Con los tres métodos analíticos validados se procedió a analizar los comprimidos de la única marca comercial disponible, en sus dos formulaciones disponibles. Se realizaron los ensayos de control de dosis y disolución y se construyeron los correspondientes perfiles de disolución.
III.3.5.1. Control de dosis de productos farmacéuticos
El uso de los tres métodos propuestos permitió obtener resultados del tenor de los principios activos dentro de los límites habitualmente consignados oficialmente como aceptables (90 – 110% de lo rotulado). Los resultados fueron comparados con los obtenidos mediante la aplicación del método CLAE, oficial de la USP 30 para cada uno de los principios activos, variando ligeramente las condiciones cromatográficas para disminuir el tiempo del ensayo.60 La metodología propuesta también se comparó con un método de la literatura basado en espectroscopia de derivadas.170
Los resultados de recuperación por los métodos DRE, USP 30 y UV-PLS para los dos principios activos pueden observarse en la Tabla III.3.4.
Tabla III.3.4. Determinación simultánea de HCT y PRO en muestras sintéticas y comprimidos comerciales (control de dosis) mediante los métodos UV-PLS, UV-PCR, DRE, USP 30 y una metodología de la literatura.
Muestras Analito Método de la
literatura170
UV-PLS/
UV-PCR DRE USP 30
HCT 102,8 ± 2,3 100,1 ± 0,7 100,1 ± 1,4 Mezcla Sintética PRO 94,5 ± 1,8 99,3 ± 0,8 100,3 ± 1,0
HCT 96,5 ± 1,3 94,7 ± 1,5 94,2 ± 0,9 95,8 ± 1,6 tcalculadoa 0,83 1,30 2,13 PRO 90,9 ± 1,7 95,0 ± 0,7 94,0 ± 0,8 94,3 ± 1,8 Control de dosis 25mg HCT/40mg PRO tcalculadoa 3,36 0,88 0,37 HCT 99,8 ± 1,3 98,5 ± 0,7 97,4 ± 0,9 Control de dosis 25mg HCT/80mg PRO PRO 96,1 ± 0,6 101,3 ± 0,4 100,4 ± 0,4 at crit(0,005, 10)= 3,17.
Con la aplicación de la prueba t se concluyó que no existe diferencia significativa en el porcentaje de recuperación por los métodos UV-PLS, UV-PCR, DRE y CLAE (USP 30)60 para la valoración de los comprimidos, evidenciándose una notable diferencia con el método de derivadas de la literatura.170
III.3.5.2. Ensayo de disolución de productos farmacéuticos conteniendo HCT y PRO
Teniendo en cuenta que se trata de una asociación farmacológica oficial de la USP 30,60 el ensayo de disolución se llevó a cabo en las condiciones prescriptas por dicha farmacopea (Aparato I de la USP, 100 rpm, a 37,0 ± 0,1ºC, con 900 mL de HCl 0,01 M) y las determinaciones analíticas correspondientes fueron realizadas por los diversos métodos, que
incluyeron DRE, UV-PLS, UV-PCR, el método espectrofotométrico de la USP 30,60
consistente en una extracción selectiva con hexano como solvente y un método espectrofotométrico de derivadas de la literatura.170
Los resultados obtenidos se detallan en la Tabla III.3.5, donde se muestra que los métodos propuestos produjeron resultados estadísticamente equivalentes a los provistos por la metodología oficial (p < 0,05), con las ventajas adicionales de consumir menos tiempo y emplear menos solventes contaminantes.
Tabla III.3.5. Ensayo de disolución de comprimidos comerciales de HCT y PRO. Determinación simultánea de los analitos mediante los métodos UV-PLS, UV-PCR, DRE, USP 30 y una metodología de la literatura.
Muestras Analito Método de la literatura170
UV-PLS/
UV-PCR DRE USP 30a
HCT a 96,0 ± 1,4 92,7 ± 1,3 94,7 ± 1,8 94,5 ± 1,5 tcalculado 1,79 2,22 0,20 PRO a 91,4 ± 2,0 95,3 ± 1,4 96,9 ± 1,9 97,6± 2,5 Ensayo de disolución 25mg HCT/40mg PRO tcalculado 4.74 1,96 0.54 HCT a 97,6 ± 4,3 98,2 ± 2,5 98,8± 3,0 98,8 ± 2,6 tcalculado 0,58 0,40 0,00 PRO a 93,3 ± 3,4 101,2 ± 3,7 101,2 ± 3,8 102,9 ± 3,4 Ensayo de Disolución 25mg HCT/80mg PRO tcalculado 4,89 0,83 0,82
a Los resultados se expresan en relación a lo declarado en el rótulo en recuperación (%) , para seis muestras;
III.3.5.3. Preparación de perfiles de disolución
Los perfiles de disolución fueron obtenidos a partir de seis comprimidos sometidos a analisis en un equipo de disolución de acuerdo con las condiciones de la USP 30.60 Los gráficos correspondientes a los perfiles resultantes de aplicar los métodos DRE y UV-PLS se muestran en la Figura III.3.6, donde puede observarse la congruencia de los resultados proporcionados por ambos.
Figura III.3.6. Arriba: Perfiles de disolución de comprimidos conteniendo 25 mg HCT y 40 mg PRO, determinados por los métodos UV-PLS (a) y DRE (b). Abajo: Perfiles de disolución de comprimidos conteniendo 25 mg HCT y 80 mg PRO, determinados por los métodos UV- PLS (c) y DRE (d).
III.3.6. Conclusiones
Se desarrollaron tres métodos analíticos (UV-PLS, UV-PCR y DRE) útiles para la determinación simultánea de HCT y PRO en muestras tanto sintéticas como reales correspondientes a formulaciones comerciales conteniendo 25 mg HCT y dos cantidades
diferentes de PRO (40 u 80 mg).
Los métodos propuestos fueron validados, demostrando ser lineales en el intervalo de trabajo, como así también exactos, precisos y reproducibles. La utilidad de los mismos se demostró cuando éstos se aplicaron a los ensayos de control de dosis y disolución; además los mismos fueron exitosamente utilizados para la construcción de perfiles de disolución de los comprimidos de esta asociación farmacológica.
UV-PLS y UV-PCR proporcionaron resultados muy similares tanto durante la validación como frente a muestras reales en ensayos de control de calidad de los productos formulados.
La aplicación de las metodologías DRE, UV-PLS y UV-PCR permitió obtener resultados estadísticamente comparables con los logrados mediante el uso de los
procedimientos oficiales de la USP 30,60 demostrándose que uno de los métodos
espectrofotométricos de derivadas previamente reportado no reuniría los requisitos de similitud estadística tanto con la metodología oficial como con los métodos propuestos.
Frente a la necesidad de optar por una metodología analítica, de los tres nuevos métodos propuestos DRE sería el más favorecido, por ser matemáticamente más sencillo y necesitar menor cantidad de soluciones de calibración.
Por otra parte cabe destacar que en todos los casos los métodos propuestos resultaron ser más rápidos y ambientalmente más amigables que las separaciones cromatográficas o las extracciones con solventes, requeridos por la analítica farmacéutica oficial.