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corazón, y que sea una de las señales encargadas de disparar la regeneración del corazón en el pez cebra.

El último de los genes relacionado con la ECM que hemos identificado en el microarray y hemos validado por qPCR e ISH sus cambios de transcripción, es keratina 18. En un trabajo sobre la regeneración de la aleta se había mostrado que la transcripción de keratina 18 aumentaba durante el proceso (Padhi et al., 2004). Durante la regeneración cardíaca, se expresa a partir de 1dpa por todo el epicardio así como en el endocardio de la herida. El patrón de expresión en el epicardio es muy similar al descrito para otros genes como radh2 o tbx18 (Kikuchi et al., 2011b; Lepilina et al., 2006). Esto sugiere que la activación sistémica del epicardio dispara también la expresión de keratina 18. Es probable que keratina 18 se requiera en la formación de filamentos intermedios (los forma junto con keratina 8 que también estaba aumentada en el microarray) y que éstos sean necesarios para la re-epitelialización y migración de la epidermis durante la regeneración de la aleta. Durante la regeneración del corazón podría intervenir en la migración y proliferación del epicardio para cubrir el miocardio expuesto.

2.2 Genes implicados en señalización

intracelular: junB y hyou1.

Otros genes que hemos identificado en el microarray y cuya implicación en la regeneración de la aleta se ha descrito posteriormente, han sido junB y junB-like (Ishida et al., 2010). junB se expresa tanto en la aleta como en el corazón durante la regeneración. En la aleta, se sabe que no se requiere en el cierre de la herida, pero sí en la formación del blastema (Ishida et al., 2010). Nosotros hemos visto que durante la regeneración del corazón su expresión está confinada a la zona más externa de la herida. Inicialmente, al endocardio a 1dpa y a 3dpa, se expresa también en el epicardio. A partir de 7 dpa sólo se expresa en la zona más externa de la zona de amputación. Este patrónes similar al

que muestra durante la regeneración de la aleta, en la que en un primer momento su activación se produce en el epitelio, para posteriormente pasar al blastema, donde se requiere para la proliferación (Ishida et al., 2010). El patrón de expresión a 7 dpa es parecido al de gata4 un poco después (Kikuchi et al., 2010). Esto sugiere que durante la regeneración del corazón,

junb se requiera para la proliferación de los

cardiomiocitos.

En este trabajo también hemos identificado y demostrado la participación de la chaperona Hyoy1 o ORF150. Hemos visto que se expresa durante la regeneración del aleta y del corazón. Esta proteína se ha implicado en protección frente a hipoxia en varios sistemas (Ozawa et al., 1999; Tamatani et al., 2001), por lo que puede actuar de manera parecida durante la regeneración de la aleta y del corazón, ya que aquí también se genera hipoxia por la falta de riego sanguíneo . Asimismo se sabe que durante el cierre y la reparación de heridas Hyoy1 está implicada en neovascularización y que su administración exógena acelera el proceso (Ozawa et al., 2001). Cabe sugerir que durante la regeneración de la aleta participe de la misma forma. Sin embargo, durante la regeneración del corazón podría tener otro papel, ya que Hyo1 participa en la respuesta al daño cardiaco inhibiendo la apoptosis y preservando la función contráctil (Aleshin et al., 2005). Este podría ser el caso, puesto que hyoy1 se expresa únicamente en la zona dañada durante la regeneración del corazón en el pez cebra.

v

pcR

3.

isH

:

.

En el transcurso de esta tesis analizamos el perfil de transcripción durante la regeneración del corazón, e identificamos genes que no habíamos obtenido en el análisis conjunto. Entre estos genes, el que más nos llamó la atención fue pescadillo ya que juega un importante papel en el desarrollo y regula la

Discusión

proliferación e inhibe la apoptosis (Gessert et al., 2007) . Por ello validamos el resultado por qPCR e ISH. Observamos su expresión a las 12 hpa mediante qPCR y a 1 dpa mediante ISH. A partir de 3 dpa decae su expresión, aunque se mantiene hasta al menos 14 dpa. Pescadillo es una proteína nuclear. Se ha visto que induce la apertura o despliegue de la cromatina, la transformación celular in vitro, la proliferación, la biogénesis de ribosomas, el ensamblaje de la envoltura nuclear y además durante el desarrollo se requiere en la formación y la migración de la cresta neural (Gessert et al., 2007; Lerch-Gaggl et al., 2002; Maiorana et al., 2004; Sikorski et al., 2006). El patrón y la dinámica de expresión de pescadillo sugieren que durante la regeneración del corazón podría participar en la apertura de la cromatina en las células de la herida. Estas células son las que van a de-diferenciarse y esta de-diferenciación se caracteriza por la expresión de genes propios del desarrollo cardíaco temprano.

v

pcR

4.

isH

:

1,

11

11

.

Hemos analizado el transcriptoma de la regeneración de la aleta y hemos validado alguno de los genes que previamente no habíamos identificado en el análisis conjunto. Estos genes son sall1, sox11a y sox11b.

Sall1, es un factor de transcripción implicado en la morfogénesis de la extremidad, en angiogénesis y en la diferenciación de células madre (Farrell and Munsterberg, 2000; Karantzali et al.; Kawakami et al., 2009; Sato et al., 2004; Yamamoto et al.). Además, sall4, uno de los genes de esta familia, está implicado en la formación y desarrollo de la aleta pectoral en el pez cebra (Harvey and Logan, 2006). Esto, junto con el hecho de que su expresión durante la regeneración de la aleta está confinada al blastema, nos sugiere que sall1 se requiere

para la morfogénesis de la aleta durante la regeneración.

Al igual que Sall1, Sox11a y sox11b son factores de transcripción (Rimini et al., 1999) y ambos se expresan durante la regeneración de la aleta. Están implicados en regeneración de la espina dorsal en pez cebra (Guo et al.), y en mantenimiento de la identidad de progenitores neurales en el sistema nervioso central y el sistema nervioso periférico (Jankowski et al., 2006; Lin et al.), así como en regeneración en mamíferos (Jankowski et al., 2009). Esto sugiere que sox11a y sox11b durante la regeneración de la aleta podrían estar implicados en la regeneración de las células neurales que se encuentran en la aleta.

v

5.

expResados duRante la RegeneRación delaaletaydelcoRazón

:

-1,

ptrF-

,

2,

-

-2.

5.1 Caveolina-1 y PTRF-cavin en la

regeneración de la aleta.

Caveolina 1 es la proteína responsable de la formación y función de las caveolas que, participan y regulan multitud de funciones celulares (Chidlow and Sessa, 2010). Caveolina

1 se expresa durante la regeneración de la aleta

y del corazón. En condiciones normales, cav-

1 se expresa en el extremo de la aleta caudal

del pez cebra. Esto puede explicar porqué en el resultado de nuestros microarrays la expresión de cav-1 es menor que en los controles. Sin embargo, tanto por PCR cuantitativa como por ISH hemos visto que se induce su expresión en el proceso y que está restringida a la zona del blastema. Todo ello sugiere que además de estar involucrada en la regeneración de la aleta lo está también en la homeostasis, de manera parecida a lo que ocurre en el caso de los FGFs (Wills et al., 2008b).

Discusión