Specific Behavioral Management Techniques

La figura 22 muestra un mapa del inserto Bt11, señalando la ubicación de la sonda específica al gen cry1Ab y los sitios de restricción para NdeI, SphI, NdeI, ShpI, BslII y EcoRI. La tabla 28 muestra los tamaños esperados y observados de las bandas de hibridación, y la figura 23 muestra los resultados de los análisis Southern blot correspondientes.

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Figura 22. Ubicación de los sitios de restricción NdeI, ShpI, BslII + EcoRI y la ubicación de la sonda específica al gen cry1Ab de 1848 pb en el inserto Bt11. Las flechas verticales indican el sitio de digestión

(restricción). Se indica el tamaño esperado de los fragmentos de restricción.

En los análisis Southern blot con ADN genómico digerido con la enzima de restricción NdeI e hibridados con la sonda específica al gen cry1Ab, se observó una banda hibridada de aproximadamente 4.6 kb en los carriles con ADN extraído de maíz Bt11 y maíz Bt11xMIR162xMIR604xGA21 (Figura 23A, carriles 3 y 7).

En los análisis Southern blot con ADN genómico digerido con la enzima de restricción ShpI e hibridada con la sonda específica al gen cry1Ab, se observó una banda hibridada de aproximadamente 20 kb en los carriles que contenían ADN extraído del maíz Bt11 y del maíz Bt11xMIR162xMIR604xGA21 (Figura 23B, carriles 9 y 13).

En los análisis Southern blot con ADN genómico digerido con las enzimas de restricción BglII y EcoRI, e hibridados con la sonda específica al gen cry1Ab, sólo se observó una banda de hibridación de aproximadamente 4.4 kb en los carriles con ADN extraído del maíz BT11 y del maíz Bt11xMIR162xMIR604xGA21 (Figura 23C, carriles 15 y 19).

En todos los análisis Southern blot, los patrones de hibridación fueron idénticos entre el maíz Bt11 y el evento apilado Bt11 x MIR162 x MIR604 x GA21. El evento de maíz MIR162 (Carriles 4, 10 y 16), MIR604 (Carriles 5, 11 y 17) y GA21 (Carriles 6, 12 y 18) y el maíz no transgénico (Carriles 8, 14 y 20) no mostraron señales de hibridación. La digestión con la enzima BglII + EcoRI produjo una banda de 4.7 kb como era esperado (maíz Bt11 + control sin modificación genética), como era esperado.

La detección de una sola banda hibridada del tamaño esperado demostró que el maíz Bt11xMIR162xMIR604xGA21 contiene una sola copia por genoma del gen cry1Ab del evento de maíz Bt11, como era esperado.

Los patrones de hibridación del maíz Bt11 y Bt11xMIR162xMIR604xxGA21 fueron similares con todas las enzimas de restricción para la digestión. Lo anterior demostró que la integridad del casete del gen cry1Ab del maíz Bt11 se conservó durante el entrecruzamiento convencional que dio origen al maíz Bt11xMIR162xMIR604xGA21.

Tabla 28. Tamaño esperado de las bandas hibridadas en los análisis Southern blot del maíz Bt11xMIR162xMIR604xGA21 utilizando una sonda específica al gen cry1Ab y las enzimas de restricción

NdeI, SphI y BglII + EcoRI. Carril Fuente de ADN Enzima(s) de

restricción Número esperad o de bandas Tamaño esperado de la banda (kb) Tamaño de la banda observada (kb) Figura 23A,

carril 3 Maíz Bt11 NdeI 1 >4,4 4.6

Figura 23A,

carril 4 Maíz MIR162 NdeI 0 - Ninguna

Figura 23A,

carril 5 Maíz MIR604 NdeI 0 - Ninguna

Figura 23A,

carril 6 Maíz GA21 NdeI 0 - Ninguna

Figura 23A,

carril 7 Bt11xMIR162xMIR604xGA21 NdeI 1 >4,4 4.6

Figura 23A,

carril 8 Maíz sin modificación genética NdeI 0 - Ninguna

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Carril Fuente de ADN Enzima(s) de restricción Número esperad o de bandas Tamaño esperado de la banda (kb) Tamaño de la banda observada (kb) carril 10 Figura 23B,

carril 11 Maíz MIR604 SphI 0 - Ninguna

Figura 23B,

carril 12 Maíz GA21 SphI 0 - Ninguna

Figura 23B,

carril 13 Bt11xMIR162xMIR604xGA21 SphI 1 >4.5 ~20

Figura 23B,

carril 14 Maíz sin modificación genética SphI 0 - Ninguna Figura 23C,

carril 15 Maíz Bt11 BglII + EcoRI 1 >4.5 4.7

Figura 23C,

carril 16 Maíz MIR162 BglII + EcoRI 0 - Ninguna

Figura 23C,

carril 17 Maíz MIR604 BglII + EcoRI 0 - Ninguna

Figura 23C,

carril 18 Maíz GA21 BglII + EcoRI 0 - Ninguna

Figura 23C,

carril 19 Bt11xMIR162xMIR604xGA21 BglII + EcoRI 1 4.7 4.7 Figura 23C,

carril 20 Maíz sin modificación genética BglII + EcoRI 0 - Ninguna Figura 23C,

Carril 1 = marcador de peso molecular Carril 2 = en blanco

Carril 3 = Maíz Bt11 digerido con la enzima NdeI Carril 4 = Maíz MIR162 digerido con la enzima NdeI Carril 5 = Maíz MIR604 digerido con la enzima NdeI Carril 6 = GA21 digerido con la enzima NdeI

Carril 7 = Bt11xMIR162xMIR604xGA21 digerido con la enzima NdeI Carril 8 = Maíz sin modificaciones genéticas digerido con la enzima NdeI Carril 9 = Maíz Bt11 digerido con la enzima SphI

Carril 10 = Maíz MIR162 digerido con la enzima SphI Carril 11 = Maíz MIR604 digerido con la enzima SphI Carril 12 = GA21 digerido con la enzima SphI

Carril 13 = Bt11xMIR162xMIR604xGA21 digerido con la enzima SphI Carril 14 = Maíz sin modificaciones genéticas digerido con la enzima SphI Carril 15 = Maíz Bt11 digerido con la enzima BglII + EcoRI

Carril 16 = Maíz MIR162 digerido con la enzima BglII + EcoRI Carril 17 = Maíz MIR604 digerido con la enzima BglII + EcoRI Carril 18 = GA21 digerido con la enzima BglII + EcoRI

Carril 19 = Bt11xMIR162xMIR604xGA21 digerido con la enzima BglII + EcoRI Carril 20 = Maíz sin modificaciones genéticas digerido con la enzima BglII + EcoRI

Carril 21 = Maíz sin modificaciones genéticas digerido con BglII + EcoRI + 10.2 pg BglII + EcoRI

Figura 23. Análisis Southern blot del maíz Bt11xMIR162xMIR604xGA21 con la sonda específica al gen cry1Ab de 1848 pb, utilizando las enzimas de restricción NdeI, SphI y BglII + EcoRI.

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