A B ST R A C T
Ka r e n Le e Ru st:Or al A d
m
inistratio n of Ars e nic : Expe ri me ntatio n andM
athematic alM
odel ingUnde r the d ire ction o f Do ug la s J Cr aw fo rd-Br own
T
h is
w
o rk d
e s c ri b
e s a n e x pe ri m
e ntal in v e s
ti g
ati
o n c a r rie
d
o ut tode
te rm in e
thel
e v el
of
upta
k
e of a r s e nic
in t he vi
tal
o rga n s a nd
tis s u e s ofm i
c e, a nd
a c om
pa rtm
e n tal m
od
eld
e v el
op
ed
to si m
ul
ate th
ed
ata ob
tain e
d f
r om
th
e e xpe rim
e nt. Du rin
g t
h
e e xpe ri m
e ntde s
i
gn ed
tod
ete rm in e
th
e ste ad
y-state wh
ol
eb
od
y
le v e
l
of
a r s e ni
ci
nm i
c e, te n B6 C 3
F1 m i
c ewe r e
d
o s ed d
ai l
yf
o r nin e
d
aysb
y o r al
ga v ag
ew i
th
r ad io a c
ti
v e s od iu
m
a r s e n atein
w
ate r at ac o n c e ntr atio n
l
e v el of 0
.5m g
of
A spe r
k
g of b
od
y wei gh
t. Th
e pr e-
d
o s e a nd
po st-
d
o s era
d i
o a cti
v e a r s e nic
le v e
ls
w e r em
e a s u r ed
a nd
r e c o rd
ed f
o r e a ch
a ni m
al d
ai l
y u si
ng a wh
ol
e-b
od y g
am m
a c o u nter . Th
e u ri
n e a nd f
ec e sw
e r e col l
e cted d
ai l y f
r om
e a ch
a ni m
al f
ol l
owin
g
the
p
o st-d
o s em
e a s u r e, a n
d
a n al
yz ed f
or r ad i
o a cti
v e a r s e nic
.A
t th
e e nd
of
the te nd
a yexpe r
i m
e nt,fi
v em i
c ew
e r e s a c ri fi
c ed
a nd
s el
e cted
vi
tal
o rga n s a nd
ti
s s u e s am
ple s
w
e reh
a r v e sted
a nd
te sted f
o r r ad i
o a cti
v e a r s e ni
c. Th
efi
v e r em
ain
in
g m i
c ew
e r em
o nit
o r ed f
orn
in e
ad d i
tio n a
l d
aysb
ef
o r e they w e r e s a c ri fi
c ed
a nd
th
e s am
e o rga n s a nd
tis s u e s a
m
pl
e sh
a r v e sted
a nd m
e a s u r ed
. T he a v e r ag
e n o rm
al iz ed
pe r c e nt of a r s e nic
(
ugA
s)
d istri b
uted i
nt
h
eh
a r v e sted
o rga n s of
a ni m
al
s6
th
r o ugh 10 w
e r e :0 0 57 % f
o rl i
v e r,0 0 2 6 % f
o rk i d
n ey
s,0
.0 0
3%
)f
o r th
el
u ng
s,0 6 7
5%)
f
o r th
e c a r c a s s, a nd 0
.2 1 5%)
f
o r th
e sk i
nU
sin
g
th
e s ee x
p
e ri m
e ntald
ata a nd
the pe r c e nt of c a rd i
a c o utput fo r the vital
o rga n s inm
ic e, am
u lti-c o
m
pa rtme ntal
P B PK m
od
el
w a sd
e v eloped
w ith th
eS
tel l
a Sof
tw a r eS y
stem
(
H PS
, 19 97)
T h
e c om p
u tati
o n al
pa rt of
th
em
od
el
c o n si
sts of
a s et of fi
r st o rd
e r equ atio n s t hat a r e afun ctio n of the a ss o ciated b lo od f lo
w
fo r e a ch com
partme nt. T he resu lting equatio n s are
s o
l
v ed
n um
e ri
c al l yw i
th
r e spe ct to ti m
e. Th
ism
od
el pr o vi d
e s c o n c e ntr atio n pr ed icti
o n s thata r e
w i
th i
n 1 5 pe r c e nt of
th
o s ef
r om
th
e e x pe ri m
e ntf
o rf
e c e s, u ri
n e, c a r c a s s, sk i
n , a nd
theA C
K
N O
W
L E D G E
M
E N
T
S
I
w
o uld l i k
e to th
a nk
Dr . Do ug
la sC
r aw f
o rd
-Br own
f
o rh i
s a s si
sta n c ew i
th
th
ed
e v el
op m
e nt of
theSt
el l
am
od
el
, a nd
th
e c om
pl
eti
on of
th is r epo rt. Iw
o ul d l i k
e to th
a nk
Dr
M
i
ch
a el
Hu gh
e sf
o r al l
ow i
n gm
e tow
o rk w i
th h i m du ri
ng th
e e xp
e ri m
e nt at th
eU
.S.
E P
A
, a ndf
o r h is a s sista n c ei
n ob
tai
ni
ng info rm
ati
o nf
o r th
is r epo rt. Iw
o ul d l i k
e to tha nkD
r.L
o ui
s e Bal l f
o rb
ei
ng
a r e ad
e r of
th i
s r ep
o rtI
w o ul d
al
s ol i k
e to tha nk D
r.M
ari
n aE
v an sf
o rh
e r a s si
sta n c ei
n ob
taini
ng
th
eb
lo od f l
owd
ata. I w o ul d l
i ke to th
a nk
the c om m i
tte e of
Dr. Do u
g l
a sC
r aw f
o rd
-B
r own
(
ad
vi
s o r)
. Dr . L o ui
s eB
al l
, a nd
D r.M
i
ch
a elH
ugh
e sf
o r th
ei
ra s s
i
sta n c ei
n th
e r e v isio n a nd
c om
pl
eti
o n of
th i
s r epo rt.T A B
L
E O F C O N
T E
N T S
Pa
g
eL I S T O F F I
G
U R ES
vi i
L I S T
O
F T A B L E S vi i i
C h
ap
te r1. Intr o
d
u ctio n 12. Pr e v
i
o u s Expe ri m
e ntal S
tud ie s
In v olv
i
ng
th
e D o sing
ofM
i
c e wi
th Ar s e ni
c 53. T he La
b
o r ato ry Expe ri m
e nt 83
1A
ni m
al
a nd
A r s e nic
S
ele c
ti
o n8
3
.2 Radi
o a cti
vi
tyM
e a s u r em
e nt8
3
.3
Expe ri m
e ntal
Proc edu r e
9
4
.A
n al y
si
s a nd Su
m m
a ry
of E
xp
eri m
ental
Data12
4.1 Expe r
i m
e ntal
Data R e vi
ew 1 24.2 Do s e
M
e a s u r em
e ntC
alc u
l
ati
o n 1 24.
3
Pe r c e nt of
A r s e ni
ci
nC
om
po n e nts14
5
M
od
el
De si
gn a nd D
e v el
opm
e nt 18
5
.1A
r s e nic
Di
strib
uti
o n 1 95.
2 C
om
pa r ativ e
D ata2 1
5
.3 C
o n c eptu al
M
od
el
Defi
ni
ti
o n2 3
5
.4 De s c ri
pti
o n of
M
od
elE q
u ati
o n s 2 55
.5
M
od
el V
a ri
ab l
es3 3
6
. Re s ul
ts3 4
8
.C
o n cl
u si
o n 43
9.
A
p pe nd ix
1: Dataf
r om
the Expe ri m
e ntO
r al l
y Ad m i
ni
ste ring
A r s e ni
c 46
M
i
c e A n l th
r o ug hA
n 1 01 0.
A
p pe nd i
x 2: Expe ri m
e ntal
D ataSu
m m
a ry Re s ul
tsf
r om O
r al l y
56
A dm i
ni
ste rin
g
A r s e ni
c toM
i
c eA
n l th
r o ug h A
n10
.T
A B
L
E O
F
C O N
T E
N T S
Page
1
2
. A p pe nd i
x 4: B lo od
F low fo rM
ic e fr om
Sta nd
a rd
sM
a n u al 6 113
.A p p
e nd i
x5
:G l
o s s a ry of
T e rm
s u s ed i
n th
eM
od
el
Di
agr am
6 2
1 4. A p pe n
d
ix 6: E qu atio n s ofM
od
el f
o r Or al D o sing ofM
ic e w ithA
r s e n ic 6 315.
A p p
e nd i
x 7: Tab l
e Re s ul
tsf
r om
th
eM
od
el f
o r th
eO
r al
6 6
A dm i
ni
str ati
o n of A
r s e ni
c1
6
.A
p pe nd i
x8
:C
om
pa ri
s o n of
M
od
el
a nd
Expe rim
e ntal
Data fo r7
2U
ri
n e a nd
Fe c e s1
7A
pp
e nd i
x9
:C
om
pa ri
s o n of
M
od
el
a nd
Exp
e ri m
e ntal
Datai
n7 9
Ta
b
u la r a nd G
r ap
hi
c al
Fo rm f
o r Ani m
al
s 1 th
r o ug h
51 8. Re
f
e r e n c e s 90
L I S T
O
F F I
G
U R
E
S
Pa
g
eF i gu r e 1. P
h
a rm
a c ok i
n eti
cM
od
el
Il l
u str ati
n g theM
o v em
e nt of
A r s e ni
c 18
T
h
r o ug h
th
e Bod
yF
i
gu r e 2.C
o n c ep
tu al
Di
agr am
of
th
eM
od
el f
o rO
r al
Do sin g of
M
ic e 23
w ith Ar s e nic
F
i g
u r e 3M
od
el
Re s ul
ts of A
r s e ni
c Pr e s e nti
n Fe c e s, Uri
n e,C
a r c a s s,3 6
Sk i
n, a nd
Li
v e rf
o rA
ni m
al
s6
th
r o ug h
10
F
i g
u r e 4M
od
el
Re s ul
ts of A
r s e ni
c Pr e s e nti
n B lad d
e r,K i d
n eys, Lu ngs,3
7a n
d
M
u s cl
ef
o rA
nim
als6
thr o ugh
1 0.F
i
gu r e 5.C
om
pa ri
s o n of
M
od
el
a nd
Expe ri m
e ntal D
ataf
o r th
eU
ri
n e a nd
38
Fe c e sf
o r A ni m
als6
th
r o ugh
10
F i g
u r e6
.M
od
el R
e s ults of A
r s e ni
c Pr e s e nti
n Fe c e s,U
ri
n e,C
a r c a s s, 40
Sk i
n , a nd
Li
v e rf
o rA
ni m
al
s1
th
r o ugh
5.F
i
gu r e 7.M
od
el
Re s ul
ts of A
r s e ni
c Pr e s e nti
n Bl
ad d
e r,K i d
n eys,L
u ng
s,4 1
L I
S
T O F T A B L E S
Page
Ta
b
le1
D
ai l
y Data Re ad i
ngsf
o r Ani m
al6
fr om
th
e Expe ri m
e ntO
r al l
y 10A d m i
ni
ste red A
r s e nic
.Ta
b
le 2.C
al
c ulatio n of
th
e Total
Do s eM
e a su r e of A
r s e nic
f
o rA
ni m
al 6
13
Ta
b l
e 3C
al
c ul
ati
o n of
the Pe r c e nt of
Ar s e ni
c Pr e s e ntin
C
om
po n e nt 15
Pa rts fr o
m
t he Bod
y of Ani m
al
6.Ta
b l
e4
.C
al
c ul
ati
o n of
theN
o rm
al i
z ed
Pe r c e nt of A
rse nic
Pr e s e ntin
16
C
om
po n e nt Pa rts fr om
th
eB
od
y of
Ani m
al6
.Ta
b l
e 5. Di f f
e r e nti
al
E qu atio n s
D efi
n ed b
y Vi
tal
Bod
y Pa rt to De scri b
e the20
D
is
tri b
utio n
a nd A b
s o rp ti
o n of A r s e ni
c.Ta
b
le 6. A v e r age N o rm
al iz e
d
Pe r c e nt of A r s e nic Ab
s o rb
ed a nd
Ex c r eted
2 2b
yA
n im
als 6 thr o ug h 1 0.Ta
b l
e7
M
od
el C
om p
a rtm
e nts a nd C
o r r e spo nd i
n gD i f fe r e n
tial
E qu ati
o n 25
De s c ri
p ti
o n .Ta
b l
e8
.C
om
pa ri
s o n of A,
i
n th
eD i
stri b
uti
o n Di f f
e r e nti
al
E qu ati
o n s a nd
3 1
t
h
eM
od
el
.Ta
b l
e9
V a ri
ab le
Inp
ut Pa r am
ete rSe
t tin
g
sf
o r th
eM
od
el
34
Ta
b l
e 10 Rati
oC
om
pa ri
s o n of
Pe r cent of A
r s e ni
cP
r e s e nt Betw
e e n3
5M
od
el Esti m
ate s a nd
th
e Expe ri m
e nt.I
nt
r od
u ct
i
o nAr s e nic is a n atu r a
l
l y o c c u r rin
g m
etal loi
d th
ath
a sb
e e n u s ed
fo rm
ed ic
in al pu rpo s e s,s u c
h
a s th
e tr e atm
e nt of
a c ute pr om
yel
o cy ti
cle u
k
em i
aw i
th
a r s e nic trio x
i d
e wh
e n othe rc o n v e nt io n a
l
tr e atm
e ntsl i k
e ch
em
othe r ap y a nd b
o n em
a r r ow tr a n sp la ntatio nf
ai l
(
Soi g
n et e ta
l
., 19
98
)
An othe ri l l
n e s s th
atm
ayb
e tr e ated
w ith
a n a r s e nic a
l
c om
po u nd
n am
ed
M
ela r s op
r ol
, is Af
ri
c a nSl
e epin
g si
ckn e s s
(
C
DC
P,O
nl i
n e)
How e v e r, th
e u s e of
a r s e nic
f
orany pu rpo s e
m
u stb
e pu r s u ed w it
h
c a utio n a si
ti
s now c o n si d
e r ed
tob
e ah
um
a n c a r ci
n oge n .Ar s e n
i
c o c c u r s n atu r al
l yi
n 4 v al
e n c efo r
m
s(
-3
,
0
, +3 a nd
+5)
. How
e v e r, o n
l
y tw
o of
th
e s ev a
l
e n c ef
o rm
s, a r s e n ate(
+5
)
a nd
a r s e ni
te(
+3
)
a r e of
c o n c e r nf
o r th is
d
o c um
e nt Af
te rp
e op l
ea r e e xpo s e
d
to a r s e n ate(
+ 5)
, th
e ch
em i
c al i
s r edu c e
d
to a r s e ni
te(
+3)
,w h i
ch m
ayb
em
eth y l
ated
tom
o n om
eth y l
a r s o ni
c a ci d
(
M M
A
)
a nd d i m
eth
yl
a r sin
i
c a ci d
(
D
M
A)
. Th
em
eth y l
ati
on of i
n o rg
a ni
c ar s e ni
c toM M
A
a nd
DM
A l
ow
e r s the a c ute to xic
i
ty
of
th
e a rs eni
c,a n
d m
o r e of
th
em
etab
ol i
z ed
a r s e ni
ci
s e x c r eted i
n th
e u rin e
.H
owe v e r, t
h i
s ch
a ngei
n a r s e ni
cm
ay v a ry am
o n g th
e popul
atio n a s fa cto r sl i k
eg
e n eti
c s,m
etab
ol i
sm
, a nd h
e al
th m
ay af f
e cth
ow
ap
e r son r e sp
o nd
s t o a r s e ni
c exp
os u r e(
Fed
e r al
Reg i
ste r,2 0 0 0
)
.T
h
e el
em
e nt a r s e nic o c c u r s n a
tu r al
l yi
n th
e e n vi
r o nm
e nt Fo r e x am p l
e, a r s e ni
c c a nb
ef
o u nd
n atu r al l
yi
n sh
al
e a nd
cl
ay s oi l
wh
ich u s u al l
yh
a s a c o n c e ntr atio n
of0
.3
to 4 9 0p
a rtspe r
m i l l i
o n(
Le v a nd
e r et al
., 1
9
7 7)
. Ad d
i tio n a
l l
y, s
m
al l am
o u nts of
a r s e ni
c a r e ge n e r al l
ypr e s e nt
in
wate r a nd f
o od
A l
th
o ugh
v a ryi
ng am
o u nts of
a r s e ni
c c a nb
ef
o u nd i
nw
ate rw h
e r ew
i
th i
nd
u striald
e v elopm
e nt. A r s e nic is u s ed
in c op pe r sm
el
t ing
,m
ining
, oil
r efi nin g a nd
ta n n
i
ng
(
Be nd
e rl
y, 19 9 3
)
, a nd i
ti
s ab
y-pr o
d
u ct of p
owe rp l
a ntsb
u r ni
ngf
o s si l f
u el
.Ho
w
e v e r, a r s e nic ind
ri
nk
ing
w
ate r is of gr e ate st c o n c e r nf
o r r eg
ul
ato r s a si
ti
s pr ob
ab l y
r e spo n s
i b l
ef
o rb
etw
e e n2
2 t o6 3 p
e r c e nt of
th
ei
n o rg
a ni
c a r s e ni
c e xpo s u r ei
n th
eU
ni
t ed
S
tate s(
U
.S. E P A , 19 9 8
)
. In a n eff
o rt to pr ote ct th
e pub l i
ch
e al
th
, th
eU
.S
. En vi
r o nm
e ntal
P
r ote cti
o nA
ge n cy(
U
.S
.E P A
)
e stab l i
sh
ed l i m i
tsf
o r th
em
a xi m
um
a c c ep tab l
el
e v el
of
c o nta
m i
n a nts,i
n cl
ud i
ng a r s e ni
c at5 0
ug /
L ,i
n th
eS
af
e Dri
nk i
ngW
ate rA
cti
n 19 7 5
, a nd
c o nt in u e s to e v alu ate t
h
e n e ed f
o r ch
a ng in g th isl i m i
t. In ad d i
ti
o n, th
eC l
e a nW
ate rA
ctc r
i
te ri
o n s et l im
its fo r th
ed i
s ch
a rg
e of a r s e ni
ci
nto s u rf
a c e-wate r at
0
.0
22
ug/
Li
n 1 98 0
,b
utl
ate r r e vi
s ed i
t to0
.0
18
ug
/L i
n 19 9 2
(
A b
em
ath
y et al
.,
2 0 0 0
)
. Th
e r e n ew
ed i
n te r e sti
n th
eto x
i
c ol
og
y of
a r s e n ic a nd
th
em
a xi m
um
le v el
th
at sh
o ul d b
e pe rm i
t ted i
nd
ri
nki
ng
wate rh
a sl
ed
to a ni
n c r e a s ed
n um b
e r of
s ci
e nti f
i c studi
e s. Ith
a sb
e e n e sti m
ated
th
at th
e a v e r age pe r s o nl i
vi
ng
in th
eU
n ited
State sh
a s a ni
ntak e of4 6
ug of
a r s e ni
c pe rd
ayw i
th
th
e gr e ate st s o u r c eb
ei
n gf
r om
wate r a nd
fo od
pr od
u cts(
U S
D H HS
, 1 9 9 3)
E p i d
em i
ol
og i
c al
stud i
e si
nd i
c ate th
at a r s e ni
ci
s a c ar ci
n og
e nf
or s om
e peop l
e wh
o a rep
r ed i
spo s ed
to th
e to xi
c ef f
e cts o f th
e el
em
e nt a nd l i
v ei
n a r e a s wh
e r eh i
gh l
e v el
s of
a rse ni
care
p
r e s e nti
nd
ri
nk i
ng w
ate r(
Ab
em
ath
y et al., 19 9
7)
.A
lth
o ugh
th
em
e ch
a ni
sm
of
acti
o nb
etw
e e n th
e to xi
c ef f
e cts of
a r s e ni
c a nd
r e s ul
ti
ngh
a rm f
ul h
e al
th
ef f
e ctsf
o rp
e opl
ei
s notk
n ow
n ,i
th
a s c a u s ed
a r e n ewed i
nte r e sti
n a r s e ni
c to xi
c ol
og y am
o n g s ci
e nti
sts a nd
g
ov e r nm
e nt r eg
ul
ato r s a nd
re sul
ted i
n ad d i
ti
o n al
e xpe ri m
e ntal i
n v e sti g
ati
o nw i
th
s e v e r al
spe c
i
e s of
lab
o r ato ry a ni m
al
s s u ch a sm i
c e, r ats, a nd h
am
ste r s. How
e v e r,
m
o st of th
ed
ocum
e nted
to xici
ty stud i
e sh
a v eb
e e n c o nd
u cted
u si
ng a c uted
o si
n g r ath
e r th
a n ch
r o ni
c o rl
o ng
-te rm d
o si
nl
i m
itsf
o r ap p l ic atio n sl i k
e s afed
rin
k i
ng w ate r(
N
em
e c et al
., 19 9 8
)
, si
n c ei
tdo e s n o
t r ef le c
tt
h
ek i
n etic s o
f
th
eG I
tr a ctw h
e r e th
e a r s e nic
is a
b
s o rb
ed i
nto th
eb l
o od f
o rm
o v em
e nt a nd
d i
stri b
uti
o n th
r o ugh
th
eb
od
y o r e x c re ted f
r om
th
eb
od
y af
te r c o nti
n u o u s a r s e nic e x
p
o s u r e.T
h
e am
o u nt of
a r s e ni
c c o n s um
ed i
nd
ri
nk in
gw
ate ri
s u s u al l
y v e r>l
ow , a nd
c o n s um
p ti
o nm
ay tak
e pl
a c e o v e r alo n
gp
e rio
d
of
ti m
e. Th
e r ef
o r e,
i
ti
si m
po rta nt toh
a v el
ab
o r ato ryr e s u
l
tsf
r om
e x pe ri m
e ntsm
o r ed
ir e ctl y
r el
e v a nt tolo n
g te rm i
ng
e sti
o n , a nd
tod
e v el
opm
athem
ati
c alm
od
el
s w h ich w i l
l pr o vi d
ed
ata to a s si
st ind
e ci
si
o n s r equi
r ed
in e stab l is
h i
ngpo
l ic
y r ega rd in
gm
a xi m
um
al l
ow
ab l
e c o ntam i
n a ntle v e
l
s.Re s e a r c
h i
n th
e a r e a of
th
e c a r ci
n oge ni
c ef f
e cts of
a r s e n ich
a sb
e e nh
am
pe r ed b
y th
ea v a
i l
ab i l i
ty of
pr ed ic
tiv e
a ni m
al m
od
els
. How
e v e r,
l
ab
o r ato ry e x pe ri m
e nts a nd
to xi
c olo
g ystu
d i
es a r eb
ein
g c a r ri
ed
o ut at th
eU
.S
. E PA
si
n c eC
o ng
r e s s r eq
u e sted
th
at n ewl i m i
tsf
o r th
ea
m
o u nt of
a r s e nic
p
e rm i
t ted i
nd
ri
nk in
g w ate rb
e s etb
y th
e ye a r2 0 0 0
(
A
c ute,O
nl i
n e)
.Si
n c et
h
ef
a ci l i
ti
e sf
o rm
a ny c om m
u ni
ty wate r sy
stem
sm
ay b
e af f
e cted b y
a n y r e vi
s ed
r eg
ula
tio n s
,r e s e a r c
h i
s n e c e s s a ry i
n o rd
e r tod
ete rm i
n e th
e n ewl i m i
ts(
K
ai
s e r,
19 9 8
)
Th
e US E
P Awo u
l d l i k
e to r edu c
e th
el
e v el
of
a r senic
p
e rm i
t ted i
nd
ri
nk in
gw
ate rf
r om
50 m i
c rog
r am
s pe rl ite r to a le v el n e a r z e r o, a n
d
in Ju n e of 2 0 0 0 pr opo s ed
al i m i
t of
5m
ic r ogr am
s pe r li
te r tob
ee
f f
e cti
v ei
n 2 00
1(
Fed
e r al
Reg i
ste r,
2 0 0 0
)
.R
e s e a r ch i
nto th
e ef f
e cts of
ad m i
ni
ste ri
n g a r seni
c o r al l
y tola
b
o r ato ry a ni m
al
sc o nt
i
n u e s. Th i
s pape rd
e s c ri b
e s a n e x pe ri m
e n tal
stud
y th
atw
a s c o nd
u cted i
n th
eExpe r
i m
e ntal
To xi
c olo
g y Di
vi
si
o n ,N
ati
o n al H
e al
th
a nd
En vir o n
m
e ntal
Ef f
e c tsR
e s e a r ch
L a
b
o r ato ry at th
eU S
. En vi
r o nm
e ntal
Pr ote cti
o nA g
e n cyi
n Re s e a r ch
T ria n
gl
e Pa rk
,
N
o rth
C
a r ol i
n adu r
in
g th
e s um m
e r of
19 9 9
. Th
ed
ataf
r om
th i
s e xpe ri m
e ntw
e r e u s ed f
o r th
em
od
elw
a s te sted b y r u n ning them
odel to obtain e stim
ate s o f a r s e nic c onc e ntr atio n inv a r
i
o u s o rga n s, ti
s s u e s a nd
e x c r eta, wh ic
h
w e r e th
e n c om
pa r ed w
ith
th
e c o r r e spo nd i
ng v al
u e sc a
lc u
l
ated f
r om
th
e e x pe ri m
e ntal d
ata. T h is pape rd
e s c ri b
e s th
e e x pe ri m
e ntal d
ata,f
itti
ng of
P
r e vi
o u sE
xp
e ri
m
e nt
al S
t
ud i
e sI
n v ol
vi
ng
t
h
eD
o si
ng
of
M
i
c ew i
t
h A
r s e ni
cT
h
ef
ol
low i
n g syn opsis of d
o c um
e nted
e xpe ri m
e ntal
r e s u lts sh
ow
s th
e v ol
um
e o fe x pe r
i m
e ntal i
n v e sti g
ati
o nb
ei
ng
c a r ri
ed
o uti
n v a ri
ou sl
ab
o r ato ri
e s toi d
e nti fy
th
e ef f
e cts of
a r s e n
i
ci
n th
eb
od y
Si
n c ei
ti
sp
r a cti
c al l
yi m
po s si b l
e to el i m i
n ate a r s e ni
c th
at o c c u r sn atu r a
l l
yi
n th
eb i
o sph
e r ef
r om
th
e e n vi
r o nm
e nt,i
ti
si m
po rta nt toi d
e nti f
yh
ow a r s e ni
caf fe cts the
b
od
y a nd t hem
in im
um
am
o u nt r equi
r ed
to af fe ct o n e's he al
th
. Fo r th is r e a s o n,i
ti
si m p
o rta nt tok
n owh
ow
a r s e ni
ci
sm
etab
ol i
z ed i
n th
eb
od
y,h
owf
a st th
eb
od
y el i m i
n atesi
t,h
ow m
u ch i
s ab
s o rb
ed i
n v a ri
o u s vi
tal
o rg
a n s, a nd
a ny to xi
c ef f
e cts th
atm
ay o c c u r. Th
ef
ol l
ow i
ng
s um m
a ryi d
e nti f
i e s th
r e e oth
e r e x pe ri m
e nts o ri
n v e sti
gati
o n s th
at we r e pe rf
o rm
ed
w
i
th m i
c e to a s si
sti
n a n sw
eri
ng
qu e sti
o n s r el
ated
toh
ow a r s e ni
cb
eh
a v e si
n th
eb
od y
.H
. J.S
a n ch
e z,C
. Pe r e z, a nd
R .D
. Pe r e z(
S
a n ch
e z et al
., 19 9
7)
i
n v e sti
gated
th
el
e v el
o
f
a r s e ni
cp
r e s e nti
nd i f f
e r e ntb
od
yf l
ui d
s a nd
o rg
a n s of m i
c e af
te r th
eyw
e r e gi
ven wate r ad
l i b i
tum
th
at c o ntai
n ed
10 0
ug/ m l
of
a r s e ni
c tri
o xi d
e(
A S 2O
3)
. Du ri
ng
th i
s e xp
e ri m
e nt, th
em i
c ew
e r e gi
v e n th
e w ate rf
o r ap
e ri
od
of
o n ew
e ek
.A
s a pa rt of
th i
si
n v e sti g
ati
o n, a n En e rg y D
i
spe r si
v e X -R
ay F
l
u o r e s c e n c e te ch
ni
qu ew
a s u s ed
tom
e a s u r e a nd
r e c o rd
th
epr e s e n c e o
f
a r s e ni
ci
n th
e a ni m
al
ti
s s u e T he a v e r age c o n c e ntr atio n of
a r s e ni
c wa s 3.9 ugA s
/
gf
o r th
el i
v e r, 2.9
ug A
s/ m l f
o r th
eb l
o od
, a nd
4 2 ug
As/m l f
o r th
e u ri
n e.T h i
s stud y i
su s e
f
ul i
nd
em
o n str ati
ng th
atm
o st of
th
e a r s e ni
ci
se x c r eted i
n th
e u ri
n e; a nd p
r o vi d
e spr o vi
d
e in fo rm
atio n o n the k in etic s of a r s e nicm
o v em
e nt in theb
od
y o r o n c o n c en tr atio n si
nthe ful l r a nge o f o rga n s a n
d
tis s u e s.M
. F.H
ug
he s, L
M
. Del
Ra z o, a n
d
E.M
K
e nyo n(
Hug h
e s et al
, 2 0 0 0
)
pe rfo rm
ed
a ne xpe r
i m
e ntal stud y w i
th B6 C
3 F 1m i
c e toi
n v e sti g
ate th
e ef fe cts of i
ntr a v e n o u sa
dm i
ni
str ati
o n of d i m
ethyl
a r si
ni
c a ci d
(
DM
A)
.S i
n c eD
M
A
o c c u r si
nw
ate r n atu r al l
y,i
tm
ayb
e e n c o u nte r ed i
n th
e e n vi
r o nm
e ntd
ai l
y. DM
A i
s al
s o th
e pr ed
om
in a ntm
etab
ol i
te of
i
n o rg
a ni
c a r s e ni
c e x c r eted i
n u ri
n eb
ym
o stm
am m
al
s.T h i
s stud
y sh
ow
ed
th
e r ew
e r e n om
eth
yl
ated
o rd
em
eth y lated
pr od
uc ts of
DM
A in theb l
o od
o r ti
s s u e e x am i
n ed d
u ri
ng
a n8
h
o u rm
o ni
to ri
n g pe ri
od
, a nd
th
at th
ed i
stri b
uti
o n a nd
r ete nti
o n of
DM
A i
n th
el
u ngs w a sd
o sed
ep
e nd
e nt. DM
A i
s a tum
o rp
r om
ote ri
n thel
u ng
, a n
d
th
ed
o sed
ep
e nd
e ntd i
stri b
uti
o n a nd
l
o ng
e r r ete nti
o n of
DM
A i
n the o rg
a nm
ay h
a v e a r ol
ei
n th i
s ef f
e ct(
Y am
a n ak
a et al
., 1
9 9 6
)
.T h is e xpe ri
m
e nti
si m
po rta nti
n th
at it r e v e als the r e a r ed
i f fe r e n c e s in the r e spo n s e of theb
od
y'sd i
stri b
uti
o n , up tak
e, a nd
ab
s o rpti
o n of
a r s e ni
c w he n the ch
em i
c al
s a r e ad m i
ni
ste r ed
ata
h i
gh l
e v el
of
c o n c e ntr ati
o n(
1
1 1m
g/ k
g v e r s e s 1 1 1m
g/k
g)
, a nd
th
at ab
s o rpti
o n at th
eh i
gh
e rl
e v el m
ayb
em
o r eh
a rm f
ul
top
a rts of
th
eb
od
y.In 19 9 9,
M
. F. Hug h
e s, E.M
.K
e nyo n, et al
.(
H
ugh
e s et al
, 19 9 9
)
p
e rf
o rm
ed
a study
w
i
th
thr e e str ai
n s of
c r o s s-i
nb
r ed m i
ce, B
6 C 3F l
/ C
rl B R
,C 57
B L / 6 N C
rl
Br, a nd
C 3 H / H
eN C
rl B R
to e x am i
n e th
ed i f f
e r e n c ei
n ab
s o rp ti
o n a nd
el i m i
n ati
o n of
a r s e ni
c.T h
er a
d i
ol
ab
el
ed
a r s e n ate o r a r s e ni
te wa s ad m i
ni
ste r ed
o r al l
y at tw
od i f f
e r e n td
o s el
e v el
s.D i f f
e r e n c e sw
e r e n oted i
n th
e wh
ol
eb
od
y r ete nti
o n of
r ad i
o a cti
vi
t yb
y th
e thr e e str ai
n s of
m i
c e aft
e r ad m i
ni
str ati
o n of
a r s e nate. Th i
s stud
y r e v e al
ed
that ap p
r o xi m
atel y 5 0
%
of
theh i g h do s e o f a r s e n ate wa s e x c r eted
i
n 5 ho u r sb
y the B6C 3 F 1
a nd
C 3 Hm i
c e, c om
pa r ed
to8
a r s e n ate r e s ulte
d i
n a ni
n c r e a s ei
n th
e am
o u nt of
a r s e ni
c ab
s o rb
ed i
n th
eb
od
y ti
s s u eN
ostr ain
d i f f
e r e n c e s w e r e ob
s e r v ed
wi
th
a r s e ni
te,b
ut wi
th i
n c r e a s ed d
o s e, t he cl
e a r a n c e of
a r s e n
i
c wa s sl
ow
e r a nd
th
e ti
s s u e r ete nti
o n of
a r s e ni
c wa sh i
gh
e r. How
e v e r, th
e stud
yc o n c lu
d
ed
th
e r ew
a s n o si
gni fi
c a ntd
i f fe r e n c ei
n th
ed
isp
o si
ti
o n of
a r s e ni
cb
etw
e e n th
e th
r e estr a
i
n s of m i
c e e x c eptf
o r the e x c r eti
o n tim
e of
5h
o u r s v e r s u s8 h
o u r s. Th
e r e s u lts fr om
th i
sstu
d
y a r ei m
po rta nt to th
e e xpe ri m
e nt a nd m
od
el d
is c u s s ed i
n th i
s pape r a s they sh
ow aT h
eL
ab
o r at
o ry E
xp
e ri
m
e nt
A ni
m
al a n d A r s e nic Sele ct io nT h
e e x pe ri m
e ntb
eg
a n wi
th
th
e s el
e c ti
o n of
te nf
em
al
em i
c e of
th
e str ai
nB 6 C
3 F 1f
rom
th
eC h
a rl
e sR i
v e r Lab
o r ato ri
e si
n Ralei
gh
,N
.C
. Th
e s em
ic ew
e r ei d
e nti fi
ed
a sA
ni m
al
s 1 th
r o ugh
10
(
A
nl
- A n 10
)
f
o r th
e e xpe ri m
e nt a nd h
ad
a n a v e r ag
eb
od
y wei
gh
t of
2 4
.7g
r am
s. Du ri
ng
th
is e xpe rim
e n t, th
em i
c ew
e r em
ai
ntain ed i
ni
nd i
vi d
u alm
etab
ol i
sm
c a
g
e s wi
th f
ood
a nd
tap w
ate rp
rovi d
ed
ad l i b i
tum
a cco rd i
ng
tog
ui d
el i
nes(
N
IH
,19 9 6
)
e sta
b
l ish
ed b
y theN
atio n al In stitute s of He alt
h. Th
e c aged
a ni m
alsw
e r ek
epti
n a r o om
w
h
e r e th
eh
um i d i
ty wa s5 0
+10
pe r c e nt, th
e tem
pe r atu r ew
a s2
2 + 1d
egr e eC
, a nd
th
el
i gh
tscyc
l
ed
o n(
l i
gh
t)
a nd
of f
(
d
a rk
n e s s)
e v e ry 12h
o u r s.A
s ap
a rt of
th
ep
r el i m i
n a ryp
r epa r ati
o nf
o r the e xpe ri m
e nt, thei
ni
tialb
od
yw
ei
g h t of
e a ch
a ni m
al
wa sm
e a s u r ed
a nd
r e c o rd
ed
.T h
e[
A
s]
a r s e nic
a ci d
, w a s ob
tai
n ed f
r om
L o sA l
am
o sN
ati
o n al L
ab
o r ato ry,L
o sA l
am
o s,N
.M
. a n
d
ch
eck
ed f
o r r ad i
o ch
em i
c al
pu rit
y(
>9 9 %
)
i
n th
el
ab
o r ato ryb y h i gh
p
e rf
o rm
a n c el i q
ui d
ch
r om
atog
r ap h
y(
H PL C
)
.T h
e ''^A
sw
asm i
x ed w i
th
a s ol
uti
o n of
sod i
um
a r s e n ate-
h
ep ta
h
yd
r ate(
F i
sh
e rC h
em i
c al
,F
ai
rL
aw n,N
.J
.)
i
nH P L C
-g
rad
e wate r. Th
efi
n al
c o n c e ntr at io n w a s
0
.20 8 m g /m
l s od i
um
a r s e n at eh
eptah yd
r ate a nd
8 uC i/ m l
^ ' A s.
R
ad io a ct ivityM
e a s u r em
e ntA
s a pa rt of
the expe rim
e nt pr epa r ati
o n , a s et ofp
r ed
efi
n ed
c al ib
r ati
o n step
sw
e r ewo u l d be a c c u r ate A ' ^ ^Ce sta nda rd
w
a s u s ed fo r a qu al ity c o ntr ol che ck of th
e Pa cka rd
In str u
m
e nts,M
e ri d
e n,C
T ,M
od
el
5 53 0 g
am m
a c o u nte r a nd C
a nb
e r r a,M
e ri d
e n,C
T,m
od
el
2
2 9 0
-S
sm
al l
a ni m
al
c o u nte r. Fo r t
h
e a ni m
al
c o u nte r sta nd
a rd
, tw o u
C i
of
^ ^
A
sw
e r ep l
a ced
in
to a s cin
ti l l
atio n
via
l
c o ntai
ni
ng 20 m l
of
wate r. T h is sta nd
a rd
wa sm
e a s u r ed
e a ch d
ay
b
efo r e th
ei
n str um
e nt w a s u s ed i
n the e xpe ri m
e nt s o a cti
vityd
ete cted i
n e a chm
o u s e c o ul db
ec o r r e cte
d f
ord
e c ay. For th
e gam m
a c o u nte r sta nd
a rd
, tw
o uC i of ''^A
sw
a s e v e nl y d ivid
ed
in
tofi
ve vi
al
s Th
e s e vi
al
sw
e r em
e a s u r ed
e a ch d
ay i
n th
eg
am
m
a c o u nte rb
ef
o r e th
ed
ai l y
s a
m p l
e s of
u ri
n e a nd f
ec esw
e r em
e a s u r ed
s o a cti
vi
ty i
n th
e sam p l
es c o ul d b
e c o r r e cted f
ord
e c ay.E
xpe rim
e n tal Pr o c edu r eT
h
e e xpe ri m
e ntal d
o sin
g a nd d
ata r e c o rd i
n gb
ega n o n Ju n e 2 2, 19 9 9
, a nd w
a sp
e rf
o rm
ed
s e ri
al l
yf
o r e ach
of
th
e te nm i
c e.F i
r st, e a ch m
o u s e w a s r em
o v ed fr o
m i
ts c ag
e.T
h
el
e v el
of
a r s e ni
c r ad i
o a cti
vi
t yw
a sd
ete rm i
n ed b y
wh
ole
-b
o
d
y gam m
a c o u nti
ng i
n aC
a nb
e r r a,
M
e ri d
e n ,C T
,m
od
el
22 9 0
-
S
sm
al l
a ni m
al
c o u nte r toi d
e nti f y
a nd
r eco r
d
th
e pr e-d
o s em
e a s u r e of
a r s e nicf
o r th
e a ni m
al
. T h is wa s a c c om
pl i
sh
ed b
y p la ci
ng th
em
o u s ei
n atu
b
e th
ati m m
ob i l i
z ed i
t, a nd
th
e n pl
a ci
n g th
e tub
ei
nto th
ew h
ol
eb
od y
c o u nte rf
o rm
e a s u r em
e nt,w h i
ch
r eq
uir e
d
tw
om in u
te s Bef
o r e th
em
o u s e w a s pl
a c ed i
n th
e tub
e, th
ecle a n, e
m p
ty
tub
ew
a s pla c e
d
into t
h
e c o u nte r a ndm
e a s u r ed
fo r o n em
in u tef
or ab
a ck
gr o u nd
m
e a s u r em
e nt.N
e xt, a
d
os e of 0
.5 m g A
s/k g
(
ap p
r o xi m
atel y
2 uC i
)
w
a s ad m i
ni
ste red
to th
em
o u s eb
y o r al
ga v age(
10 m
l/
k g)
, a nd
again th
em
o u s ew
a s p la c ed i
nto th
e wh
oleb
od
yc o u nte r
f
o r tw
om
in u te s tod
ete rm in e
a nd
r e c o rd
th
ep
o st-d
o s em
e a s u r eOn the
fi
r std
ay of the e xpe rim
e nt, data v alu e s fo r the pr e
-do s e
m
e a s u r e, fe c e s a nd
u r
i
n ew
e r e r e c o rd
ed
a s z e ro si
n c e n o a rs eni
c wa sp
r e s e ntf
r om
thep
r e vi
ou sd
ay .N
e x t, th
ei
nit
i
al d
o s e of
a rse ni
c w a s ad m i
ni
ste r ed
, a nd
th
el
e v el
of
r ad i
o a cti
vi
t yi
n them
o u s ew
a sm
e a s u r ed
a nd
r e c o rd
ed
a s the po st-d
o s e
m
e a s u r e.A f
te r ob
tai
ni
ng
thep
o st-
d
o s em
ea s u r e, t
h
em
o u s e w a s p la c ed i
n a cle a nm
etab
ol ism
c age s o u ri
n e a nd f
e c e s c o u ld b
e c ol l
e cted d
u ring
t
h
e next2 4 h
o u r pe ri
od
. In ad d it
i
o n, u ri
n e and f
e ce sf
r om
th
e c ag
ef
o r th
e pr e vi
o u sd
a y w a sc o
l l
e cted
, e x c ep tf
o r th
efi
r std
ay, a n al
yz ed
thatd
ay a nd
the am
o u nt of
r ad i
o a cti
v e a r s e ni
cwa s r e c o r
d
ed
top
r o vi d
ed
ataf
o r e a ch
a ni m
al.S
e e Tab l
e 1f
o r a n e x am
pl
e of
thed
ata s eto
b
tai
n ed f
o rA
ni m
al 6
. Fo r a r e vi
ew of
th
e s ed
ataf
o r al l
te n a ni m
al
s r efe r toA
p pe nd
ix 1.
T
h
em
etab
ol i
sm
c age sh
ad
a wi
r eb
ot tom
s o the e x c r eta c o ul d f
al l
thr o ug h
.U
nd
e r n e ath
th
ew ir e
b
ot tom
, th
e r e wa s af
u n n el to s epa r ate the u r in e a nd
th
ef
e c e s into c ups wh i
ch
we r eT a
b
le 1 D ail y
Data Re ad i
ngs fo r Ani m
al 6f
r om
the Expe ri m
e ntOr a
l l
y Ad m i
niste r ed
Ar s e ni
cDate Po st-D o s e
M
e a s u r em
e nt(
ugA
s)
P
r e-Do s e
M
e a s u r em
e nt(
ugA
s)
U
ri
n eM
e a s u r em
e n t(
ugA
s)
Fe c es
M
e a s u r em
e nt(
u gA
s)
6 /2 2 / 9 9
11
.3 6
0
.0
0
.0
0 0
6 /2 3 / 9 9
1 1
.3 7
0
.32 9 8
1 1
.28
1
.0 0 1
6/
24 / 9 9
1 1.0 5
0
.5185
10 4 7
1
.9 3 5
6 /
2 5/ 9 9
1
1.76
0
.54 6 3
9 9 5 7
3
.4
76
6/ 2 6 /
9 9 1 2.29
0
.5 5 2 5 1 0.5 1 16 70
6/ 2 7 / 9 9
1 2. 1 10 6 84 7
9
.4 17
2
.5 18
6 /
28/ 9 9
1 1.9 6
0
7 4 26
10.50 1.4 9 26/
29 / 9
96
/
30 / 9
97
/
1/ 9 9
1 2. 18
1
1.7 4
0
.0
0
8
6 8 80
.9
13 00
.9 34 7
1 0.2 0
10.
7
510
.7 5
1.5 7 0
2. 121
2
.12 1
c o
l l
e cted
e v e ry2
4h
o u r s.A d d i
ti
o n al l y, t
h
e u ri
n ew
a sk
ept c old b y
pl
a cin
g d
ryi
c e a r o u nd
theu rin e c o ntain e r
in
them
etab
ol ism
c age On c e the u rin e w a s c ol l
e cted
, itw
a sk
ept o nf
r o zenge
l
pa ck
s o r pl
a c ed i
n the r ef
ri g
e r ato r u nti l i
t c o ul d b
e a n al
yz ed i
n a Pa ck
a rd
In str um
e nts(
M
e ri d
e n, C T)
M
od
el 5 5
30
gam m
a c o u nte r.A ft
e r a n al
ysi
s, th
e u ri
n e a nd f
e c e s we r e pl
a ced
in
a -7 0°C fr e e z e r fo r sto r age. T h is pr o c e
d
u r ew
a s r epe ated dai l y fo r e a ch of the te nm
ic ef
r om Ju n e
2
2, 19 9 9
toJ
ul
y 1, 19 9 9
.A f
te r thel
a st pr e-d
o s em
e a s u r e o nJu
l
y 1' ^'
,
fi
v e of
th
em i
c e, a ni m
al
s6
thr o ugh
10
,we r e s a c r
i fi
c ed b
y c a rd
ia c pu n ctu r e u nd
e rC
0 2-in
d
u c ed
a n e sthe si
a. Fol low
ing s a c ri
fi
c e of
the a n
i m
al
s, th
eir
sk i
n(
w i
th h
ai
r)
, a th i gh m
u s cle
,l i
v e r,lu n
g
s a nd k i d
n eys we r e r em
o v ed
a nd
te sted
f
o r r ad io a c
tivi
tyi
n the gam m
a c o u nte r. Th
e r em
aini
ng c a r c a s sw
a sm
e a s u r ed
fo rr a
d io a c
ti
vity a nd
s a v ed f
o rfu r
the r te sting
. T he r em
aining
fi v em i
c e, a n i
m
als 1th
r o ug
h 5,we r e
m
o nit
o r ed
unti l Ju
l y 9
"^ to r e c o rd
the eq
ui
vale n
t of
thei
r r ad i
o a ctiv e
p
r e-d
os e
m
e a s u re,b
ut theyd i d
n ot r e c ei
v e a ny
ad d it
i
o n al d
osi
ng
.O
nJ
ul
y9
*
, a n
i
m
al
s1
th
roug h 5 w
e r esa c r
i fi
ced
, a nd
th
e s am
e o rg
a n s we r eh
a r v e sted
a nd m
e a s u r ed f
o r r ad i
o a cti
vit
y. Dataf
r om
the e xpe r
i m
e n t a r e pr o vi d
ed i
nA
p pe nd i
x 1, a nd A
p pe nd i
x 2 c o ntai
n s a s um m
a ry of
th
ed
ataA
n aly
si
s a nd S
um m
a ry
of E
xp
e ri
m
e nt
al D
at
aEx
p
e rim
e n tal DataR
e v iew
T
h
e r ad i
o a ctiv e a r s e n
ic c o n c e n
tr ati
o nd
ata c ol le cted d
u ri
ng
th
e e x pe ri m
e nt a nd
d is
pla
yed i
n A p pe nd i
x 1w
e r e s um m
a riz e
d
a nd
pr o c e s s ed
r el
ati
v e to th
ed
o s em
e a s u r em
e nt too
b
tai
n th
ep
er c e nt of
a r s e nic
pr e s e nti
n th
e u rin e
,f
e c e s, a nd
v a ri
o u sb
od
y pa rts tak
e nf
r om
th
em i
ce at s a c ri f
i c e, a nd
th
e s e pe r c e ntag
es we r e n o rm
al i
z ed
so th
e s um
of
th
ef
ra cti
o n s of
a r s e n
i
c pr e s e nti
n al l
o rg
a n s, ti
ssu e s, a nd
e x c r eta eq
u al
1 00 p
e r c e nt.T h is s e c
tio n
d
e s c ri b
e sh
ow
th
ed
ataf
r om A
pp
e nd i
x 1w
e r e s um m
a ri
z ed
a nd
a n al
yz ed
to u nd
e r sta nd
the uptak
e a nd
d is
p
o si
ti
o n of
a r s e nic
b
y v a rio u s
b
od
y c om
po n e nts, a s wel l
a s th
e am
o u nt e x c r eted fr
om
th
eb
od
y .A l
th
o ug
h
th
el
ab
o r ato ryd
atai d
e nti f
i ed
th
e am
o u nt of
r ad io a c
tiv e a r s e n
i
c pr e s e ntin
t
h
eh
a r v e sted b
od
yp
a rts, th
ep
er c e nt of
a r s e ni
c pres e ntin
ea ch
of
th
eb
od
y pa rts r ela
tiv
e tot
h
e am
o u nt ad m i
ni
ster ed
(
i
.e. th
e n o rm
al i
z ed
pe r centag
e)
i
s u s ef
ul f
or c om
pa ris o n
w i
th
m
od
el
e sti m
ate s a nd
oth
e r e x pe ri m
e ntal d
ata.D o s e
M
e a s u r em
e n tC
alc u lati
o nT
h
ed
ata s um m
a ryp
r o c edu r e
b
eg
a nb
y c al
c ul
ati
ng
th
e D o s eM
e a s u r e fo r e a ch
a ni m
al
w
h i
ch
c o n si
sted
of
tak i
ng
th
ed i f f
eren c eb
et wee n po st-d
o se a nd p
r e-d
o s e r e c o rd i
ng
s a nd
s u
m m i
ng thi
sd
i f fe r e n c e fo r th
edu r a
ti
o n of
th
e e xpe ri m
e nt a s sh
owni
n Tab l
e 2f
o r A ni m
al 6
.T
h i
s s um
of
th
ed i
ff
e r e n c e of d
ai ly po st-d
o s e a nd
pr e-