2008 Review of the corporate responsibility performance of large

REACTIVOS EQUIPOS

Algodón St. Aureus alcohol Mechero

Lápiz graso E. coli Refrigeradora

Fósforos Agar Nutritivo Incubadora

Gradilla Caldo Nutritivo Tubos

Asas de inoculación

Guantes Mascarillas

Elaborado: QF. Mariana Rendón M. MSc. PROCEDIMIENTO 1:

Control de la Esterilidad en el trabajo microbiológico:

 Desinfectar con un algodón impregnado con etanol 70% limpiar el lugar de trabajo, manos y utensilios no esterilizados por autoclave. Procurar tener mucho cuidado con el mechero ya que el etanol es inflamable. Trabajar con utensilios del laboratorio cerca del mechero.

 Colocar frente al mechero la muestra y todo el material que se vaya a necesitar para realizar la siembra.

 Dependiendo del tipo de siembra se utiliza el asa adecuada. Para sembrar en caldos utilizar el asa redonda, para realizar una siembra en superficie (slant) y TECNICA ASEPTICA

a) Importancia de las condiciones de asepsia

1. Marcar las cajas de la siguiente manera: Caja 1: Puntas de los dedos sin guantes Caja 2: Puntas de los dedos con guantes Caja 2: Hablar frente a la placa.

Caja 3: Abiertas. Caja 4: Caja control.

2. Para la caja 1, toca suavemente la superficie del agar con las puntas de los dedos sin guantes.

3. Caja 2, toca suavemente la superficie del agar con las puntas de los dedos con guantes

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tres veces el trabalenguas de “tres tristes tigres tragaban trigo en un trigal en tres tristes platos. En tres tristes platos, en un trigal, tragaban trigos tres tristes tigres”. Tapa de nuevo las cajas.

5. La caja 3 se dejará destapada durante toda la sesión de laboratorio. 6. La caja 4 se conservará sin abrir.

7. Una vez que las placas han sido expuestas, deben colocarse en la incubadora en posición invertida por 24 horas y a 37 °C.

8. L a siguiente sesión examina las placas y registra los resultados en la tabla 9. Regresa las cajas a la profesora para que se desechen adecuadamente.

La toma del inóculo, es decir de la muestra que hay que examinar, ya sea esta sólido o líquido, es muy sencilla, pero, se debe realizar con cuidado, para que se lleve a cabo un trabajo exitoso.

En la toma de inóculo se debe tomar en cuenta que se corre el riesgo de contaminación por microorganismos, como ejemplo, es por esa razón que se debe trabajar en frente de un mechero.

La toma del inóculo es muy importante para el trabajo de laboratorio, en especial debemos tener en cuenta que debemos trabajar con precaución

b) Transferencia tubo a tubo

Cada alumno sembrará 4 tubos practicando los diferentes tipos de transferencia (Fig. 1).  Caldo-Caldo

 Caldo-Agar inclinado  Agar inclinado-Caldo

 Agar inclinado-Agar inclinado

Siempre mantener los tubos con caldo en una gradilla. Nunca acostados en la mesa de trabajo, ni en la bata.

Al acabar la práctica, coloca la gradilla con los tubos en la incubadora a 37 °C por 24 horas

42 Manejo de inoculo en caja de Petri

Para traspasar un cultivo sólido proveniente de una placa para realizar un frotis o aislar un microorganismo, se toma un pequeño inóculo con una asa metálica y se siembra sobre el agar de una nueva placa, haciendo un movimiento de zigzag con el

asa cargada sobre el agar, diluyendo el inóculo tres veces (ver fig. 1). También es posible traspasar cultivos sólidos a medios líquidos, sacando una muestra de una colonia con un asa e introduciéndola en el medio líquido, y agitando el asa en el frasco. Del mismo modo se pueden traspasar cultivos líquidos a cultivos líquidos con micro pipeta o con una pipeta Pasteur.

PROCEDIMIENTO

1. Colocar frente al mechero la muestra del microorganismos y el resto de material a trabajar

2. Tome el asa de la siembra y flamee el filamento hasta que este alcance un rojo incandescente y luego enfríelo con proximidad de la llama

3. Tome con la otra mano el recipiente que contiene los microorganismos. Si la muestra está en un tubo, quite el tapón con los dedos meñique y anular con la mano que sostiene el asa y flamee la boca del tubo, si esta muestra está en caja petri, coloque la caja invertida sobre la mesa de trabajo y levante la parte

4. Que contiene el medio de cultivo con los microorganismos. Llévela a la proximidad de la llama del mechero

5. Trabajando en todo momento en la proximidad de la llama, introduzca el asa de siembra y tome una pequeña cantidad del cultivo. Si el medio es líquido, agite ligeramente el tubo y tome una muestra que quedará adherida, por tensión superficial, en el extremo del filamento del asa de la siembra. Si los microorganismos se multiplican en medio sólido, tome una pequeña porción de aquellos mediante un ligero roce con el asa de siembra. Si la muestra se encuentra en la profundidad del agar, hunda el filamento dentro del medio hasta tomar una pequeña porción de la misma

6. Transfiera el inóculo a otro medio de cultivo estéril, tomando las mismas precauciones en su manejo (flameando bocas de tubos, trabajando en la proximidad de la llama, etc.) o bien proceda a preparar un frotis para tinción

 si la transferencia se va a realizar a un caldo estéril, descargue el inóculo mediante la agitación del asa de siembra en aquel.

 Si la transferencia se va a realizar a un slant, introduzca el asa con el inóculo y siempre en zigzag sobre la superficie slant.

 Si la transferencia se va a realizar sobre un medio estéril en una caja petri, deposite el inóculo en un área pequeña de la superficie de la placa, próxima del borde. Extienda el inóculo formando estrías muy juntas sobre la superficie de la porción muy pequeña de la placa. Tomando esta vez como inóculo el obtenido mediante el rozamiento del asa de siembra  con las estrías sembradas por primera vez, realice la segunda tanda de

estrías sobre una porción virgen de la placa. Repita este proceso tres o cuatro veces.

Una vez realizada la transferencia:

 en el caso de los tubos, flamee la boca de éstos antes de colocar el tapón. Marque los tubos con la identificación del cultivo, la fecha y el nombre.

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Incube a temperatura adecuada durante el tiempo necesario para que se desarrolle los microorganismos

 si se realizó sobre un medio contenido en una placa de petri, tape la placa. Esta se incubará en posición invertida para evitar que el agua de condensación se deposite sobre la superficie del agar, lo cual impedirá la obtención de colonias aisladas. Marque en la base de la placa la identificación del cultivo, la fecha y el nombre.

7. Antes de dejar el asa de siembra sobre la mesa, flaméela de nuevo con el objeto de esterilizarla.

RESULTADOS

Realiza la descripción morfológica de las colonias (si es que hay) obtenidas en las cajas con los distintos tratamientos en relación a la caja control.

RESULTADOS

Procedimiento Características observadas

Punta de los dedos Con guantes

Hablar frente a la placa

Caja abierta durante la practica Caja control

Descripción de las características del cultivo en caja de Petri con diferentes tratamientos

Elaborada: QF. Mariana Rendón M. MSc. Nota: Reportar el crecimiento

1. En forma cualitativa: (-) no hay crecimiento, (+) poco crecimiento. (++) crecimiento regular y (+++) crecimiento abundante.

2. Consistencia y color de la cepa cultivada( si hubiera crecimiento)

Registra la morfología macroscópica del microorganismo sembrado en los tubos con agar inclinado y en los caldos de acuerdo a la guía de observación.