C h
ri
st
in a
A
.L
i k i
rd
op
ulo s
.T
h
eD
i
si
nf
e ct
io n
oi
C
ry p
t
o sp
o ri
d
i
um p
a r v um
O
o cy
st
s a nd
B
a ci
l l
u s s ub
ti
l
i
sS p
o r e si
nW
at
e rU
si
ng E l
e ct
r o ch
em i
c al l
y G
e n e r at
ed O
xi
d
a nt
sP
r od
u c ed
b
y
M
i
ni
atu r
i
z ed P
e n c el l
s.(
U
nd
e rt
h
ed i
r e ct
i
o n of
M
a rk D
.S
ob
s ey
)
C
ry p
t
o sp
o ri
d
i
um p
a r v um
o o cy
st
sh
a v e c a u s ed
n um
e r o u sw
ate r
b
om
e o ut
b
r e ak
sd
u et
ot
h
ei
r r e si
st
a n c et
ot y p
i
c al
ch
em
i
c al
d i
si
nf
e ct i
o nm
et
h
od
s, s u ch
a s ch l
o ri
n at
io n
.P
r e vi
o u s st
ud
i
e sh
a v e e xp l
o r ed
t
h
ei
n a ct
i
v at
i
o n of
C.
p
a r v um
o o cy
st
sb
y
s om
e al
t
e r n at
i
v ed
i
si
nf
e ct
a nt
sA d
d i
t
i
o n al l
y
, a s ui
t
ab
l
e s u r r og
at
eh
a s n ot
b
e e ni d
e nt
i f
i ed f
o rt
h
ep
r e s e n c ea n
d
r e sp
o n s et
od i
si
nf
e ct
io n
of C
.p
a r v um
alt
h
o ug
h
b
a ct
e ri
al
sp
o r e s, s u ch
a sB
a ci
l lu s
s u
b
ti
l
i
s,h
a v eb
e e np
r op
o s ed
.I
nt
h i
s st
ud
y
,5
m
g
/
L
d
o s e s of
el
e ct
r o ch
em
i
c al l
y g
en
e r at
ed
o x
i
d
a nt
s(
E C G O
)
p
r od
u c ed fr
om
p
e n c ell
s.N
ew
C
el l
# 1
a nd
F
ul
l
P
e n(
1 1
)
,w
e r e a n al
y
z ed
f
o rth
ei
rd i
si
nf
e ct
i
o n c ap
ab
i l
i
t
ie s a
g
ai
n st
C p
ar v um
o o cy
st
s a nd
B
a ci
l l
u s s ub
t
i
li
se n
d
o sp
o r e s u nd
e r v a ry
i
ng
c o nd
i t i
o n s of
p H
,t
em
p
e r at
u r e a nd
w
at
e rq
u al
i t y
.T
w
oc o
m m
e r cia
l
s o u r c e s of C
.p
a r v um
o o cy
sts
w
e r e e v al
u at
ed
.I
n a ct
i
v at
i
o nk i
n et
i
c s of
th
eB
s u
b
ti
l
i
s e nd
o sp
o r e sw
e r e c om
p
a r ed f
o rE
C G O
a nd f
r e e ch lo r
i
n e(
F C
)
A l
t
h
o ug
h
n ei
th
e rp
e n c el l
a ch i
e v ed C
.p
a r v um
o o cy
st
in a c
ti
v at
i
o n ,t
h
eE
C G O d i
sin
f
e cta n
t
s a nd
F
C
p
r od
u c ed
s ub
sta n
t
i
al
r ed
u ct
i
o ni
nB
s ub
ti
l
i
s sp
o r e s u nd
e r s om
e of
th
et
e st
c o nd
i
ti
o n s.B
ot
h p H
a nd
t
em
p
e r at
u r eh
ad
si g
ni fi
c a nt
ef f
e ct
s o nt
h
e e xte n
t
of
e nd
o sp
o r ein a c
t
i
v at i
o n.E
nd
o sp
o r ed i
si
nf
e ct
i
o nk i
n et
i
c sb
y E C G O
a nd
F C w
e r e si m i
l
a r at
al l
t
e st
c o nd i
t
io n s
D
u et
ot
h
ed i f f
e r e n c ein
m ic r o
b i
al i
n a ct
i
v at
i
o nb
etw
e e nB
. s ub
ti
l
i
s a nd
C p
a r v um
,it
is
c o n c
l
ud
ed
t
h
at t h
e e nd
o sp
o r e s a r e n ot
a s ui
t
ab l
e s u r r og
at e
f
o rt
h
ed i
si
nf
e ct
io n
of C
.I
w
a nt t
ot h
a nk D
rM
a rk
S
ob
s ey
f
o r al l
of h i
sg
ui d
a n c e a nd
s up p
o rt t
h
r o ug
h
o ut
m
y g
r ad
u at
e c a r e e rI
al
s o ap p
r e ci
at
et
h
e adv
i
c e, c o nt
ri b
ut
i
o n s a nd
c om m
i
t
m
e nt
f
r om
D
r .L
o ui
s eB
al l
a nd D
r .H
ow
a rd
W
ei
nb
e rg
fo r
s e r vi
ng
o nm
y
m
a st
e r 's c o
m m
i
t te e
.T
h i
s r e s e a r ch w
a sf
u nd
ed b
y
M
I O
X
,I
n c a nd I
e xp
r e s sm
y g
r at i t
ud
et
ot
h
ei
re
m
p l
oy
e e sf
o rb
ei
ng p
ati
e nt
a nd
u nd
e r st
a nd i
ng
t
o a n o n-e ng i
n e e r.I
am
e sp
e ci
al l y i
nd
eb
te
d t
om
y f
el l
ow
l
ab
m
at
e sw
h
oh
a v etr a
i
n ed
a nd
a s si
st
ed
m
ein
m
y
r e s e a r ch
t
hr o u
g h
o ut t
h
ep
a st t
w
oy
e a r s, e sp
e ci
al l y D
o ug
W
ai
t
,D
o r ot
h
y T
h
om
p
s o na n
d
P
at
ri
ck
Sa n
d
e r s o n .F
u rt
h
e rm
o r e,I
w
a nt
t
ot
h
a nk
m
y
f
am i l
y
a nd fr i
e nd
sf
o r al l
of
t
h
ei
r e n c o u r ag
em
e nt
a n
d
l
o v ed
u rin
g
t
h
e c o u r s e of
m
y g
r ad
u ate
stu
d
y
.T
h
e s ep
a st
t w
oT
A
B L E
O
F C
O N
T E
N
T S
L i
st
of F i g
u r e s vi
L
i
st
of
T
ab
l
e s vi i i
L
i
st
of
A
b b
r e vi
at
i
o n s xI
.I
nt
r od
u ct
i
o n1 3
n
.O
b
j
e ct
iv e s
1
7
I I I
.R
e vi
ew
of
t
h
eL
i
t
e r at
u r e1 8
A
.C
ry p
t
o sp
ori
d
i
um p
a r v um
1 8
A
.1
.H
i
st
o ry
a nd
T
a x o n om
y
1 8
A
.2
.G
e n e r al
B i
ol
og
y
2 0
A
.3
.E p i d
em
i
ol
og y
2 3
A
.4
.C
ry p
t
o sp
o ri d
i
o si
si
nH
um
a n s2 7
A
5
.E
xp
e ri m
e nt
al C
o ntr o
l in
D
ri
n
k i
ng
W
at
e r a nd
i
nD
i
si
nf
e ct
io n
(P h y
si
c al
a nd
C
h
em ic a
l
M
et
h
od
s)
3 1
B
.B
a ci l l
u s s ub
t
i l i
s3 8
C
.D
ri
nk
i
n
g
W
at
e r4 0
C
.1
.H
i
st
o ry
of
D
ri
nk i
ng
W
at
e r a nd
R
eg
ul
at
i
o n s4 0
C
.2
.S
u
r r og
at
e sf
o rD
et
e ct
i
n
g
M
ic r o
b
i
al
C
on t
am i
n
ati
o n4 4
C
.3
.C
o n v e nt
i
o n al D
ri
nk i
ng
W
at
e rT
r e atm
e nt
4 5
C
.4
.D i
si
nf
e ct
i
o n4 8
C
.5
.M
I O
X
,I
n c. a nd E l
e ct
r o ch
em
i
c al
l
y G
e n e r at
ed
O
xi d
a nt
s5 1
D
.D
i
si
nf
e ct
i
o nK i
n et
i
c s5 5
E
.S
um
m
a ry
5
8
I
V
.M
at
eri
al
s a nd
M
et
h
od
s5 9
A
.O
xi d
a nt D
em
a nd
F
r e eW
at
e r,
B
uf f
e r a nd
G
l
a s sw
a r e5 9
B
.P
r od
u ct
i
o n of
E
le c
t
r o ch
em i
c al l y G
e n e r at
ed
O
xi d
a nt
s(
E C G
O
)
w i
t
h
t
h
eP
en
c el l
an
d
t
h
eS
od iu
m
H
y p
o ch lo r
i
t
eD i
si
n
f
e ct
an
t
6
0
C
.M
e a s u r em
e nt
of T
ota
l O
xi d
a nt
s6 2
F
.E
xp
eri
m
e nt
al D
e si g
n6
9
G
I
n a ct i
v at
io n
C
al
c ul
at
i
o n s7
1
H
.D
ata
A
n al y
si
sM
et
h
od
s7 1
V
.R
e s ul
ts a n
d
D i
s c u s si
o n7 2
A
.E
xp
eri m
e nt
al C
o nd it
i
o n sT
e st
ed
7 2
A
.1
.E
xp
eri m
e nt
al Se
t 1
7
3
A
.2
.E
xp
eri m
e nt
al Se
t 2
7 8
A
.3
.E
xp
eri m
e nt
al
Se
t
3
8
1
A
.4
.E
xp
eri m
e nt
al
S
et 4
8 5
A
.5
.E
xp
eri
m
e nt
al
S
et
5
8 9
A
.6
.S
um m
a ry
9 3
B
S
t
at
i
st
ic a
l A
n al y
s e s9 5
C
.D
i
s c u s sio n
9 8
V
I
.C
o n cl
u sio n
1 0 8
V
I I
.R
ef
e r e n c e s1 1
0
V
I I I
.A
p p
e nd i
c e s1 2 2
A
.A
p
p
e nd
i
xA
(
S
um m
a ry T
ab l
e of A l l
E
xp
eri m
e nt
s a nd
E
xp
eri
m
e nta
l
D
at
a)
1 2 3
B
.A p p
e nd ix
B
(
R
aw D
at
af
o rE
xp
eri
m
e nt
al S
et 1
)
12
5
C
.A p p
e nd
i
xC
(
R
aw
D
ata
f
o rE
xp
eri
m
e nt
al
S
et 2
)
1 3 4
D
.A
p p
e nd i
xD
(
R
aw
D
at
af
o rE
xp
eri m
e nt
al
S
et
3
)
1
3
9
E
.A
p p
e nd
i
xE
(
R
aw D
at
af
o rE
xp
e ri m
e nt
al S
et
4
)
14 5
F
.A
p p
e nd
i
xF
(
R
aw D
at
af
o rE
xp
eri m
e nt
al Se
t
5
)
15 0
G
.A p p
e nd ix
G
(
M
et
h
od
M
od i fi
c at
io n s a n
d Su
m
m
a ry T
ab l
e sfo r
P
r e vi
o u sP
e n c el l E
xp
eri m
e nt
s a nd
E
xp
e ri
m
e nt
al D
at
a)
1 5
3
L I S T
O
F F I
G
U R E S
F i
g
u r e1
:L
i f
e cy
cl
e of
C
ry p
t
o sp
o ri
d
i
um p
a r v um
2 1
F i g
u r e2
:T y
p i
c al I
n a ct
i
v at
i
o nK
in e
t
ic s
f
o rM
ic r o
b i
al D i
sin
f
e cti
o n5 7
F
i g
u r e3
:F
ul l
P
e n(
1 1
) (
le
f
t
)
a nd N
ew
C
el l
# 1
(
ri
g
h
t
)
6 0
F
i
g
u r e4
:C
r o s sS
e ct
i
o n of
th
eP
e n c el l
6 0
F i
g
u r e5
:M
D C
K
C
ell C
ul t
u r eI
nf
e ct
i
vi
t
y
A
s s ay
f
o rC
.p
a r v um
6 7
F
i g
u r e6
:L
i f
e sta
g
e s of
C p
a r v um
st
ain e
d w
i
t
h
F I T C
l
ab
el
ed m A b
6 8
F
i g
u r e7
:C p
a r v um
d i l
ut
i
o n s e ri
e sfo r
H
em
a cy t
om
ete r
C
o u nt
s of
E
xp
e ri
m
e nta
l
S
am
p l
e s6 8
F
i
g
u r e8
:S
ch
em
at
i
c of
R
e a ct
i
o nT
ub
e sfo r
E
xp
e ri m
e nt
7 0
F
i g
u r e9
:C h l
o ri
n eR
e si d
u al
D
at
af
o rD
em
a nd
E
xp
e ri
m
e nt
sw i
t
h
C
p
a r v um
a nd
B
s ub
t
i l i
s at
a5
m
g
/
L D
o s e,p H 7
a nd
2 5
°C i
nO D F B
uff
e r7 4
F
i g
u r e1 0
:In a c
t
i
v ati
o n of
5
. s ub
t
i l is
w
i
t
h
N
ew
C
el l # 1
,F
ul l P
e n(
1 1
)
a nd
F C
at
5
m
g / L
,p H 7
a nd
2 5
°
C i
nO D F B
uf
f
e r7 6
F i g
u r e1 1
:In a c
t
i
v at
i
o n of C
p
a r v um
w
i t
h N
ew
C
el l # 1
a nd
F
ul l
P
e n(
1 1
)
a
t 5
m
g
/
L
,p H 7
a
nd
2 5
°C
i
nO D F B
uf f
e r7 7
F
i
g
u r e1 2
:C h l
o ri
n eR
e si
d
u al D
at
af
o rD
em
a nd E
xp
e ri m
e nt
sw i
t
h
M
a s o n a nd
S
t
e rl i
ng C p
a r v um
w
i
t
h
N
ew
C
el l # 1
at
a5
m
g / L D
o s e,p H 7
a nd 2 5
' '
C
i
nO D F B
uf f
e r7 9
F
i
g
u r e1 3
:In a c
t
i
v at
i
o n of
M
a s o n a nd S
t
e rl i
ng C
.p
a r v um
w
i
t
h
N
ew C
el l # 1
at
5
m
g / L
,p H 7
a nd
2 5
' '
C i
nO D F B
uf f
e r8 0
F
i g
u r e1 4
:C h l
o ri
n eR
e si
d
u al D
at
af
o rD
em
a nd
E
xp
e ri m
e nt
sw i t h C p
ar v um
a nd
B
. s ub
t
i
li
s at
a5
m
g
/
L D
o s e,p H 7
a nd
S
^C
in
O D F B
uf f
e r8
2
F
i g
u r e1 5
:I
n a ct
i
v at
i
o n of
B
. s ub
t
i
l
is
w i
t
h N
ew
C
el
l
# 1
a nd
F C
at
5
m
g
/
L
,p H 7
a nd
5
°C in
O
D F B
uf f
e r8 4
F
i g
u r e16
:I
n a ct
i
v at
i
o n of C
p
a r v um
w i
th N
ew C
el l # 1
at 5
m
g
/
L
,p
H 7
a nd
5
°C
i
nO D F B
uf
f
e r8 5
F
i g
u r e1 7
:C h
l
o ri
n eR
e si
d
u al
D
at
af
o rD
em
a nd
E
xp
e ri m
e nts
w
i
t
h C
p
a r v um
a nd
B
. s ub
t
i
l
i
s at
a5 m
g
/
L D
o s e,
p H
1
0
a nd 2
5
°F
i
g
u r e1 8
:I
n a ct
iv a
t
io n
of 5
. s ub
t
i l is
w
i
t
h
N
ew
C
el l # 1
a nd
F C
at 5
m
g / L
,p H
1 0
a nd
2 5
°C i
nO D F B
uf f
e r8 8
F
i
g
u r e1 9
:I
n a ct i
v at
io n
of
C
.p
a r v um
w i
t
h
N
ew C
el l
# 1
at
5
m
g
/
L
,p H 1 0
a n
d
2 5
°C i
nO D F B
uf
f
e r8 9
F
i
g
u r e2 0
:C
h l
o rin e
R
e si
d
u al D
at
af
o rD
em
a nd
E
xp
e ri m
e nt
sw
i
th
B
s ub
t
i
l
is
at
~
6
-8
m
g
/
L D
o s e s,p H 7
a nd
2 5
°C i
n "D
i
rt
y
"B
uf f
e r9 1
F
i
g
u r e2 1
:I
n a ct
iv a
t
io n
of
5
s ub
t
i
l
i
sw i
t
h N
ew C
el l #
1
at
~
6
-8
m
g
/L
,p H 7
a n
d
2 5
°C i
n "D
i
rt
y
"B
uf f
e r9 2
F i g
u r e2 2
:Su
m
m
a ry
of
t
h
eB
s ub
t
i
l
is
In a c
ti
v ati
o nw
it
h
th
eE
C G O
D
i
si
nf
e ct
a nt
s(
N
ew
C
el l #
1
a nd
F
ul
l
P
e n(
1 1
))
9 4
F i g
u r e2 3
:S
um m
a ry
of
t
h
eB
s ub
t
i l i
sI
n a ct
i
v at
i
o nw
i
t
h
t
h
eF C D i
si
nf
e ct
a nt
9 5
F i g
u r e2 4
:S
um
m
a ry f
o rB
. s ub
t
i l i
s a nd
C p
a r v um I
n a ct
iv a
t
io n
a nd
9 5
%
C
o nf i
d
e n c eIn
te r v a
l
sf
o rE
xp
e ri
m
e nt
al S
et
s1
,3
,4
a nd
5
at
t h
e3 0
M
i
n ut
eT i
m
eP
oi
nt
9 7
F i g
u r e2 5
:S
um m
a ry f
o rM
a s o n a nd
S
t
e rl i
ng C p
arv um I
n a ct
i
v at
i
o n a nd 9 5
%
C
o nf
id
e n c eI
nt
e r v al
sf
o rE
xp
e ri
m
e nt
al S
et
s2
at t
h
e3 0
M
i
n ut
eT i
m
eL I S T
O
F T
A
B L E
S
T
ab l
e1
:T
a x o n om
i
cC
l
a s si fi
c at
i
o n of
C
ry p
t
o sp
o ri
d
i
um
2
0
T
ab l
e2
:Su
m
m
a ry
of C T V
alu e s
f
o rC
p
a r v um
3 6
T
ab l
e3
:F A C C
o n c e nt
r at
io n
(
m
g / L
)
P
r od
u c ed b
y N
ew C
el l # 1
a nd F
ul l P
e n(
1 1
)
6 2
T
ab l
e4
:E
xp
e ri m
e nt
al
P
a r am
et
e r sT
e st
ed
7 3
T
ab l
e5
:B
s ub
t
i
li
s a nd C
.p
a r v um I
n a ct
iv a
t
io n
at 5
m
g
/ L
,p
H 7
a nd
2 5
°C
in
O D F B
uf fe r
7 5
T
ab l
e6
:R
eg
r e s si
o nA
n al
y
si
sf
o rt
h
eI
n a ct
i
v at
io n
of 5
s ub
t
i
l
is a
t
5
m g /
L
,p H 7
a nd 2
5
°C i
nO
D F B
uf f
e r76
T
ab
l
e7
:R
eg
r e s si
o nA
n al
y
si
sf
o rt
h
eI
n a ct
iv a
t
io n
of C
p
a r v um
at
5
m
g
/
L
,p
H
7
a nd
2 5
°C
i
nO D F B
uf f
e r7 7
T
ab l
e8
:M
a s o n a nd
S
t
e rl
in
g C p
a r v um I
n a ct
i
v at
i
o n at
5 m
g / L
,p H 7
a nd
2 5
°C i
nO
D F B
uf f
e r80
T
ab
l
e9
:R
eg
r e s si
o nA
n al
y
si
sf
o rt
h
eI
n a ct i
v at
i
o n of
M
a s o n a nd
S
t
e rl i
ng
C
./
^ a r v wm
at
5
m
g / L
,p H 7
a nd
2 5
°
C i
nO D F B
uf f
e r8 0
T
ab l
e10
:5
. s ub
t
i
li
s a nd C
.p
a r v um I
n a ct i
v at
io n
at
5
m
g
/ L
,p H 7
a nd
5
°C
in
O D F B
uf f
e r8 3
T
ab
l
e1 1
:R
eg
r e s si
o nA
n al
y
si
sf
o rt
h
eI
n a ct
i
v at
i
o n of
5
. s ub
t
i
li
s at
5
m
g / L
,p H 7
a nd
5
°C i
nO D F B
uf fe r
8 4
T
ab
l
e12
:R
eg
r e s si
o nA
n al
y
si
sf
o rt
h
eI
n a ct
iv a
t i
o n of
C p
a r v um
at
5
m
g
/
L
,p H 7
a nd 5
°C
in
O
D F B
uf f
e r8 5
T
ab l
e1
3
:5
s ub
t
i
l
is
a nd C
.p
a r v um I
n a cti
v ati
o n at 5
m
g
/ L
,p H
1 0
,2 5
°C
in
O D F B
uf f
e r8
7
T
ab l
e14
:R
eg
r e s sio n
A
n al
y
si
sf
o rth
eIn a c
t i
v ati
o n of
5
. s ub
t
i
l
is
at 5
m
g
/
L
,p
H
1 0
a nd
2 5
°C i
nO D F B
uf f
e r8 8
T
ab l
e1 5
:R
eg
r e s si
o nA
n al
y
si
sf
o rt
h
eI
n a ct
iv a
t
io n
of C
p
a r v um
at 5
m
g
/
L
,p
H
1 0
a nd
2 5
°C i
nO
D F B
uf f
e r8 9
T
ab l
e1 6
:B
s ub
t
i l i
sI
n a cti
v at i
o n at ~
6
-8
m
g / L
,p H 7
a nd
2 5
^0
in
"T
ab l
e1 7
:R
eg
r e s si
o nA
n al
y
si
sf
o rt
h
eI
n a cti
v at
i
o n of
5
s ub
t
i
li
s at
~
6
-8
m
g
/ L
,p H 7
a nd
2
5
°C
i
n "D
i
rt
y
"B
uf f
e r9 2
T
ab l
e1 8
:S
um
m
a ry
of
t
h
eB
. s ub
t
i
l
i
sI
n a cti
v ati
o nw i
t
h
t
h
eb
ot
h
t
h
eE C
G O
a n
d
F
C
D
i
si
nf
e ct
a nt
s9 4
T
ab l
e1 9
:S
um
m
a ry
f
o rB
s ub
t
i
l
i
s a nd
C
.p
a r v um I
n a ct
i
v at
i
o n a nd
9 5
%
C
o nfi d
e n c eI
nt
e r v al
sf
o rA l l
E
xp
e ri m
e nt
al
S
et
s at t
h
e3 0
M
i
n ut
eT
i m
eP
oi
nt
9 6
T
ab l
el
a :S
um m
a ry T
ab l
e of A l l
E
xp
e ri m
e nt
sC
o nd
u ct
ed
1
2 3
T
ab
l
el
b
:O
rg
a ni
z at
i
o n of E
xp
e ri m
e nt
al S
et
s1 2 3
T
ab l
eI
c :S
um m
a ry
of
D
at
af
o rE
xp
e ri m
e nt
al S
et
s1
-5
1 2 4
T
ab l
e sl A
-l R
:R
aw
D
at
af
o rE
xp
e ri m
e nta
l
S
et 1
1 2 5
T
ab l
e s2
A
-2 H
:R
aw
D
at
af
o r
E
xp
e ri m
e nt
al
S
et
2
1 3 4
T
ab l
e s3
A
-3
N
:R
aw
D
at
af
o rE
xp
e ri
m
e nt
al S
et
3
1 3 9
T
ab
l
e s4
A
-4 L
:R
aw D
at
af
o rE
xp
e ri m
e nt
al
S
et 4
14 5
T
ab
l
e s5
A
-5 F
:R
aw
D
at
af
o rE
xp
e ri
m
e nt
al
S
et
5
1 5 0
T
ab l
e6 A
:S
um m
a ry T
ab l
e of
P
r e vi
o u sP
e n c el l
E
xp
e ri m
e nt
s1 5 5
T
ab
l
e6 B
:S
um m
a ry T
ab
l
e of P
r e vi
o u sP
e n c el l E
xp
e ri
m
e nt
al D
ata
1 5 6
T
ab
l
e s7
A
-7 C
:R
aw
D
at
af
o r
E
xp
e ri m
e nt
A
1 5 7
T
ab l
e s8
A
-8 C
:R
aw
D
at
af
o rE
xp
e ri
m
e nt
B
1 5 8
T
ab l
e s9
A
-9 C
:R
aw D
at
af
o rE
xp
e ri m
e nt
C
1 5 9
T
ab
l
e sl OA
-l OD
:R
aw
D
at
a
f
o rE
xp
e ri
m
e nt
D
1 6 0
T
ab l
e sI I
A
-I I D
:
R
aw
D
at
af
o rE
xp
e ri m
e nt E
1
6
2
T
ab l
e s1 2
A
-1 2 F
:R
aw
D
at
af
o rE
xB C
b i
ol
og i
c al
c o nt
r ol
C C
ch
em i
c al
c o nt
r ol
C F R
C
od
e of F
ed
e r al
R
eg
u
l
at i
on
sc
f
u c ol
o ny
f
o rm
i
ng
u ni
t
sC I
c o nf
id
e n c ei
nt
e r v al
C I2
ch l
o ri
n eC IO
2 ch l
o ri
n ed i
o xi d
eC I O
2 "c
h l
ori
t
eC l O
s'
c
h l
o r at
eC
I
O
4 "p
e r ch l
o r at
eC O
2 c a rb
o nd
i
o xi d
eD
A
P I
/
P I
4
',
6
-d
i
a
m
i
d i
n o-2
-p
h
ey
ny
l i
nd
ol
e/
p
r op
i d i
um i
od i d
eD
-M
E
M
/ F
-1 2 D
ul
b
e c c o 's
M
od
i f
i
ed
E
ag l
eM
ed i
um
D P D
N
,N
-
d i
eth
y
l
-p
-p
h
e ny
l
e n ed i
am i
n eD T
d
e xt
r o s et
ry p
t
o n e ag
a rE
C G O
el
e ct
r o ch
em
i
c al l
y g
e n e r at
ed
o xi d
a nt
sE
xp
t
. e xp
e ri m
e nt
al
s et
F
A C
fr
e e a v ai l
ab l
e ch l
ori
n
eF C
fr
e e ch l
ori
n eF I T
C
f l
u o r e s c ei
ni
s ot
h i
o cy
a n at
eF P
(
l l
)
F
ul l P
e n(
1 1
)
H O C l
h y p
o ch l
o r o u s a ci
d
H
2O
2h y d
r og
e np
e r o xi d
el E
S
W
T R
I
nt
e ri m
E
nh
a
n c ed
S
u rf
a c eW
at
e rT
r e at
m
e nt
R
ule
K
a a ci d d i
s s o ci
at
i
o n c o n st
a nt
L
A
T
A
L
o sA l
am
o sT
e ch
n
i
c al
A
s s o cia
t
e sm A b
m
o n o cl
o n al
a nt
i b
od y
M
C L
M
a xi m
um
C
o nt
am
i
n a nt
L
e v el
M
C L G
M
a xi
m
um
C
o nt
am i
n a nt
L
e v el
G
o al
M
D C
K
M
ad
i
n e-D
a rb
y C
a ni
n e-K i
d
n ey
c el l
sM
F
m
i
c r ofi l
t
r at
i
o nm
g
/
L
m i l l i
g
r am / l i
t
e rM
I O
X
m
i
x ed
o xi d
a nt
d
i
si
nfe c
t
a nt
(
al
s oE C G O
)
m
L
m
i l
l i l i
t
e rM
P
N
m
o st
p
r ob
ab l
e n um b
e rm
W
m
i l l i w
at t
N
aC l
s od
i
um
ch l
o ri d
eN
aC 10
2 s od
i
um
ch l
o ri
t
eN
aO C
l
s od i
um
h
y
p
o ch l
o ri
t
eN
aO H
s od
i
um h
y
dr o x
i
d
eN C # 1
N
ew
C
el l #
1
N C I
3t
ri
ch l
o r am i
n en
d
n od
at
aN H
C
1
2N O
M
N
oN
,N
T
U
O
3O C
l
"O D
F
d i
ch l
o r am i
n en a
t
u r al
o rg
a ni
cm
at t
e rn u
m b
e r of m i
c r ob
e sp
r e s e nt
at t
i m
e0
n u
m b
e r of
m
i
c r ob
e sp
r e s e nt
at t
i m
et
N
ep
h
elo
m
et
ri
cT
u rb
i
d i
t
y
U
ni
t
o z o n e
h
y p
o ch l
o ri
t
eio n
o x
i d
a nt
d
em
a nd f
r e eP
A
H O
P
a nA m
e ri
c a nH
e al t h
O
rg
a ni
z at i
o nP B
S
p
h
o sp h
at
eb
uff
e r ed
s al
i
n eP B S / B S
A
p h
o sp h
at
eb
uf f
e r ed
s al i
n e/
b
o vi
n e s e r um
al b
um i
np p
m
p
a rt
sp
e rm i
l l i
o nP V A / D A B C O p
ol y
vi
ny l
al
c oh
ol
/ 1
,4
-
D ia z a
b
i
cy
cl
o-[
2
.2
.2
]
o cta n e
r
p
m
r ot
at
i
o n sp
e rm
i
n ut
es o r s e c. s e c o n
d
sS
t
d
.D
e v . st
a nd
a rd d
e vi
at
i
o nT H
M
t
ri h
al
om
et
h
a n eU
C
ul
t
r a c ul
t
u re
m
ed i
aU F
ul
t
r afi l
t
r at
i
o n|
i
L
m
i
c r ol i t
e ru n
d
u nd i l
ut
eU S
E P
A
U
nit
ed S
ta
t
e sE
n vi
r o nm
e nta
l
P
r ote c
t
i
o nA g
e n cy
U V
ul
t
r a vi
ol
et
l i gh
t
E
t
i
ol
og
i
c ag
e nt
s r e sp
o n si b l
ef
o r al m
o st
h
al f
of
th
e r ep
o rt
ed w
at
e rb
om
ed i
s e a s eo u
tb
r e ak
si
nth
eU
ni t
ed S
t
at
e s a r e n e v e ri d
e nt
i f
i ed
(
C
ohn
et
al
.,
1 9 9 9
)
.O
b
st
a cl
e st
h
at
p
r e v e nt
et
i
ol
og
i
c ag
en t
sf
r om b
ei
ng
d i
s c o v e r ed i
n cl
ud
et
h
ed i f fi
c ul t y
of i
s ol
at
i
ng
th
em
i
c r ob
ef
r om
c o nt
am i
n at
ed
w
a
t
e r,l i m i
t
ed d
i
ag
n o st
i
ct
e ch
ni
q
u e st
ot
e st
f
o r em
e rg
i
ng
p
at
h
og
e n s, o rt
h
e e xi
st
e n c e of
u n r e c og
n
i
z ed
m
i
c r ob i
al
ag
e nt
s c ap
ab l
e of p
r od
u ci
ng
i
nf
e ct
i
o u sd
i
s e a s e vi
aw
at
e r.M
i
c r ob
i
al p
ath
og
e n s a s s o ci
at
ed w
i t h
w
at
e rb
om
ed i
s e a s e s a r eu s u a
l l y
of h
um
a n o r a ni m
al
e nt
e ri
c o ri g i
n
.A
l t h
o ug
h m
a ny
o rg
an
i
sm
s c a nb
ef
o u nd i
nf
e c al l y
-c o nt
am
i
n at
ed w
at
e r, e n
t
e ri
cp
r ot
o z o a,p
a rt i
c ul
a rl
y C
ry p
t
o sp
o ri
d
i
um
,h
a v eb
e e n am
aj
o r c a u s e of
w
at
e rb
om
e o ut b
r e ak
s si
n c e1 9 8 1
(
M
o e,1 9 9 7
)
.D
u ri
ng t
h
ep
e ri
od
of
1
9 8 0
t
o1 9 9 6
,t
h
e r ew
e r et
e n o ut
b
r e ak
s c a u s ed
b
y C
ry p
t
o sp
o ri
d
i
um i
nt
h
eU
ni
t
ed
S
t
at
e sw i
t
h
4 1 9
,9 3
9
c a s e s of
i l l
n e s s.O
f
th
e s e c a s e s,4 0 3
,0 0 0
a r ef
r om
a si
ng
l
e o utb
r e ak i
nM
i l
w
a uk
e e,W
I
i
n1 9 9 3
(
C
ohn
et
al
.,
1
9 9
9 ;
M
a cK
e n zi
e et
al
.,
1 9 9 4
)
.C
ry p
t
o sp
o ri d i
um
sp
e ci
e s c a n r e ad i l
y
c o nt
am
i
n at
e s u rf
a c ew
at
e r s up p l i
e sd
u et
oth
ei
r ub i
q
ui
t
y
i
n n um
e r o u s a ni m
al
r e s e r v oi
r s.O
n e st
ud y f
o u nd m
o r et h
a n8 0 %
of
t
h
es u r
f
a c ew
at
e r s o u r c e s a nd
2 6
%
of
t
h
et
r e at
ed d
ri
nk i
ng
w
at
e r s up p
l i
e si
nt
h
eU
ni
t
ed
S
t
at
e sw
e r e c o nt
am
i
n at
ed w
i
t
h t h i
sp
r ot
o z o a n(
S
m
i t h
a nd
R
o s e,1 9 9 8
)
.N
um
e r o u sf
e at
u r e s of
C
ry p
t
o sp
o ri
d
i
um p
a r v um
al l
ow i
t t
op
o s e a s at
h
r e at t
op
ub l i
cw
at
e r s up p l i
e s :(
1
)
t
h
el
a rg
e n um
b
e r of i
n
f
e ct
i
o u so o c
y
st
s e x c r et
ed
(
~
1
0
' °d
u ri
ng
sy
m
p t
om
at
i
ci
nf
e ct
i
o ni
nh
um
a n s a nd
~
1 0
^ o o cy
st
s/ g
r am
f
e c e si
ni
nf
e ct
ed
c al
v e s)
,(
2
)
t
h
e z o o n ot
i
c n at
u r e of
t
h
ec o n
d i
t
i
on
s,(
4
)
t h
ei
r sm
al l
si
z e(
~ 5
(
im
i
nd i
am
et
e r)
al l
ow
in
g
t
h
em
to
p
e n et
r at
e o rw i
t
h
st
a nd
c o n v e nt
i
o n al
d
ri
nk
i
ng
w
at
e rt
r e at
m
e nt
,(
5
)
t
h
el
ow
i
nf
e cti
o u sd
o s e,(
6
)
t
h
ea
b
s e n c e of
a r el i
ab l
e s c r e e ni
ng t
e st
f
o rt
h
ep
r e s e n c e of
t
h
ei
nf
e ct
i
o u sf
o rm
, a nd
(
7
)
t
h
el
a ck
of
a ni
nd i
c at
o r o rg
a ni
sm
si g
n al i
ng
t
h
ei
rp
r e s e n c e(
S
m
i
t
h
a nd R
o s e,1 9 9 8 ; S t
ei
n e r et
a
l
.,1 9
9
7
)
C
ry p
to s
p
ori
d
i
um p
a r v um
i
sf
o u nd w
o rl
dw i
d
e a nd
c a u s e s c ry p
to s
p
o ri d i
o si
s, ag
a st
r oi
nt
e st
i
n al i l l
n e s s(
S
m
i
t
h
,1 9
9 8
)
.
W
h i l
ed i
a r rh
e al i l l
n e s sp
o s e s at
h
r e at t
oi
nd
u str
i
al i
z ed
n at
i
o n s,p
a rt
i
c ul
a rl
y t
ot
h
ei m m
u n o c om
p
r om
i
s ed
p
op
ul
at
i
o n ,i
t
i
st
h
el
e ad i
ng
c a u s e of i l l
n e s s a nd d
e at
h i
nd
e v el
op
i
ng
n at
i
o n s(
M
i
nt
z et
al
.,1 9 9 5
)
.I
nt h
eU
ni
t
ed S
t
at
e s,t
h
em
aj
o ri
t
y
of w
ate r
b
om
e o ut
b
r e ak
s r e s ul
t
f
r om
t h
e u s e of
c o nt
am
i
n ate
d
,u n
tr e a
te
d w
at
e r o rto
i
n ad
eq
u at
et
r e at
m
e nt
(
C
oh
n
et
al
.,
1 9 9 9
)
.B
e c a u s em
u ch
of
t
h
ed
e v el
op i
ng
w
o rl
d
h
a sd
ef i
ci
e nt
w
at
e r a nd
s a ni
t
at
i
o n sy
st
em
s,th
e s e n at
i
o n s e xp
e ri
e n c eh i
g
h d
e at
h
r at
e s c a u s ed b
y
w
at
e rb
om
ed i
a r rh
e al
p
at
h
og
e n s.T
h
el
o ng
-t
e rm
s ol
ut
i
o nf
o rp
r e v e nt
i
o n of
w
at
e rb
om
ed i
s e a s e si
st
od
el i
v e rtr e a
te
d w
at
e r vi
a ap
i
p
ed di
str
i b
ut
i
o ns
y
st
em
,b
ut
s om
e c o u nt
ri
e sd
o n ot
h
a v et
h
e r e s o u r c e st
o s u st
ai
n s u ch
a sy
st
em
a nd
p
oi
nt
-o
f
-u s ed
i
si
nf
e ct
i
o ni
s a s ui
ta
b
l
e al
t
e r n at
i
v e.
M
i
ntz
et
al
.(
1 9 9 5
)
d
e s cri b
ed
t
h
ei
m
p
o rta n c e o
f
p
oi
n t
-of
-u s ed i
si
nf
e ct
i
o n a nd
s af
es
t
o r ag
e of d ri
nk i
ng
w
ate r
b
e c a u s e c o nt
am i
n at
i
o n c a n o c c u rb
ot
h
at t
h
e s o u r c e a nd d
uri
ng
w
at
e r sto r a
g
ei
nt
h
eh
om
e.I
n as
t
ud
y
c o nd
u ct
ed i
nB
ol i
vi
a,i
t w
a sd
et
e rm i
n ed
t
h
at
s u
b
j
e ct
sp
r o vi d
ed w i
t
h
sp
e ci
al w
at
e r sto r a
g
e v e s s el
s a nd
ch l
ori
n eh
ad
w
ate r
q
u al
i
t
y
m
e et
i
ng t
h
eW
o rl d
H
e al
t
h O
rg
a ni
z at i
o n 's
(
W
H
O
)
m
i
c r ob i
ol
og
i
c al
g
ui
d
el i
n e of l
e s st
h
a no n e
E
. c ol
t
c ol
o ny p
e r1 0
0 m
L
i
n9 3
%
of
t
h
e s am p l
e st
e st
ed
.In
t
h
ef
ol l
ow
-up
e v al
u at i
o nD
uri
ng t
h
e sub
s eq
uent
w
at
e r a n al y
s e s,6 0
%
of
t
h
e s am
p l
e sh
ad
n od
et
e ct
ab l
ef
e c al
c o
l
i
f
o rm
c ol
o ni
e s a nd 7 8
%
h
ad
n od
et
e ct
ab
l
eE
c ol i
c ol
o ni
e s(
Q
ui
ck
et
al
.,1 9 9
6
)
.H
ow
e v e r, s om
ew
at
e rb
om
ep
a r a si
t
e s a r e r e si
st
a nt t
o ch l
o rin e
d
i
sin
f
e ct
i
o n , n ot
ab l
y
C
ry p
t
o sp
o ri d i
um
sp
e ci
e s,w
h i
ch
a r et h
eth i
rd m
o st
c om m
o n e nt
e ri
cp
at h
og
e n sw
o rl
d w
i
d
e(
C
u r r e nt
a nd
G
a r cia
,1 9 9 1
) W
h i l
et
h
e af
o r em
e nti
o n ed
st
r ate
g y
i
sp
r o
m i
si
ng
,i
t w
o ul d b
eb
e n efi
cia
l
t
o s up p l y t h
e s e c om m
u ni
t
i
e s a nd
ot
h
e rd
ri
nk in
g
w
at
e r c o n s um
e r sw i
t
h
am
o r ee
f f
e ct
i
v e a nd
i
n e xp
e n si
v et
r e at
m
e nt
m
et h
od
ab l
et
oi
n a ct i
v at
e r e si
st
a nt
w
at
e rb
om
ep
a r a si t
e s.A
p
r a ct
i
c al
d
i
si
n
f
e ct i
o n al
t
e rn
at
iv e
f
o rdr
i
nk i
n
g
w
at
e ri
n r em
ot
e vi l l
ag
e s, a sw
el l
a sla r
g
e u rb
a n c om m
u ni
t
i
e s,h
a sb
e e nd
e si
g
n ed b
y t
h
eM
l O X
C
o rp
o r at
io n
(
A l b
uq
u e rq
u e,N
ew
M
e xi
c o)
, al
th
o ugh
t
h
e ch
em i
c al
c om
p
o sit
i
o n of
t
h i
sd is
in
fe c
t
a nt
s o
l
ut i
o nh
a sy
et t
ob
ed
et
e rm i
n ed
.T h i
st
e ch
n
olo
g y
u s e s a n e n e rg
y
s o u r c e a nd
a s od iu
m
c
h
l
o ri
d
e s al
t
s ol
ut
i
o nt
o el
e ct
r o ch
em
i
c al l y g
e n e r at
e am ix
t
u r e of
o xi
d
a nt
s.P
r e vi
o u sla
b
o r at
o ry
t
e st
sh
a v e sh
ow
nt
h
at
el
e ct
r o ch
em
i
c al l
y g
e n e r at
ed
o xi d
a nt
s(
E C G O
)
a r e c ap
ab le o
f i
n a ct
i
v at
i
ng C p
a r v um
o o cy
st
s, a sw
el l
a s ot
h
e r e nt
e ri
cm i
c r ob
e s,a
t
p
r a ct
i
c al
d
o s e s of
s e v e r al
m
g
/
L
.I
n a st
ud y b y V
e n z c el
et
al
.(
19
9 7
)
, a5
m
g / L
d
o s e of
E C G O i
np H 7
o xi d
a nt
d
em
a nd fr e e
(
O
D F
)
w
at
e r a nd
2 5
°C
r e s ul
t
ed i
nm
o r et
h
a n3
.5
l
og
i oi
n a ct
i
v at
i
o n of
C
p
a r v um
a nd
2
.7
lo
g
i oin a c
t
iv a
t
i
o n of
C
l
o st
ri
d
i
um p
e rf
ri
ng
e n ss
p
o r e s aft
e r4
h
o u r s.F
u rt
h
e rm
o r e,C
a st
e el
(
1 9 9
8
)
f
o u nd
2
.5
a nd 2
4 l
og
i oi
n a ct
i
v at
i
o n of
C
.p
a r v um
o o cy
st
s a nd
C p
e rf
ri
ng
e n s sp
o r e s, r e sp
e ct i
v el
y
,w
i
t
h
a7 m
g
/
L
d
o s e of
E
C G
O
in
p
H 8 O
D F
w
at
e r a nd
2 5
°C
aft
e r3 0
m
i
n ut
e s.R
e c e nt
l
y
,t
h
et
e ch
n ol
og y t
op
r od
u c eE C
G O h
a sb
e e nm
i
ni
at
u ri
z ed i
nth
ef
o rm
of
ap
o rt
ab
l
ep
e n .W
at
e rp
la c e
d i
nt h
e el
e ct
r od
e ch
am b
e ri
nt
h
ep
e n c om
e si
n c o nt
a ct
w
i
t
h
b
at t
ery
t
o el
e ct
rol
y
z et
h
eb
ri
n e a nd
g
e n erat
e o xi d
a nt
.T h
eg
e n erat
ed
o xi d
a nt
i
st
h
e n ad d
ed
t
ow
at
e rt
od isi
nf
ec
t
i
t
p
ri
o rt
o c o n s um p
t
i
o n .W
h i le
t
h
et
e chn
ol
og y
of
t
h i
sm in
i
at
u r ee