Statistical Analysis: Scale development

Según literatura para garantizar la efectividad de un probiótico se considera necesario que diariamente entre 109 _{y 10}10 _{organismos viables alcancen el intestino delgado. Por} esta razón se sugiere que los probióticos mantengan valores de viables entre 106– 107UFC/mL o g.

1.3.11.1 Tolerancia a la acidez

A pesar de las diferencias existentes entre cepas y especies, los m.o generalmente muestran una gran sensibilidad a valores de pH por debajo de 3, por lo tanto, la tolerancia a la acidez es considerada como una de las principales propiedades utilizadas para seleccionar bacterias potencialmente probióticas. Antes de llegar al tracto intestinal, los probióticos primero deben sobrevivir al pH estomacal, donde la secreción de ácido gástrico constituye el primer mecanismo de defensa contra los m.o ingeridos. Por ejemplo la tolerancia a la acidez de Lactobacillus es atribuida por la presencia de un gradiente constante entre el pH extracelular y el pH citoplasmático. (LEÓN, M. 2012)

Además microorganismos como Saccharomyces cereviseae en condiciones aeróbicas pueden utilizar ácidos orgánicos de cadena corta (acético y láctico) como fuente de carbono mediante el uso de vías anabólicas, enzimas y mecanismo de transporte específicos. Estos ácidos una vez que hayan ingresado al interior de la célula producen acidificación del citoplasma. Por lo general las células eucariotas mantienen el pH intracelular a pesar de las variaciones del pH extracelular. Para mantener los valores adecuados dentro del rango óptimo del metabolismo las bacterias expulsan protones a expensas de ATP, lo cual disminuye el consumo de glucosa generándose un aumento del pH intracelular, permitiendo a la levadura resistir pH de rango amplio desde 2.4 a 8.6. (ORTIZ A Y REUTO, J. 2007)

En condiciones de acidez los m.o Gram positivos utilizan un mecanismo de defensa conocido como F1-F0 ATPasa, que es una subunidad enzimática múltiple, conteniendo una porción catalítica (F1), incorporando subunidades para la hidrólisis de ATP y una porción integral de membrana (F0) que incluye subunidades que funcionan como canales de membrana para la translocación de protones. El complejo F1F0 realiza dos reacciones acopladas: el F0 transporta iones (protones o sodio) a través de una membrana y el segmento F1 une el ADP y el fosfato para formar el ATP. La energía de este proceso proviene de la formación de un gradiente electroquímico compuesto de iones con carga (H+) proporcionado por la cadena de transporte de electrones que bombea los H+ hacia el compartimiento contrario al que se encuentra el complejo F1 que sintetiza el ATP. Este proceso se conoce como transducción de energía. (LEÓN, M. 2012)

1.3.11.2 Tolerancia a las sales biliares

La bilis es una sustancia líquida verdosa de sabor amargo, producida por el hígado. La bilis está compuesta por agua, colesterol, lecitina (fosfolípido), pigmentos biliares (bilirrubina y biliverdina), sales biliares (glicocolato de sodio y taurocolato de sodio) e iones bicarbonato. (ORTIZ A Y REUTO, J. 2007)

Mecanismo de acción y acciones farmacológicas

Mecanismo de acción: es estimulante de la secreción biliar, aumenta y promueve la expulsión de la bilis. Favorece la digestión de las grasas, las mismas que pasan a la sangre en forma saponificada. El hígado reabsorbe y reexcreta las sales biliares para formar un ciclo necesario en la absorción de las grasas. La bilis posee funciones digestivas y excretoras.

a. Digestiva: Las sales biliares junto con los fosfolípidos son moléculas anfipáticas que facilitan la emulsión de los ácidos grasos de cadena larga y la ausencia de sales biliares impide la absorción de las grasas originando heces blanquecinas y con esteatorrea.

b. Excretora: A través de la bilis se eliminan muchos compuestos resultantes del catabolismo de los xenobióticos.

Aunque la principal función de las sales biliares es actuar como coleréticas, cuando existen deficiencias biliares actúan como terapia sustitutiva, supliendo dicha deficiencia y al mismo tiempo estimulan la producción del flujo biliar. Otra función de la bilis es neutralizar el quimio ácido que proviene del estómago, aunque en este sentido su acción es inferior a la del jugo pancreático. (LEÓN, M. 2012)

Las sales biliares son ácidos biliares conjugados con sodio o potasio, sintetizadas en el hígado a partir del colesterol, las mismas que son almacenadas como aminoácidos conjugados en la vesícula biliar. Las sales biliares son muy tóxicas, por lo que su síntesis y catabolismo deben ser regulados de manera estricta. En condiciones fisiológicas el 70% de los ácidos biliares en el ser humano están compuestos por ácido cólico, 30% por ácido quenodesoxicólico y otros ácidos biliares secundarios que producen las bacterias al pasar por el intestino.(LEÓN, M. 2012)

La concentración de las sales biliares en el intestino delgado está entre 0.2% - 2.0% (w/v), dependiendo del tipo y cantidad de alimento ingerido. La formación de bilis se considera un proceso vital, ya que durante la digestión, la bilis es secretada en el intestino, jugando un papel muy importante en la emulsificación y absorción de grasas;

como también en la transformación de productos más solubles para su fácil asimilación. Además la bilis presenta una fuerte actividad antimicrobiana induciendo disgregación de la membrana lipídica, como resultado se produce estrés oxidativo en el ADN; razón por la cual la tolerancia a las sales biliares en concentración fisiológica es crucial para la colonización del intestino por las bacterias probióticas. (LEÓN, M. 2012)

Se conoce muy poco sobre el mecanismo de respuesta y de tolerancia a la bilis por las bacterias ácido lácticas; creyendo que varias proteínas de membrana están involucradas en el mecanismo de resistencia. La tolerancia a la bilis es considerada una característica muy importante en probióticos, que les permite sobrevivir, crecer y realizar sus actividades en el intestino delgado. (LEÓN, M. 2012)

Microorganismos como el Lactobacillus spp, posee enzimas hidrolasa (BSH), que producen la deconjugación de las sales biliares, hidrolizan el enlace amina liberando glicina y taurina de la base esteroide, mecanismo por el cual pueden resistir concentraciones de sales biliares en pruebas in vitro y el paso por el tracto gastrointestinal (TGI). (LEÓN, M. 2012)

CAPÍTULO II