elósegui, 2006).

5.4. Determinación de la proporción óptima para la producción de T. viride

La cantidad óptima para la producción de T. viride es seis gramos de polvo de arroz cuando se emplean 10 g de serrín, esto se puede corroborar cuando se observa al microscopio la mezcla serrín-polvo, pues las partículas de éste se encuentran homogéneamente diseminadas en la superficie de las partículas de

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serrín no estando próximas una de otra, en cambio sí se utilizara una mayor concentración las partículas estarían en contacto.

En otros trabajos realizados al utilizar solo arroz como sustrato se debe adicionar 200 g por bolsas, con 137.7ml de agua (Chávez, 2006). Esto indica lo efectivo de la metodología al disminuir la cantidad de sustrato nutritivo necesario para la producción. En otras metodologías se utiliza 100 g de sustrato enriquecido a base de cabecilla de arroz con una humedad de un 45% (Mas Diego, 2001).

La reproducción de Trichoderma harzianum se puede realizar también a partir de un sustrato sólido compuesto por una mezcla en proporción 2:1 (p/p) de arroz partido con cáscara de arroz y bagacillo de caña de azúcar, al cual se le adicionó agua en proporción 1:1 (v/p) y se distribuyó en bandejas previo a su esterilización (Pérez, 2009).

5.5. Comparación de la producción de conidios T. viride obtenidos según la tecnología del CIAP y la del CREE del Yabú

Tabla 3. Comparación ente las metodologías utilizadas en los CREE y la sugerida por el trabajo

La tabla muestra la comparación entre la metodología establecida por los CREE del país (INISAV, 2010) y la propuesta por el trabajo, según los recursos y medios empleados por cada una.

CREE CIAP

Sustrato: cabecilla de arroz Sustrato: Polvo de arroz, maíz, sorgo (≤ 600 micras) y serrín de madera.

El sustrato se esteriliza en autoclaves a 121

0

C/40 minutos

No se esteriliza

El inóculo está constituido por esporas de

Trichoderma

El inóculo son las blastosporas

Las esporas se obtienen en medio PDA sólido

Las blastosporas se obtienen en medio líquido( agua, miel final y levadura torula), agitándose vigorosamente

Los recipientes del cultivo son tarrinas (importadas)

Recipiente: son bolsas de polipropeno (producción nacional)

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CREE CIAP

Las tarrinas son recicladas(lavado y secado manual)

Las bolsas no se reciclan

Cosecha manual No hay que cosechar se vende el producto terminado en la bolsa

Secado del producto final en bandejas en cuartos con aire acondicionado y equipos de secar aire

No es necesario secar el producto final

Riesgo de contaminación del trabajador con esporas

Los trabajadores no están expuestos a las esporas

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