Results

Hernández3. Susana Fiorentino3

1 _{Grupo de Investigación en Farmacología Vegetal y Terapéuticas Alternativas, Facultad de}

Medicina, Fundación Universitaria Juan N. Corpas, Av. Corpas km 3- Suba.

2 _{Grupo de Investigación GIFUJ, Departamento de Química, Facultad de Ciencias,}

Pontificia Universidad Javeriana, Carrera 7 N°43-82 Edificio 52, Bogotá, Colombia.

3 _{Grupo de Investigación Inmunobiología y Biología Celular, Facultad de Ciencias,}

Pontificia Universidad Javeriana, Carrera 7 N°43-82 Edificio 52, Bogotá, Colombia. * e-mail: [email protected]

RESUMEN

Introducción. La especie Conyza trihecatactis es una planta de tipo ruderal, encontrada en suelos arcillosos y pedregosos, es utilizada en medicina tradicional para el tratamiento de reumatismos y desordenes gastrointestinales. Es herbácea anual o perenne que alcanza 1-2 metros de altura; es una especie poco estudiada, algunos estudios fitoquímicos han identificado metabolitos de tipo diterpeno.

Objetivo. Este trabajo se desarrolló bajo un enfoque biodirigido contemplando dos aspectos fundamentales: químico y biológico. El aspecto químico involucró procesos de extracción, fraccionamiento, aislamiento y purificación de los metabolitos secundarios presentes en las partes aéreas de la especie vegetal Conyza trihecatactis, y en el aspecto biológico, a el extracto etanólico completo y a las fracciones obtenidas se les evaluó la actividad citotóxica por el método del MTT.

Metodología. El extracto etanólico (ExEtOH) fue sometido a un fraccionamiento líquido- líquido continuo con solventes de polaridad creciente, obteniéndose fracciones de diclorometano (FCH2Cl2), éter etílico (FEt2O), acetato de etilo (FAcOEt) y un residuo

hidroalcohólico (RHEtOH). La evaluación de la actividad citotóxica del extracto y las fracciones se evaluó por el método MTT ([3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difenil tetrazolium bromuro]), sobre las líneas celulares tumorales 4T1, TSA (Adenocarcinomas Mamarios Murinos), y MCF-7 (Adenocarcinoma de Seno Humano).

Resultados. Se evidenció que la fracción FCH2Cl2 presentó la mayor actividad con una IC50

de 36.23 µg/mL para 4T1, 47.81 µg/mL para TSA y 46.05 µg/mL para MCF-7, esta fracción fue probada en células normales 3T3 con una IC50 de 70.67 µg/mL. Debido a que la fracción más bioactiva fue FCH2Cl2, se le realizó un proceso de aislamiento y purificación obteniendo

e identificando mediante las técnicas de MS, RMN (experimentos 1H, 13C, HSQC, y HMBC) y HPLC-DAD-MS dos flavonoides: apigenina e hispidulina, la mezcla de flavonoides presentó la mayor actividad citotóxica frente a la línea celular MCF-7 con una IC50 de 23,58 µg/mL.

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Conclusiones. Los resultados obtenidos en los ensayos de citotoxicidad, indican que la fracción con mayor actividad citotóxica sobre las líneas celulares tumorales 4T1, TSA y MCF-7 es FCH2Cl2. Se identificaron por primera vez dos metabolitos secundarios de tipo

flavonoide mediante las técnicas MS y RMN (experimentos 1H y 13C, HSQC, HMBC) y HPLC-DAD-MS.

PALABRAS CLAVE

Actividad citotóxica, Conyza trihecatactis, flavonoides, Asteraceae, cáncer. KEY WORDS

Cytotoxic activity, Conyza trihecatactis, flavonoids, Asteraceae, cancer. AGRADECIMIENTOS

A la Fundación Universitaria Juan N. Corpas por financiar la totalidad del proyecto, al Grupo de Investigación Productos Naturales Vegetales de la Universidad Distrital Francisco José de Caldas por el análisis de las muestras por MS, a la Pontificia Universidad Javeriana por el análisis de las muestras por RMN y al Grupo de Investigación de Química Bioorgánica de la Universidad Militar Nueva Granada por el análisis de las muestras por HPLC-DAD-MS. BIBLIOGRAFÍA

1. Torrenegra R, Robles J, Waibel R, Lowel M, Achenbach H. Diterpenes and diterpene xylosides from Conyza trihecatactis. Phytochemistry. 1993; 35(1):195-199.

2. Gaiten Y. Estudio Farmacognóstico de Phyllanthus orbicularis HBK, especie endémica de Cuba. Universidad de la Habana; 2011.

CATEGORÍA Informe final.

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FORMACIÓN DE BIOPELÍCULA EN CEPAS DE Staphylococcus spp. BIOFILM FORMATION BY Staphylococcus spp. STRAINS.

Maryi L. Segura 1, Liliana C. Muñoz.1*, Jeanntte Navarrete. 1 Gladys Pinilla. 1 Betsy Castro2 * *.

1 _{Relaciones microbianas y epidemiológicas aplicadas al laboratorio clínico y molecular}

(REMA). Bacteriología y Laboratorio Clínico, Facultad de Ciencias de la salud, Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, Calle 28 No. 5B-02. Bogotá D.C 2

Laboratorio de Genética Molecular Bacteriana (LGMB), Vicerrectoría de investigaciones, Universidad El Bosque, Avenida 9 N° 131A-02 Bogotá D.C. * e-mail:

[email protected] * * e-mail: [email protected]

_________________________________________________________________________ RESUMEN

Introducción. La biopelícula se forma mediante procesos biológicos, físicos y su interacción entre la superficie y la bacteria hasta producir una matriz de adhesión intracelular (PIA). El

Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis se adhieren fácilmente a implementos

médicos formando biopelícula, logrando así que se perpetúe la infección en el huésped, dificulte el manejo médico y genere resistencia al tratamiento. Por lo anterior se hace necesario conocer la capacidad que tienen los Staphylococcus spp. de generar biopelicula. Objetivo. Determinar la capacidad de formación de biopelícula en cepas de Staphylococcus

spp.

Metodología. Se analizaron 28 cepas de Staphylococcus aureus y 22 Staphylococcus

epidermidis, provenientes de muestras clínicas, por los métodos de microplaca para cristal

violeta, suplementado con glucosa al 1% y NaCl al 2%, para su posterior lectura espectrofotométrica a 570 y 492nm, considerándose formadoras de biopelícula una lectura mayor de 0.5 de Abs. En el método de Agar Rojo Congo suplementado con sacarosa al 5%, las cepas productoras de biopelicula se tornan de color negro, las no productoras de biopelicula son de tono rosa o transparente y las intermedias de tono negro tenue.

Resultados. Se muestran que los Staphylococcus epidermidis por el método de rojo Congo; 36% fueron negativas, 50% positivas y 14% débiles formadoras de biopelícula, con el método de microplaca para cristal violeta, 55% de las cepas analizadas fueron negativas y 45 % positivas; de las 28 cepas analizadas de Staphylococcus aureus por el método de Rojo Congo; 14% fueron negativas, 72% positivas y 14% débiles formadoras de biopelicula y con cristal violeta 4% de las cepas analizadas fueron negativas y 96 % positivas.

Conclusiones. Se confirma que el método de microplaca para cristal violeta es el más adecuado y sensible para cuantificar la formación de biopelícula, además que las cepas aumentan significativamente su producción cuando son suplementadas con glucosa.

PALABRAS CLAVE

Biopelicula, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Cristal Violeta, Agar rojo Congo.

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KEY WORDS

Biofilm, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Crystal Violet, Congo Red Agar.

AGRADECIMIENTOS

Agradecemos el financiamiento dado por Colciencias según contrato RC 651 2014. BIBLIOGRAFÍA

1. Lister JL, Horswill AR. Staphylococcus aureus biofilms: recent developments in biofilm dispersal. Front Cell Infect Microbiol. 2014 Dec 23;4:178.

2. Christensen GD, Simpson WA, Younger JJ, Baddour LM, Barrett FF, Melton DM, et al. Adherence of Coagulase-Negative Staphylococci to Plastic Tissue Culture Plates: a Quantitative Model for the Adherence of Staphylococci to Medical Devices. Journal of clinical microbiology. J Clin Microbiol. 1985 Dec;22(6):996-1006.

3. Freeman DJ, Falkiner FR, Keane CT. New method for detecting slime production by coagulase negative Staphylococci. J Clin Pathol. 1989 Aug;42(8):872-4.

CATEGORÍA Informe final.

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GENOTIPIFICACIÓN DE Staphylococcus Sp. PRODUCTORES DE BIOPELÍCULA Y DISEÑO DE PÉPTIDOS ANTIMICROBIANOS GENOTYPIFICATION OF Staphylococcus Sp. BIOFILM FORMATION AND