Study population

La s HDL p la smá tic a s so n lip o p ro te ína s he te ro g é ne a s e n ta ma ño , d e nsid a d y c o mp o sic ió n lip íd ic a y p ro te ic a (Skinne r, 1994). La a p o AI, e l p rinc ip a l c o mp o ne nte p ro te ic o d e la s HDL, jue g a un ro l imp o rta nte e n e l tra nsp o rte d e líp id o s y a lg uno s inve stig a d o re s p o stula n q ue e sta mo lé c ula e s re sp o nsa b le d e lo s e fe c to s ne utra liza nte s d e l LPS p o r p a rte d e la s HDL (Ma ssa miri, 1997), (Fle g e l, 1993), (Ema nc ip a to r, 1992).

Si b ie n e l me c a nismo p o r e l c ua l e l LPS inte ra c túa c o n la s HDL no e stá d e l to d o e nte nd id o , se p ro p o ne n ro le s p a ra lo s fo sfo líp id o s (Le vine , 1993), (Pa rke r, 1995), p a ra la a p o AI (Ma ssa miri, 1997) y p a ra la LBP (Pa rk, 1996).

Una d e la s c a ra c te rístic a s func io na le s d e la a p o AI e s su c a p a c id a d d e so lub iliza r lip o so ma s multila me la re s d e d imiristo ilfo sfa tid ilc o lina (MLV-DMPC ) a la te mp e ra tura d e tra nsic ió n d e l fo sfo líp id o , p ro c e so d e no mina d o mic e liza c ió n. La a c c ió n surfa c ta nte d e la a p o AI so b re la s MLV-DMPC p a ra p ro d uc ir p a rtíc ula s mic e la re s d e l ta ma ño g e ne ra l d e la s lip o p ro te ína s d e a lta d e nsid a d (HDL), e stá b ie n d o c ume nta d a (Jo na s, 1980). Este tip o d e inte ra c c io ne s p ue d e se r d e g ra n imp o rta nc ia e n la b io g é ne sis d e p re c urso re s d e HDL e n c é lula s d e l híg a d o o inte stino (G re e n, 1978), (Ha milto n, 1972), (Ta ll, 1979). El tip o d e inte ra c c ió n e ntre la a p o AI y la s b ic a p a s d e fo sfo líp id o s, a sí c o mo la na tura le za y ta ma ño d e lo s c o mp le jo s DMPC :a p o AI fo rma d o s d e p e nd e n d e la p ro p o rc ió n líp id o :a p o AI e n la me zc la d e re a c c ió n (Jo na s, 1980), la c o mp o sic ió n q uímic a d e la b ic a p a , e n p a rtic ula r su c o nte nid o d e c o le ste ro l (Jo na s, 1978), (Po wna ll, 1979), (Ta ll, 1978), d e l e sta d o físic o d e la b ic a p a (Po wna ll, 1979), (Jo na s, 1977) y d e la c iné tic a

C a p ítulo III: Efe c to d e l LPS so b re la func io na lid a d d e la a p o AI.

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Po wna ll e t a l. (Po wna ll, 1978); (Po wna ll, 1979) d e mo stra ro n q ue la

inte ra c c ió n d e la a p o AI c o n lip o so ma s d e DMPC , c o n o sin c o le ste ro l, e stá d e te rmina d a c iné tic a me nte ; la ta sa má xima d e fo rma c ió n d e c o mp le jo s mic e la re s o c urre a la te mp e ra tura d e tra nsic ió n d e l fo sfo líp id o y d isminuye ma rc a d a me nte ta nto si la te mp e ra tura e stá p o r e nc ima o p o r d e b a jo d e la misma . Dic ha inte ra c c ió n e ntre la a p o AI y la s b ic a p a s fo sfo lip íd ic a s invo luc ra d o s p ro c e so s p rinc ip a le s: la unió n d e la a p o AI a la b ic a p a y la rup tura d e la misma e n c o mp le jo s má s p e q ue ño s.

La unió n d e la a p o AI a la s ve síc ula s d e DMPC o c urre e n p o c o s minuto s y lo s c o mp le jo s a p o AI-DMPC fo rma d o s so n e sta b le s. La rup tura d e la s ve síc ula s p a ra d a r lug a r a lo s c o mp le jo s mic e la re s e s e l p a so limita nte d e la ve lo c id a d d e l p ro c e so (Jo na s, 1980).

Estud io s p re vio s (Po wna ll, 1978), (Swa ne y, 1980), (Jo na s, 1981) ha n d e mo stra d o q ue e l e sta d o físic o d e la b ic a p a lip íd ic a e s un fa c to r limita nte q ue c o ntro la la a so c ia c ió n d e la a p o AI c o n b ic a p a s d e fo sfa tid ilc o lina (PC ) (fo sfo líp id o zwite rió nic o ). La ta sa d e a so c ia c ió n d e la a p o AI c o n MLV d e PC sinté tic a e s rá p id a só lo e n un ra ng o e stre c ho d e te mp e ra tura s, p ró ximo a la te mp e ra tura d e tra nsic ió n d e fa se s g e l- líq uid o c rista lino . Ha sid o d e sc rip to q ue la p re se nc ia d e d e fe c to s e n la s me mb ra na s q ue se e nc ue ntra n e n la zo na d e c o e xiste nc ia d e fa se g e l y líq uid o -c rista lina a la te mp e ra tura d e tra nsic ió n, e s una c o nd ic ió n ne c e sa ria p a ra la inse rc ió n e fe c tiva d e la a p o AI d e ntro d e b ic a p a s y p a ra la sub se c ue nte fo rma c ió n d e p a rtíc ula s lip o p ro te ic a s. En b ic a p a s fo rma d a s p o r DMPC y d ie ste a ro ilfo sfa tid ilc o lina (DSPC ) la a p o AI re mue ve líp id o s p re fe re nte me nte d e la fa se líq uid o -c rista lina . Ig ua lme nte p a ra inte ra c tua r c o n é sto s d o minio s p ro b a b le me nte e s re q ue rid o un g ra n á re a d e d e fe c to s p ro d uc id o s p o r la c o e xiste nc ia d e d o minio s (Tric e rri, 2005).

El me c a nismo d e inte ra c c ió n d e la a p o AI c o n fo sfo líp id o s á c id o s e s ma rc a d a me nte d ife re nte . En c o ntra ste c o n PC , la a so c ia c ió n d e a p o

C a p ítulo III: Efe c to d e l LPS so b re la func io na lid a d d e la a p o AI.

AI c o n lo s fo sfo líp id o s á c id o s o c urre no só lo c e rc a d e la te mp e ra tura d e tra nsic ió n sino ta mb ié n e n e l e sta d o líq uid o -c rista lino (Sure wic z, 1986).

La inc o rp o ra c ió n d e c o le ste ro l e n lo s c o mp le jo s mic e la re s d e a p o AI-PC ta mb ié n ha sid o d e sc rip ta . Po r e nc ima d e l 20-30% e n mo le s d e c o nte nid o d e c o le ste ro l, la re a c c ió n d isminuye ma rc a d a me nte , a ún c o n DMPC (Jo na s, 1978), (Jo na s, 1978), (Po wna ll, 1979).

El o b je tivo d e e ste c a p ítulo d e te sis e s e stud ia r la inte ra c c ió n d e l LPS c o n la a p o AI, utiliza nd o e l p ro c e so d e mic e liza c ió n c o mo p a rá me tro d e la func io na lid a d d e la p ro te ína .

C a p ítulo III: Efe c to d e l LPS so b re la func io na lid a d d e la a p o AI.

59 III.2- Ma te ria le s y Mé to do s

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III.2.1- Ma te ria le s.

Dimiristo il-fo sfa tid ilc o lina (DMPC ) (Ava nti Po la r Lip id s), Me ro c ia nina 540 (MC 540) (Mo le c ula r Pro b e s), LPS Esc he ric hia c o li 0111:B4 (Sig ma

C he mic a l, C o ), C lo ruro d e G ua nid ina (Sig ma C he mic a l, C o ).

III.2.2- So lub iliza c ió n de lipo so m a s m ultila m e la re s de DMPC (MLV-