J O S
E P
H
J
.C
L
A N C Y
,J
R
.A
s s e s sm
e nt
of
D
N A
D
am
ag
ei
nH
um
a nL
e uk
o cy t
e sb
y
T
am
o xi
f
e n a nd
4
-H
y d
r o xy t
am
o xi f
en
a sM
e a s u r ed i
nt
h
eS i
ng l
eC
el l G
el
E l
e ct
r op
h
o r et
ic
(
C
om
et
)
A
s s ay
(
U
nd
e rt
h
ed i
r e ct
i
on
of D
r.R
A Y
M
O N D R
.T I C E
)
A d
j
u v
an
t t
h
e r ap y
w i
t
h
t
am
o xi f
en
(
T A
M )
h
a sp
r o v en
i
n v
alu a
b l
ein
t
h
efi
g
h
t
a
g
ain s
t
b
r e a st
c an
c e r , r ed
u ci
ng
i
n ci d
en
c e s of i
n
v a siv e
b
r e a st
c a n c e rb
y
al
m
o st
5 0
%
.H
ow
e v e r ,i
t
s u s eh
a s als o
b
e e n a s s o cia
t
ed w i
t
h
a ni
n c r e a s ed
ri
sk f
o r en
d
om
et
ri
al
c a n c e r.T
o e xp l
o r ep
o s si b le
m
e ch
an
i
sm
s of
a ct
i
o n s,T
A
M
a nd
o n e of i
t
sp
rim
a ry
m
et
ab
ol i
t
e s,4
-h
y
d
r o xy t
am
o xi f
e n(
4
-O H T A
M )
,w
e r e e v al
u at
ed f
o rt
h
ei
r ab i l i
t y t
oin
d
u c eD
N A d
am
ag
ei
nh
um
a nl
e uk
o cy t
e s.L
e v el
s of
D
N A d
am
ag
ew
e r em
e a s u r ed b
y
t
h
e al k
al
i
n e(
p
H
>
1
3
)
Sin
g
le
C
el l G
el
(
S C G
)
E
l
e ct
r op
h
o r et
ic
A
s s ay
.T
A
M
a nd
4
-
O
H T
A
M
b
ot
h
p
r odu c e
d
s
l i
g h t
i
n c r e a s e si
nD
N A d
am
ag
ein
t
h
e ab
s en
c e of m
et
ab
ol i
c a ct
iv a
t
io n
(
S
9
)
.W
h
e nb
oth
c o
m
p
o un
d
sw
e r ein c u
b
at
ed w i
th
ei
t
h
e r r at
l i
v e r o rh
um
a nl i
v e rS
9
,t h
el
e v el
s of
D
N A
d
am
ag
ein
c r e a s ed
o nl
y
w h
e nT A
M
w
a si
n
c ub
at
ed
w
i
th
r at
l i
v e rS
9
.U
nd
e rt
h
e c o nd i
t
i
o n so
f t h
e s e e xp
e ri
m
e nt
s,T
A
M
o r4
-
O H
T A
M
e xh
i b i
t
ed w
e a
k g
e n ot
o xi
c a ct
iv
i
t y
.T h
er e
l
e v an
c e of
t
h
e s efi
n
d i
n
g
sto
adv e r s e
h
um
an
h
e alt
h
o ut
c om
e s r eq
uir e s
f
u rt
h
e rT
A B L E O
F
C O N
T
E N
T
S
A C
K
N O
W
L E D G E
M
E N T S
-I N T R O D U C T -I O N
1
L
i t e r a t u r eR
e v i ew
O FT A
M
2
H
um
a nS
tud
i
e s3
A
nim
al St
ud i
e s6
A bs o r
p
tio n,D is
trib
utio n, a nd E
x c r etio n
1 1
M
etab
ol is
m
1 2
M
e ch
a nis
m
(
s)
of
A
ctio n
1 4
S
i n g l eC
e l lG
e l(
C
om
e t)
A
s s a yR
e v i ew
2 0
M
A T E R I A L S A N D
M
E T
H
O D S
2 5
C h
em ic a
ls
2 5
C
ell
s2 6
M
etab
ol ic
A
cti
v atio n
2 6
A lk
al in e
S C G A
s s ay
a nd
V ia
b
i l it
y A
s s ay
s2 8
I m
ag
eA
n aly
sis
3 1
S
tat is
tic a
l
A
n aly
si
s3 1
R E S U L T S
3 3
V i
ab
il i
ty / L
M
W
D
ata3 3
A lk
al in e
S C G A
s s ay
3 4
D I S C U S S I O N
3 9
T A B L E S
T
a b l e1
.S
um m
a r y o fH
um
a nS
t u d i e s4 3
T
a b l e2
.D N A
M
i g r a t i o n i nT A
M
- a n d
4
-O
H
T A
M
-T
r e a t e dC
e l l s -Su
m
m
a r yD
a t a(
E
x p e r im
e n t sW
I T H O U TM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n)
4 5
T
a b l e3
.D N A
M
i g r a t i o n i nT A
M
-T
r e a t e dC
e l l s -S
um m
a r yD
a t a(
E
x p e r im
e n t sw
i t hM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n f r om
R
a t a n dH
um
a nL
i v e r)
4 6
T
a b l e4
.D N A
M
i g r a t i o n i n4
-
O
H
T A
M
-T
r e a t e dC
e l l s -S
um
m
a r yD
a t a(
E
x p e r im
e n t sw
i t hM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n f r om R
a t a n dH
um
a nL
i v e r)
4 7
F I
G
U R E S
F
i g u r e1
.P
o s t u l a t e dM
e t a b o l i cP
a t hw
a y s o fT
am
o x i f e n4 8
F
i g u r e2
.P
o s t u l a t e dM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o nP
a t hw
a y s f o rT
am
o x i f e n4 9
F
i g u r e3
.Sc h e
m
a t i cR
e p r e s e n t a t i o n o f t h eM
e t h o d o l o g y o f t h eA
l k a l i n eS C
G
A
s s a y5 0
F
i g u r e4
.E
x am
p l e s o fI m
a g eA
n a l y s i s:V
a r i o u sM
e a s u r e d a n dD
e r i v e dP
a r am
e t e r sT A
M
A N D4
O
H
T A
M
T
r e a t e dC
e l l s(
E
x p e r im
e n t sw
i t h o u tM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n)
5 2
F
i g u r e6
.M
e a nP
e r c e n tV
i a b i l i t y a n dL
ow
M
o l e c u l ar
W
e i g h t(
L
M
W
)
f o rT A
M
A N D4
-O
H
T A
M
-T
r e a t e dC
e l l s(
E
x p e r im
e n t sw
i t hR
a t a n dH
um
a nM
e t a b o l i cA c
t i v a t i o n)
5 3
F
ig
u r e7
.D
i s t r i b u t i o n o fT
a i lM
om
e n t i nT A
M
- a n d
4
-O
H
T A
M
-T
r e a t e dC
e l l s(
E
x p e r im
e n t sw
i t h o u tM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n)
5 4
F
i g u r e8
.D
i s t r i b u t i o n o fT
a i lM
om
e n t i nT A
M
-
T
r e a t e dC
e l l s(
E
x p e r im
e n t sw
i t hR
a t A N DH
um
a nM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n)
5 5
F
i g u r e9
.D
i s t r i b u t i o n o fT
a i lM
om
e n t i n4
-
O
H
T A
M
T
r e a t e dC
e l l s(
E
x p e r im
e n t sw
i t hR
a t A N DH
um
a nM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n)
5 6
F
i g u r eI O.
T
a i lM
om
e n t(
T
M )
a n dD
i s p e r s i o n o fT
a i lM
om
e n t(
T
M
-H
)
i nT A
M
-A N D
4
-O
H
T A
M
-T
r e a t e dC
e l l s -D
o s eR
e s p o n s eD
a t a(
E
x p e r im
e n t sw
i t h o u tM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n)
5 7
F
i g u r e1 1
.T
a i lM
om
e n t(
T
M )
a n dD
i s p e r s i o n o fT
a i lM
om
e n t(
T
M
-H
)
i nT A
M
-A N D4
-O
H
T A
M
-T
r e a t e dC
e l l s -D
o s eR
e s p o n s eD
a t a(
E
x p e r im
e n t sw
i t hR
a t A N DH
um
a nM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n)
5 8
F
i g u r e12
.S
c a t t e rP
l o t s o fE
x p e r im
e n t sw
i t h o u tM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n(
-S 9
)
,
w
i t hR
a tM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n(
R
a tS 9
)
, a n dH
um
a nM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n(
H
um
a nS 9
)
59
R E F E R E N C E S
6 0
A P P E N D I C E S
A
p p e n d i x1
.D N A
M
i g r a t i o n i nT A
M
-
T
r e a t e dC
e l l s -I
n d i v i d u a lC
u l t u r eD
a t a(
E
x p e r im
e n t sw
i t h o u tM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n)
7 2
A
p p e n d i x2
.D N A
M
i g r a t i o n i n4
-
O
H
T A
M
-T
r e a t e dC
e l l s -I
n d i v i d u a lC
u l t u r eD
a t a(
E
x p e r im
e n t sw
i t h o u tM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n)
7 3
A
p p e n d i x3
.D N A
M
i g r a t i o n i nT A
M
-
T
r e a t e dC
e l l s -I
n d i v i d u a lC
u l t u r eD
a t a(
E
x p e r im
e n t sw
i t hM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n f r om R
a tL
i v e r)
7 4
A
p p e n d i x4
.D N A
M
i g r a t i o n i nT A
M
-
T
r e a t e dC
e l ls
-I
n d i v i d u a lC
u l t u r eD
a t a(
E
x p e r im
e n t sw
i t hM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n f r om
H
um
a nL
i v e r)
7 5
A
p p e n d i x5
.D N A
M
i g r a t i o n i n4
-
O
H
T A
M
-T
r e a t e dC
e l l s -I
n d i v i d u a lC
u l t u r eD
a t a(
E
x p e r im
e n t sW
I T HM
e t a b o l i cA
c t i v a t i o n f r om R
a tL
r v E R)
7 6
A
p p e n d i x6
.D N A
M
i g r a t i o n i n4
-
O
H
T A
M
-T
r e a t e dC
e l l s -I
n d i v i d u a lC
u l t u r eD
a t aA
C
K N O
W
L E D
G
E
M
E
N
T S
I
w
an
t t
ot
h
a nk
m
y
c om
m
i
t t
e e,D
r.R
ay
m
o nd
T
i
c e,
D
r .L
o ui
s eB
al l
, a
n
d
D
r.A
v r am G
ol d
,fo r
t h
ei
rf
ai
r a nd
t
h
o r o ug
h
r e vi
ew
of
th i
st
e ch
n
i
c al
r ep
o rt
.M
y
si
n
c e r et
h
a nk
st
oD
r.R
ay
m
o nd
T
ic e
f
o rh i
sg
ui d
an
c e an
d
e xp
e rti
s ei
n al l
p
h
a s e s of
t
h i
s r ep
o rt
,e s
p
e cia
l l
y
in
r eg
a rd
st
ot
h
eC
om
et
A
s s ay
.I
w
a nt t
o e xp
r e s sm
y g
r at
i
t
ud
et
oD
ap h
n
eC l
an
cy
,w h
op
r ov
i d
ed
m
u ch
n
e ed
ed
t
e ch
n
i
c al
a s sis
t
a n c eth
r ou
g
h
ou
t t
h
e e xp
e rim
en
t
sc o n
d
u ct
ed
.F i
n al l
y
,I
w
a nt t
ot
h
a nk
D
r s.T
.K
.R
a o a nd T i
c ef
o rp
e rm i
t t
i
ng
th
e u s e of
th
eC
a n c e r of
th
eb
r e a st
i
sth
em
o st
fr
eq
u e nt t
j
'p
e of
c a n c e rin
w
om
e ni
nt
h
eU
nit
ed
St
at
e s(
U
.S
.)
, a
n
d i
t
r em
ai
n
sth
e s e c o nd l
e ad i
ng
c a u s e of
c a n c e r-r e
l
ate
d d
e ath
s.O
n ei
ne
i g h
t
w
om
e ni
nt
h
eU
.S
.w i l l d
e v elo
p b
r e a st
c a n c e r an
d
o n ein
tw
en
t y
-e
i gh
t
w
om
e nw i l l
d i
efr
om
t
h i
sd i
s e a s e(
SE E
R
,
19 9
7
)
.H
ow
e v e r, a s r e
p
o rt
ed la s
t y
e a r ,th
ed
e at
h
r at
efr
om
b
r e a st
c
a n c e rh
a sd
e cl i
n ed b y
ap p
r o xim
at
el y
2
0
%
an
d 2 4
%
i
nth
eU
.S
. a nd G
r e at
B
r
i
t
ai
n ,r e s
p
e cti
v el
y
(
P
et
o et
ah
,2 0 0 0
)
.Wh i l
em
an
y
f
a cto r s a r e
c on tr
i b
ut
in
g
t
ot
h i
sd
e c r e a s e,t
r e at
m
e nt
w i
t
h
th
e s el
e cti
ve
e st
r og
en
-r e c e
p t
o rm
od
ul
at
o r(
SE R
M )
t
am
o xi f
e n ci
tr a
t
e(
T A
M )
h
a sb
e en
ci
t
ed
a st
h
e si
ng l
em
o st
i
m
p
o rt
a nt
f
a ct
o r(
P
et
o et
ah
,2
0 0 0
)
.T
A
M
h
a sb
e e nt
h
ep
ri
m
a ry
ch
oi
c ef
o rt
h
e ad
j
u v a nt t
r e at
m
en t
of b
r e a st
c an
c e rin
p
o st
-m
en
op
a u s al
,e s
t
r og
e n-r e c ep t
o r-p
o sit
i
v ep
at
i
e nts s
i
n c eth
em
i d
-1 9 8 0
s.
T h
e ab i l i
t
y
of
t
h i
sd
r ug t
od
e c r e a s et
h
ei
n ci d
e n c e of
n ew
, c o n
t
r a-
l
at
e r al
t
um
o r sh
a s e xp
an
d
ed i
t
s r ol
ein
th
e
t
r e at
m
e nt
of b
r e a st
c a n c e r,in c
l
ud in
g
it
s u s e a s ap
r op
h
y
l
a xi
sin
w
om
e nw i
t
h
s e v e r al
h
i
g
h
"
ri
sk
"f
a ct
o r sf
o rt
h
ed is e a s e
.H
ow
e v e r,t
h
e u s e of T A
M
al
s oh
a sb
e e n a s s o ci
at
ed w
i t h
s e v e r a
l
un
d
e si
r ab l
e si d
e ef f
e ct
s,m
o st
n ot
ab l
y
of w h i
ch is a
n
i
n c r e a s ed ri
sk
of
e nd
om
etri
al
c a n c e r .
T
h
em
e ch
a ni
sm
(
s)
of
a ct
i
o nb
y
w h i
ch T A
M
cau s e s e n
d
om
et
ri
al
c an
c e r r em
ain s
u n
k
n
ow
n .T
o e xp l
o r ep
o s si b le
m
e ch
a ni
sm
s of
a ct
io n
,
T A
M
a nd
o n e of i
t
sp
ri m
a ry
m
et
ab
ol
i
te s
,4
-h
y
d
r o xy
t
am
o xi f
e n(
4
-O H
T A
M )
,
w
e r e e v al
u at
ed f
o rth
ei
r ab i l i
t
y
t
oin
d
u c eD
N A d
am
ag
ei
n
h
um
a nl
e uk
o cy
t
e s, a sm
e a s u r ed b
y t h
e al k
al
i
n e(p
H
>
1 3
)
Si
n
g
l
eC
el l
G
el
s
t
r a nd b
r e ak
s(
S SB
)
,d
o ub l
e st
r a nd b
r e ak
s(
D
SB
)
, al k
al i
-l
a
b i l
e si
t
e s, a nd i
n c om
p
l
et
ee x c
i
si
o n r ep
air
si
t
e e v e nt
s.A
s s e s sm
e nt
s of
vi
ab i l i
t
y
a nd l
ow m
ol
e c ul
a rw
ei
g
h
t
D
N A
w
e r e c o nd
u cte
d
t
od is
ti
ng
ui
sh b
et
w
e e nD
N A d
am
ag
e r e s ult
in
g
f
r om
g
e n ot
o xic
e v e nt
s a nd
D SB
a ri
sin
g t
h
r o ug
h
cy t
oto x
i
ci
t y
.In
ad d it
i
o n ,t
o e v al
u at
ew h
et
h
e rh
um
a n s o r r atsm
et
ab
ol i
z e ei
t
h
e rT A
M
o r4
-O H
T A
M
t
o r e a ct
i
v eg
e n ot
o xi
c sp
e cie s
,t
h
e s e c om
p
o u nd
sw
e r et
e st
ed f
o rt
h
eir a
b i
l
i
t y t
oin
d
u c eD
N A d
am
ag
ew
h
e ni
n c ub
at
ed i
nt
h
ep
r e s e n c e of
l i
v e rm
i
c r o s om
al fr
a cti
o n s(
S 9
)
d
e ri
v ed fr
om
h
um
a n c ad
a v e r s o rA
r o ch l
o r-in
d
u
c e
d m
al
er a
t
s.P
ri
o rt
od
e s c ri b i
ng
t
h
em
at
e ri
al
s a nd m
et h
od
s u s ed i
nt
h
e s e e xp
e ri
m
e nt
s an
d
p
r e s e nt
in
g t
h
e r e s ult
s,t
h
e a v ai l
ab l
el i
t
e r at
u r e on
T A
M
is r e v
ie
w
ed f
ol l
ow
ed b
y
ab
ri
ef
r e v
i
ew
of
t
h
eC
om
et
A
s s ay
.L i t
e r at
u r eR
e vi
ew
of T
A
M
T
A
M
h
a sb
e e n a c cla
i m
ed
a s o n e of
t
h
em
o st
i m p
o rt
a nt
d
r ug
d i
s c o v e ri
e si
n
t h
ef i g h
t
ag
ai
n
st
b
r e a st
c a n c e r.I
t
is o n e o
f
th
em
o st
st
ud i
ed
a nt
i
-c a n -c e r
d
r ug
s(
Z
en
e c a,1 9 9 7
)
, a nd
i
t
i
s als o
t
h
em
o st
cl i
ni
c al l
y
t
e st
ed dr u
g
u s ed i
nt
h
e ad
j
u v a nt t h
e r ap y
of b
r e a st
c
a n
c e r(
Sm
i
t
h
et
al
,2 0 0 0
)
.N
um
e r o u s stu
d i
e sh
a v eb
e e
np
ub l
is
h
ed w h i
ch
c o nf
i rm
T
A
M
's
im
p
o rt
an
c e a nd
ut
i l i
t y
i
nd
e c r e a si
n
g t
h
em
o rta
l i
t y
, r ate
of
t
um
o rg
r ow
t
h
,a
nd
r e c u r r e n c e o
f b
r e a st
c a n c e r(
l A R C
,19 9 6
)
Si
n c eT
A
M
w
a s ap p
r o v ed f
o rm
a rk
et
i
ng i
nt
h
eU
.S
.i
n1 9 7
8 f
o rt h
et
r e at
m
e nt
of
ad
v a n c ed b
r e a st
c a n c e r,
t
h
eF
D A
h
a s al
s o ap p
r o v ed
i
t
s u s ei
nt h
et
r e at
m
e nt
of
ot
h
e rt y
p
e s of b
r e a st
c a n c e r s.T h
e s e u s e si
n
cl
ud
et h
et
r e at
m
e nt
o
f
p
o st
-m
e n o
p
a u s al w
om
e nt
od
el
ay
b
r e a st
c a n c e r r e c u r r e n c e(
ap p
r o v ed i
n1
9 86
)
, of
w
om
e nw i
t
h
a xi l l
a ry
n od
e-n eW
h i l
eth
eb
en
ef i t
s of
T A
M
i
nt
h
et
r e at
m
e nt
of b
r e a st
c a n c e r c a nn
ot
b
ed i
sp
ut
ed
,th
e r e a r e,h
ow
e v e r, ad
v e r s e si d
e ef f
e ct
s a s s o ci
at
ed w
i t h i t
s u s e.T h
e s e si d
ee
f f
e ct
si
n cl
ud
e a ni
n c r e a s ed
ri
sk
f
o rp
ul
m
o n a ry
em
b
ol i
sm
s,
t
h
ed
e v el
op
m
e nt
of
c a
t
a r a ct
s, a nd
,m
o st
i
m
p
o rt
an
t
l
y
, an
i
n
c r e a s ed
ri
sk f
o r c an c e r of
t
h
el i
ni
ng
of
t h
ee n
d
om
et
ri
um
.T
h
e e vi d
e n c e a s s o ci
ati
ng t h
e u s e of T
A
M
w i
t
h
a ni
n
c r e a s ed
ri
sk
of
e n
d
om
et
ri
al
c a n c e r c om
e sf
r om b
ot
h h
um
an
a nd l
ab
o r ato r
y
an
i
m
al
st
ud i
e s.H
um
a nS
tu
d
i
e sH
um
an
cl i
ni
c al d
at
ah
a s sh
ow
n al i
nk b
et w
e e nt
r e at
m
e nt
w
i t h T A
M
a nd
an
i
n
c r e a s ed
ri
sk f
o r en
d
om
et
ri
al
c a n c e r, al
th
o ug h
th
e e vi d
e n c ef
o r c a u s al i
t
y i
s n ot
a ss
t
r on
g
a si
t
i
si
n e xp
e ri
m
e nt
al
an
i m
al
s.T h
e e vi d
e n c eh
a sb
e e n s uf f
i ci
e nt
l
y
c o n v
i
n ci
ng
,h
ow
e v e r,f
o rt
h
eI
nt
e r n at
i
o n al A
g
e n cy
f
o rR
e s e a r ch
o nC
an
c e r(
l
A R C
,19 9 6
)
t
o cl
a s si fy
T
A
M
a s c a r ci
n og
e ni
ct
oh
um
a n(
G
r o up 1
)
.T
h
eN
T P
'
s
N i
n
t
h
R
ep
o rt
o n
C
a r
ci
n
og
e n s(
2 0 0 0
)
ag
r e ed w it
h l A
R
C
's c o n c
l
u si
o n a nd l i
st
e
d T A
M
a sk
n ow
nto
b
e ah
um
a n c a r ci
n og
e nb
a s ed
o n stu
d i
e si
nh
um
a n si
nd i
c at
i
ng
a r el
at
i
o n sh
i
p
b
et w
e e n e xp
o s u r et
oT A
M
an
d
c an
c e r s of
t
h
eu
t
e ri
n
e e nd
om
et
ri
um
B
oth w
o rk i
ng
g
r o up
s al
s o a ck
n ow l
ed
g
ed
th
at t
h
e r ei
s c o n cl
u si
v e e vi d
e n c et
h
at
t
h
e u s e of
T
A
M
i
nb
r e a st
c a n c e rp
at
i
e nt
s si
g
ni
f
i c a nt
l
y
r ed
u c e st h
e ri
sk f
o r c o nt
r a-l
at
e r al
t
um
o r s.
A
c c o rd i
ng
t
ol
A R C
(
19 9 6
)
,t
h
ep
o sit
i
v e a s s o ci
at
i
o nb
et
w
e e nt
r e at
m
e nt
w i
t
h
T
A
M
a nd
an
i
n c r e a s ed
ri
sk
of
en
d
om
et
ri
al
c a n c e rh
a sb
e e n r ep
o rt
ed i
n o n e ad
eq
u ate
c o
h
o rt
st
ud
y
,f
o u r c a s e-c o n
t
r ol
st
udi
e s, a n
d f
o u rt
e e n r a nd
om
i
z ed
cl
i
ni
c al
t
ri
al
s(
R
C
T
)
a
m
on
g 8 7
,3 2 3 w
om
e nw i
t
h b
r e a st
c an
c e r r ep
o rte
d
t
ot
h
eU
.S
.Su r v e
i l l
an
c e,
E p
i d
em
io
l
og y
, an
d
E
nd
R
e s ul
t
sP
r og
r am
.T
h
ei
n v e st i g
at
o r s r ep
o rt
ed
a st
at
is
t
i
c al
l y
s
i
g
ni fi
c an
t
el
e v at
i
o ni
n
t
h
e sta
n
d
a rd i
z ed i
n ci
d
e n c e r at
io
(
2
.0
,9 5
%
C
o nfi
d
en
c eI
nt
e r v al
[
C
I
]
=
1
.2
-
2
.
6
)
of
e nd
om
et
ri
al
c a n c e rin
w
om
e nw h
o r e c eiv e
d
T
A
M
t
h
e r ap y
.T
h
ec a s e-c o n
t
r ol
st
ud ie s c o
m
p
a r ed T
A
M
u s ei
nw
om
e nw
i
t
h
b
r e a st
c an
c e rw h
o ei
t
h
e rs u
b
s eq
u e ntl
y
d
e v el
op
ed
e nd
om
etr
i
a
l
c a n c e r(
c a s e s)
o rd i d
n ot
(
c on
tr o
l
s)
.W
om
e nh
a vi
ng
ah y
st
e r e ct
om
y
w
e r e n ot
c o n si d
e r ed
t
ob
e st
ud
y
p
art
i
ci
p
a nt
s.I
n e a ch
of
t
h
ef
o u r c a s e-c o n
t
r ol
st
ud i
e s(
H
a rd
el l
et
al
.,19 8 8
;
v a nL
e e uw
a n et
al
.,1 9
9
4 ;
C
o ok
et
ah
,19 9 5
;
Sa s c o
et
al
,1
9 9 6
;
al l
cit
ed b
y l
A
R
C
,19 9 6
)
, ap
o si
t
iv e a s s o c
ia
t
io n
b
et
w
e e nT
A
M
u s e a nd
e nd
om
et
ri
al
c a n c e rw
a s ob
s e r v ed
.I
nth
et w
ol
a rg
e st
r a nd
om
i
z ed
c
l i
n
ic a
l
tr
i
al
s,th
eU
.S N
at
i
o n al Su r
g i
c al A d
j
u v a nt
B
re
a st
a nd B
ow
el P
r oj
e ct
(
N SA
B
P
)
B
-1 4 P
r ot
o c ol
an
d
t
h
eSt
o ck h
ol
m
B
re
a st
C
an
c e rStu
d
y
G
r o up
,t
h
e r ew
a s as
tr o n
g
a nd
sta
t
i
sti
c al l
y
si
g
ni fi
c a nt
a s s o ci
at
i
o nb
etw
e e nT
A
M
u s e an
d
t
h
e ri
sk
of
e
n
d
om
etr
i
a
l
c a n c e r(
od d
s r at
i
o s[
a nd 9 5 % C I
]
of 7
.5
[
1
.7
-
3 2
.
7
]
a nd
5
.6
[
1
.9
-
16
.
2
]
,r e s
p
e cti
v el y
) (
F
i
sh
e r et
al
,19 94
,R
ut q
vi
st
et
al
,1 9 9 5
)
.W
h
e nd
at
afi
"o
m
aSc o
t t
i
sh
R C
T
le
d b y
D
r .C
.C
.M
cD
o
n al d w
a sp
o ol
ed w i
t
h
th
ed
at
afi
-o
m
t
h
e s et
w
o
tr
i
al
s,5
y
e a r s of T A
M
u s ew
a s a s s o ci
ate
d w it
h 3 3 m
o r e c a s e s of
e nd
om
et
ri
al
ca
n c e r(
4
2
c a s e sd
u ri
n
g 2 4
,0
0 0
w
om
an
-y
e a r s of f
ol l
ow
-u
p
i
nt
h
eT A
M
g
r o up
s v s.9
c a s e sd
u ri
n
g
2 1
,2 0 0 w
om
a n-y
e a r sin
th
e c o nt
r ol g
r o up
s) (
E
a rl
y B
r e a st
C
a
n c e rT
ri
al i
st
s 'C
ol l
ab
o r at
i
v eG
r o up
[
E
B
C
T
C G
]
,1 9
9
8
)
.H
ow
e v e r,d
e sp
it
et
h
ei
n
c r e a s ed i
n ci d
e nc
e of
e nd
om
et
ria
l
c an
c e r s,F i
sh
e r et
al
.(
1
9 9
4
)
c o n clu
d
ed
t
h
at
th
e n et
b
e n efi
t
s of
T
A
M
g
r e at
l
y
o ut
w
ei
g
h
t
h
e ri
sk
s.T
h
ea n
d A
s si k i
s a nd Jo r
d
a n(
19 9 7
)
w h
o r ep
o rte
d
t
h
at
m
o st
e nd
om
etr
ia
l
c an
c e r s a s s o ci
at
ed
w i
t
h
T
A
M
u s ew
e r e of
a ne
a rl
y
st
ag
e a nd
c u r ab l
e.T
h
e s e c on
clu s
io
n
sh
a v eb
e e nd i
sp
ute
d b
y
A h
ot
up
a et
al
.(
1 9 9 4
)
a nd
v a nH
o of
f
(
1 9 9 8
)
w h
o cl
ai
m
t
h
at
l
on
g
-te r
m
T A
M
t
h
e r ap y
in
w
om
e n cl
e a rl
y
i
n c r e a s e st
h
ef
r eq
u e n cy
of
ad
v a nc
ed
st
ag
ee
nd
om
etr
i
al
c a n c e r an
d
t
h
at t
h
ep
r og
n o sis o
f
s u r vi
vin
g t
h
e s e c an
c e r si
sp
o o r.H
um
a n cl i
ni
c al
st
ud i
e sh
a v ed
em
o n st
r at
ed
a cl
e a r a s s o ci
at
i
o nb
etw
e en
T
A
M
u s e a n
d p
o sit
i
v eb
e n efi
t
s s u ch
a s a st
at
i
sti
c al l y
si g
n
i fi
c a nt
r ed
u ct
i
o ni
nt h
e r e c u r r e n c eo
f
c on
tr a
-l
a
t
e r al b
r e a st
c a n c e r a nd
ap
r op
o rti
o n al
r ed
u ct
i
on
i
nb
r e a st
c an
c e rd
e ath
r
a
t
e s.T
h
eE B
C T C G G
r o up
c om p
a r ed 5
5 R
C
T
an
d
ob
s e r v ed
t
h
at
T A
M
tr e a
t
m
e nt
r a n
g i
n
g
fr
om
o n eto
fi
v ey
e a r sw
a s a s s o ci
at
ed w i
th
si
g
n
i fi
c a nt
r ed
u ct
io n s
i
nt
h
er e c u r r e n c e o
f b
r e a st
c a n c e r a nd i
nb
r e a st
c a n c e rd
e at
h
r at
e s(
E B
C T C G
,1 9 9 8
)
.T
h
e s efi
nd in
g
s c o nf
i rm
ed
a n e a rl i
e r r ep
o
rt
fr
om
th
e s am
e
g
r o up i
nw h i
ch
t
h
ey
a n al
y
z ed
t
h
er e s u
l
t
s of
1 6 6 R
C
T
(
E B
C
T
C G
,1 9 9 2
)
.D
u
et
ot
h
e e xfr
em
el
y l
ow
sh
o rt
-t
e rm
t
o xi
ci
t y
p
r of
ile
a nd b
e c
a u s e of
th
er e
d
u cti
o ni
n
n ew
c o nt
r a-l
a
t
e r al b
r e a st
c a n c e r s ob
s e r v ed i
nm
a ny
cl i
ni
c al
t
ri
al
s of
T
A
M
,th
e r eh
a sb
e e nin c r e a s e
d i
nt
e r e st
in
i
ts u s e a s a
p
r op
h
y
l
a xis
.C
u r r en t
l
y
,t
h
r e em
aj
o rtr
ia
l
s a r ei
np
r og
r e s st
o a s s e s st
h
e ab i l i
t
y
of T A
M
t
op
r e v e nt
b
r e a st
c a n c e ri
n
s u
b
j
e cts c o n s
i d
e r ed
at
h i
g
h
-ri
sk f
o rd
e v elo
p
i
ng
b
r e a st
c a n c e r.I
n o n e of
t
h
e s et
ri
als
,t
h
eB
r e a st
C
a n c e rP
r e v e nt
i
o nT
ri
al
o rP
-1 T
ri
al
c o nd
u ct
ed b
y
t
h
eN SA
B P
,T
A
M
r e
d
u c ed
th
e ri
sk
of in v a s
i
v eb
r e a st
c a n c e rb
y 4 9
%
(
t
w
o-s
i d
ed
P
v al
u eP
<
0
.0 0 0 0
1
)
w i
t
h
a c um
ul
ati
v ei
n ci d
en
c e of b
r e a st
c a n c e rth
r o ugh 6
9
m
on
t
h
s of f
ol l
ow
v
s.2 2
.0
p
e r1
0 0
0
w
om
e nin
t h
ep l
a c eb
o a nd
T A
M
g
r o up
s, r e s
p
e ct
i
v el
y
(
F
i
sh
e r et
al
. ,19 9 8
)
.T
h
ed
at
aw
a s r el
e a s ed
14 m
o nt
h
sb
ef
o r et
h
ep
l
a nn
ed
c om
p
l
eti
o n of
t
h
e st
ud
y
s o
w
om
e ni
nt
h
ep l
a c eb
og
r o up
c o ul d
c o n si d
e r st
a rt
in
g T
A
M
th
e r ap y
(
A
ult
an
d
B
r ad b
u ry
,
1 9 9
8
)
.T
od
at
e,
h
ow
e v e r,t
h
e r eh
a v eb
e e n3 6
c a s e s of
e nd
om
etr
i
al
c an
c e ri
nt
h
eT
A
M
g
r o up
c om
p
a r ed
t
o1 5
c a s e sin
th
ep l
a c eb
og
r o up
.T h
e ot
h
e rt
w
oR
C
T
,o n e c o
n
d
u ct
ed i
nI
t
al
y
a nd
o n e c o nd
u ct
ed i
nth
eU
ni
te
d K i
ng
d
om
,h
a v ey
et t
od
em
o n st
r at
e eit
h
e rt
h
e ab i l i
t y
of
T
A
M
t
o r ed
u c eth
ein c
i d
e n ce o
f b
r e a st
c a n c e rin
"
h
e al
th
y
w
om
e n" o rt
h
e ab i l i
t y
of
T
A
M
t
o c au
s e a ni
n c r e a s ein
e
nd
om
etr
ia
l
c a n c e ro
v
e rt h
el
e v el
s of
t
h
ep
l
a c eb
og
r o up
(
Sm
it
h
et
al
.,
2 0 0 0
)
.B
a s ed
o nt
h
ef i
nd
i
ng
s of t h
eB
r e a st
C
a n c e rP
r e v e nt
io n
T
ria
l
,Z
e n e c aP h
a rm
a c e ut
ic a
ls
f
il
ed
aS
up p l
em
e nt
al N
ew D
r ug A p p l i
c ati
o nw i
th
th
eF D
A
o nA p
ri l
3 0
,19 9 8
(
A
n
o ny
m
o u s,19 9 8
)
.O
nSe
p t
em b
e r2
,1
9
9
8
,T A
M
m
o v ed
a st
ep
cl
o s e rt
oa
p p
r o v al
a s ap
r e
ve
nt
at
iv e a
g
e nt
w h
e nt
h
eO
n
c ol
og i
cD
r ug A d
vi
so r
y
C
om
m
i
t t
e e of
t
h
eF D
A
r e c om m
e nd
ed i
t
s u s e a s ap
r op
h
y
l
a xis
f
o rw
om
e n c o nsi d
e r ed
t
ob
e at
h i
g
h
r
i
sk
f
o rt
h
ed i
s e a s e(
A
n
o ny
m
o u s,19 9 8
)
.I
n ad d i
t
i
o n,th
e r e a r e st
ud i
e sb
ei
ng
c o n
d
u ct
ed
o nth
e u s e of T A
M
fo r
a v a ri
et y
of
oth
e rm
al i g
n a n cie
s,i
n clu
d i
ng
h
ep
at
o c el l
ul
a rc a
rc
in o
m
a, c a r c
in o
m
a of
th
e st
om
a ch
, r e n al
-
c e
l l
c
a r cin o
m
a , an
d
c a r c
i
n
om
a of
t
h
e c e r vi
x a nd
o v a ry
(
l
A R C
,19 9 6
)
.A
ni m
al St
ud
i
e sl
A R C
(
19 9 6
)
c o n cl
ud
ed
t h
e r ew
a s s uffi
ci
e nt
e vid
e n c et
o cl
a s si
fy
T
A
M
a s ac a r c
i
n
og
e ni
n a ni m
al
s.T
h i
s c o n cl
u si
o nw
a sb
a s ed
o n st
ud ie
s
th
at
d
em
o n st
r at
ed
aP
r e cl i
n
i
c al
t
o xi
c ol
ogi
c al
st
ud
i
e s o nT
A
M
b
eg
a nin
1 9 6 4
a nd
c o nt
i
n u ed
f
o rm
o r et
h
an
1 0 y
e a r s.T
h
e s e st
ud i
e sw
e r e c o nd
u ct
ed b y Z
e n e c aP h
a rm
a c e ut
i
c al
s(
ad
i
vi
si
o n of
I
C
I
Ch
em
i
c al
s a nd
p
r op
ri
et
o r s of t h
ed
r ug
)
a nd
i
n cl
ud
ed
t
e st
i
ng
o n r at
s,d
og
s, a nd
m
o nk
ey
sf
o rp
e ri
od
s up t
o si
xm
o nth
s o rl
o ng
e r an
d
s e v e r al l
o ng
e rt
e rm
s
t
ud i
e si
nm
i
c e(
1 2
t
o1 5
m
o nt
h
si
nm
i
c e) (
T
u ck
e r et
al
.,1 9 8 4
)
.I
ng
e n e r al
,t
h
e r ew
e r en
o si g
ni f i
c a nt t
o xi
c ol
og
i
c al
ef f
e ct
s ot
h
e rt
h
an t
h
o s ef
o u nd i
nth
e r ep
r od
u ct
i
v et
r a ct
.B
e ni
g
n
g
o n ad
al
t
um
o r s a nd b
o n e ch
a ng
e sw
e r e ob
s e r v ed i
nm
i
c e at
h i
g
h d
o s e s.T h
e s e ef f
e ct
sw
e r e sh
ow
nt
ob
e r el
at
ed
t
oT
A
M
's e s
t
r og
e ni
c a ct
i
vi
t y
T
e r at
ol
og
i
c al
s
t
ud i
e sp
r od
u c ed f
ew
si g
ni f
i c an
t
fi
nd i
ng
s ot
h
e rt
h
a n a ni
n c r e a s ed i
n
ci d
e n c e of
i
r r eg
ul
a r o s si f i
c at
i
o n of
ri b
si
nf
et
al
r at
s e v al
u at
ed i
nd
am
sg
i
v e nT
A
M
at
d
o s e s ab
o v e2
m
g
/k
g
.T h
e r eh
a v eb
e e n n um
e r o u s a ni m
al
c a r ci
n og
e ni
ci
t y
st
ud i
e s c on
d
u ct
ed
on
T
A
M
;
m
o st
of
th
e s e st
ud i
e sh
a v eb
e e n r e vi
ew
ed b
y l
A
R C
(
1 9 9 6
)
o rW
og
a n(
1 9 9 7
)
.T h
em
o st
si g
n
i f i
c a nt
a ni m
al
c
a rc
i
n og
e
ni
ci
t y
st
ud
y
w
as
c o nd
u ct
ed b
y
G
r e a v e s et
al
.(
1
9 9 3
)
.I
nt h
i
s st
ud
y
,g
r o up
s of
m
al
e a nd
f
em
al
eW
i
st
a r -d
e r
i
v ed
(
A l d
e rl y P
a rk
)
r at
s,6 w
e ek
s of
ag
e,w
e r eg
i
v e n5
,2 0
, o r3 5
m
g
/k
g T A
M
p
e rd
ay
b
y
o r al
g
a v ag
e(
5
m
L
/ k g
)
f
o r2
y
e a r si
n a co
n ve
nt
i
o n al
c a r cin
og
en
i
ci
t y
b i
o a s s ay
.T
h
em
aj
o rfi
n
d in
g
w
a s at w
o-s e x,
d
o s e-r e
l
at
ed i
n c r e a s ei
nth
ei
n ci d
e n c e of h
ep
at
o c el l
ul
a r c a r ci
n om
as
t
h
at
w
e r ef
i r st
ob
s e r v ed
aft
e
r3
1
w
e ek
s of
t
r e at
m
e nt
.N
oi
n c r e a s ein
th
ei
n ci d
en
c e of
t
um
o r sw
a s ob
s e r v ed
at
a ny
ot
h
e r si
t
e.S
um m
a ri
e s of
ot
h
e r a ni
m
al
c a r ci
n og
e ni
ci
t
y
G
r o up
s of
5 7
,8
4
, a nd 7 5 f
em
al
eS
p
r ag
u e-D
aw le
y
r at
s, si
xw
e ek
s of
ag
e,w
e r eg
i
v e n0
,1 1
.3
, a n
d
2 2
.6
m
g
/
k g T
A
M (
9 9 %
p
u r e)
b
y
o r al
g
a v ag
ein
0
.5
%
c a r
b
o xy
m
et
h
y
l
c el l
ulo s e
(
C
M
C
) (
H
a rd
et
al
,1
9 9
3
)
.T h
e r at
sw
e r ed
o s ed
s e v e nd
ay
sp
e rw
e ek f
o r up
to
1 2
m
o nt
h
s,f
ol l
ow
ed b
y
a3
-
m
o nt
h
p
o st
-t
r e at
m
e nt
ob
s e r v at
i
o np
e ri
od
.I
nt
e rim
n e c r op
si
e sw
e r ep
e rf
o rm
ed
at
3
,
6
, a nd
1 2
m
o nt
h
s; t
h
et
e rm i
n al
s a c r
i fi
c e o c c u r r ed
af te r
15 m
o nt
h
s.A
t
12
m
o nt
h
s,
t
h
e
i
n ci d
e n c e of h
ep
at
o c el l
ul
a rc a r c
i
n om
a sw
a s0 %
(
0/
1
8
)
in
c o nt
r ol
,4 4
%
(
1 6
/
3 6
)
i
nt
h
el
ow
-d
o s e, a n
d
1
0 0 %)
(
2 4 /
2 4
)
i
nt
h
eh i
g
h
-d
o s e a ni m
al
s.
G
r o up
s of 2 0 f
em
ale
Sp
r ag
u e-D
a
w l
ey
r at
s, si
xw
e ek
s of
ag
e,w
e r ea
d m in
i
st
e r ed
0
,1 1
.3
, o r
4
5
m
g
/k
g T
A
M (
9 9
%
p
u r e)
b
y
o r al
g
a v ag
ei
n0
.5
%
C
M
C
s e v e
n
d
ay
sp
e rw
e ek f
o r up
t
o on
ey
e a r(
H
ir s
im
ak i
et
al
.,
19 9 3
)
.A
ni
nt
e ri m
n e c r op
sy
w
a sp
e rf
o rm
ed
aft
e r2 6
w
e ek
s of
t
r e at
m
e nt ;
n ot
um
o r sw
e r e ob
s e r v ed
.W
ei
g
h
t g
ai
nw
a s r ed
u c ed i
nt h
et
r e ate
d
a ni m
al
s.A ft
e r5
2 w
e ek
s of
t
r e at
m
e nt
,
t
h
ein
ci d
e n c e of
h
ep
at
o c el l
ul
a r c a r cin o
m
a sw
a s0
%
(
0
/ 5
)
in
t
h
e c o ntr o
l
,0
%
(
0 /
5
)
i
n
t
h
el
ow
-d
o s e, a n
d
6 0 %)
(
3 /
5
)
in
t
h
eh i gh
-d
o s e an
i m
als
.So
m
e a nim
a
l
sw
e r e ob
s e r v ed f
o r a na
d d i
t
io n a
l
13 w
e ek
s aft
e rt
h
e c o n cl
u si
o n of
t
r e at
m
e nt
T h
ei
n ci d
e n c e of h
ep
at
o c el lu
l
a rc a r c
i
n om
a si
n
t
h
e s e a nim
al
sw
a s0
%)
(
0
/
8
)
in
t
h
e c o nt
r ol
,0
%
(
0 / 8
)
i
nt
h
elo
w
-d
o s e,
a
n
d 83 %)
(
5/
6
)
i
n
t
h
eh i
g
h
-d
o s e a
n
im
al
s.G
r o up
s of
5 5
-5 7
f
em
ale
S
p
r ag
u e-D
aw l
ey
r ats
, si
xw
e ek
s of
ag
e,w
e r ea
d
m
in
i
st
e r ed
0
,2
.8
,
1 1
.3
, o r
