D
e v elo
p
m
e nt
of
aM
et
h
od
olo
g y
to
D
et
e rm in
et
h
eE f f
e ct o
f
I
nt
e rl
e uk in
-2
o n
t
he
M
i
t
o ch
on
d
ria
l
M
em
br
a
ne
P
ot
e nt
ia
l
o
f H
um
a nF ib
r ob l
a st
s a sM
e a s u r ed b y C
o
nfo
c a
l
M
ic r o
s
c op
y
B y
M
ar
i l y
n
J
.P
et t
e
ng i l l
(
U
n
d
e
rt
h
ed ir
e
ct
io n
of D
r .B
ra
d N
.C h
az
ot
t
e)
T h
e r e a r ek
n
ow
n
m i
t
o ch
o
nd
ri
al d is e a s e s
in
w h i
ch A T P p
r od
u ct
io n
is r e
d
u
c ed
,c a u s
in
g f
at
ig
u e an
d in a
b i l i
t
y
of
c el ls
t
o r e sp i
r e n o rm
al l y
.T h
e r e a r e al
s ok
n ow
n
in
h i b it
o r sa
n
d d
r
ug
st
ha
t
c an
in t
e rf
e r ew it
h
th
ep
ot
e nt
ia
l
of
m
i
t
o ch
o ndr
i
at
op
r od
u c eA T P
.Wh
e ns o
m
e of
t
h
e s ein
h i b i
to r s a r e a
p p
Ue
d
t
o c el l
sw h
o s em it
o ch
o nd
ria
l m
em b
r a n ep
ot
e nt
ia
l i
sb
e
in
g
m
e a s u r ed b
y
c on
f
oc
al m i
c r o s c op y
, a cha n
g
ei
nt
h
ef l
u or e
s ce n
ce
,i
nd ic
a t
iv e o
f
a
c
h
a ng
e
in
m i
t
o ch
o
nd
ria
l p
o
t
e
nt
i
a
l
c a
nbe
vie
w
ed
a nd q
u a nt
i fi
ed
.T
h
e u s e of
cy t
o
k i
n e s, su
ch
a sI
n
t
e rle
u
k i
n-
2 in
c a n ce
rt
h
e r ap
y
a nd
ot
h
e ri m
m
un
ot
h
e r ap
y
i
sk
n ow
nt
o c a u s efa
t
i g
u e, o v e r an
d
ab
o v et
h
ed i
s e a s eb
ei
ng
t
r eat
ed
.I
n
t
e rIe u
k i
n
-2 i
n
v ol
v em
e
nt
h
a s a
l
s ob
e e ni m p l i
c at
ed i
n s om
e chr o n
i
ci l l
n
e s s, of w h i
ch
f
at
ig
u
ep l
ay
s
am
aj
o r r ole
.B
y
ad d i
n
g I
nt
e rl
e uk i
n
-2
t
ol i
vin
g fi b
r ob la
s
t
sin
c ult
u r e, on
ec
a nd
e
t
er
m in e
i f
t
h is c
y t
ok in
eh
a sa n
i
m
p
a ct
o nm it
o ch
on
d
ri
al
p
ot
e nt
ia
l
a
nd
t
h
u
s ar e
d
u ct
io n
o rc
ha
n
g
e
in
A T P p
r
od
u c t
i
o n
.N
o rm
al h
um
a nfi b
r ob l
a st
sw
e r e c ult
u r ed
an
d
t
h
e
ir a
v
e r ag
e cy t
op l
a sm
ic a n
d
m
i
t
o ch
on
d
ri
al
m
em
b
r a n ep
ot
e nt
ia
l
s a nd
p
e r c e nt
a r e a sw
e r ed
et
e rm i
n
ed
u si
n
g
c o nf
o c al
m
i
c r o s co
p
y
w i
t
h
t
e
t
r am
et
h
y
l
rh
od
am
i
n em
et
h
y
l
e st
e r(
T
M
R
M )
a s afl
u o r e s c en t
p
r ob
e.T
M
R
M
is a c a
ti
o nic
d
y
e sp
e ci fi
cf
o rm
i
to c
h
o nd
ri
at
h
at
di
st
ri bu
t
e s a c c o rd i
ng
t
ot
h
eN
em
st
e
q
u at
io
n
.U
sii
^
s oft w
a r e c r e at
ed
at t
h
eU
niv e r s
i
t
y
o
f N
o rt
h C
a r ol in
a,C h
ap
el H i l l
,m
em b
r an
ep
ot
e nt
ia
l
s an
d
a r e a sw
e r e ca
lc u
l
a
t
ed
.T h
e s em
e a n sw
e r e a c c um
ula
te
d i
n
t
i
m
en
g /
m
l w
e r e ad d
ed
a nd
m
e a s u r ed in t
h
e s am
et
im
ei
nt
e r v als
, a sd
e s c ri b
ed f
o rt
h
e vmt
r e at
ed
f i br o
b l
as t
s.C C C P w
a s al
s o ad d
ed
t
oI
nt
er
le
uk i
n-
2 10 0
n
g / m l
s am
p l
e s.I d
e al l
y
,fo
l l
ow i
ng
on
e c el l
o v e rt
im
e sh
ou
l d
g
iv e
t
h
em
o st
a c c u r at
e r e su
l
t
s,h
ow
e v e r,f
ad in
g
of
th
efl
u o r e s c e nt
p
r ob
e aft
e rt
ak in
g
m
ult
i p l
eim
ag
e s of
t
h
e s am
e c el l is
n o
t
un
c om
m
o n.T h
e v a ri
ab i l i
t
y i
n n o rm
al f
ib
r ob l
a st
sw
a sg
r e at
en
o ug h
th
at
d
et
e rm i
n
at
io n
of
ch
a
ng
efr
om
t
he
ad d it
io n
of I
nt
e rle u
k in
-2 w
a sd i f fi
c ult
.
T hr e e
an
al
y
sis
m
et
h
od
sw
e r e c r e at
ed
to
o
v e r c om
et
h
ese
l i
m
it
at
io n
s
.M
eth
od
on
e a c c um
ula
t
ed d
at
afr
om
i m
ag
e s of
im
t
r e at
ed
a nd I L
-2
t
r e at
ed
n ew
c
e
l l
s.T h
ese
w
e
r eg
ro
up
ed i
nth
e
t
i
m
e c at
eg
o ri
e sl i
st
ed p
r e vio u s
l
y
.T h
e u nt
r
ea
t
ed
an
d
t
r e at
ed
m
e a n sw
e re
c al
cu
l
ate
d
an
d
c
om
p
a r ed
u si
n
g S
tu
d
en
t
's
T
-T
e st
.
M
et
h
od
t
w
oa c c u
m
ula
t
ed d
at
afr
om im
ag
e s of
u nt
r e at
ed
an
d
t
r e at
ed
n ew
c el l
sf
ol lo
w
ed b
y
on
es
u
b
s eq
u e nt
i
m
ag
e of
t
he
sa
m
ec
el l
.T h
e s ea
l
s ow
e r e a c c um
ula
t
ed b
y
m
e an
w it
h i
n t
im
ec a
t
eg
o ry
an
d d i
sp l
ay
ed
us
i
ng b
a r ch
a rt
s.T
h
efi
n
al
op
t
io n
w
a st
ofo
l l
ow
a sm
g
le
c el l
ov
e rt
im
e.A
n u n
t
r e at
ed
c el l w
a sm
at
ch
ed w it
h
at
r e at
ed
c el l
of l ik
e c el l
u
la r c
ha r a
c t
e ri
st
i
c s a nd
t
h
e ch
a ng
e ov
e rt
i
m
e c om
p
a r ed
.T h
e r e s ult
si
n
al l
th
r e em
et
h
od
si
n
d ic a
te
a
ch
an
g
ei
n
t
he
m
it
o c
h
o n
d
r
ia
l
m
e
m br a
n ep
ot
e nt
i
al
t
h
at
m
ay
b
e att
ri b
ut
ed
to
t
h
ep
r e s e n c e of
I
nt
e rl
e uk i
n-2
.
I
n ad d it
io n
,t
h
en
o rm
al
d
e c r e a se
i
nm
i
to c
h
o n
dr
i
a
l p
ote
n
t
ia
l d
u
et
oC C C P d
oe
s n ot
o c c u r a s r ap i d l y i
n t
h
ep
r e s e n c e of I
nt
e rle
u
k in
-2
A
ck
n ow l
ed
g
em
e nt
sI w
ou
l d l i k
et
ot
h
a nk D
r.L
ou
is e
M
.B
al l fo r
he r
p
a rt
i
n
a c c ep
t
in
g
m
e a s aG
r ad
u at
eSt
ud
e nt
i
n
t
he
S
ch
o ol
of P
ub l ic
H
e alt
h
,D
ep
a rt
m
e nt
of E
n
vir o n
m
e nt
al Sc
ie n c e s
a
n
d E
n
g i
n e e
rin
g
.I
am
e sp
e cia
l l
y
in
d
eb
t
ed
t
o
D
r .B
r ad C h
a z ot t
e of
t
h
eD
ep
a
rtm
en
t
of
C
el l B i
olo
g
y
an
d A
n at
om
y
,
Sc
h
o ol
of
M
ed ic
in
e,f
o r al l
ow in
g
m
et
op
u r su
em
y
r e s e a r ch
in
t
e
re s
t
s
w i
t
h i
n
h i
s
a r e a of
e xp
e rt
is e a
n
d
u nd
e rh i
sg
u
id
a n c
e.I
a
l
s ow i
sh
t
o ac
k
n o
w l
ed g
eb
ot
h Ja
y C h
am
b
e rla
in
a nd D
aw
nK
e a n e,
t
h
e r e s e a r ch
t
e ch
n
ic
i
a n sin
D
r.C h
a z ot
t
e' s
d
ep
a rt
m
e nt
,w h
op
r ov
id
ed h
el p
an
d
e n c o u r ag
em
e nt
w h
e ni
t
w
a s n e ed
ed
.M
y
ap p
r e cia
t
io n
a
ls o
g
o e st
oD
r.M
ic
h
a el S
y
m
on
si
n
t
h
eB i
o st
at
i
st
i
c sD
ep
a rtm
e n
t
f
o rh i
sk in
d
as
si
st
an
c e.I
c ou
l d
n
ot
h
av
e c om
p
le
t
ed
t
h is
w
o rk w i
t
h
ou
t
t
h
et
ot
al
su
p p
ort
of
m
y h
u
sb
an
d
,w h
ob
el i
e v e sin
m
e,w h i
ch m
ak
e sm
a ny
t
h i
n
g
sp
o s si b l
e.M
y
ch i ld
r e n,w h i l
en
ot
u n
d
e r st
an
d i
n
g
t
h
e n e ed f
o rm
et
op
u r su
e an
ad
v a n c ed d
eg
r e e,h
a v eb
e e np
at
ie
n
t
an
d
I
m
ay
A
c
k
n o
w le
d g
em
en
t
s
T
ab l
e of C
on
t
e nt
s . . .L i
st
of F i
g
u r e sL i
st
of T
ab l
e sL
I I
.n i
.I
n
t
r od
u
ct
i
on
S
t
at
em
e n t
of O b
j
e ct
i
v e s .L it
e r at
u r eR
e vi
ew
A
.M
i
t
o c
h
on
d
ri
a
A
.I
.O
v
e rv
ie
w
A
.2
.S
t
ru
ct
u r eA
.3
.F
im
ct
i
o nA
.4
.C h
e
m
i
o sm
ot
i
cT h
e o ry
A
.5
.M
em
b
r an
eP
ot
e nt
i
al
sA
.6
.I
nh i b i
t
o r s/ U
n
co
up l
e r sA
.6
.a.I
n
h i b i
t
o rs
A
.6
.b
.U
n
c ou
p l
e r sA
.7
.P h
a rm
a co
lo
g i
c al
a nd E
n
vi
r o nm
en
t
al
M
od i fi
e
r sA
.8
.D i
s e a s e a nd G
e n et
i
cD i
s
o rd
e r sB
.I m
m
u n eSy
st
em
B
.1
.O
v
e r vi
ew
B
.2
.C
y t
ok in
e sB
.2
.a.F
u n ct
i
o nB
.2
.b
.C
an c
e rT h
e ra
p y
B
.2
.b
.l
.E f f
e ct
s of I m
m
u n
ot
h
e r ap
y
. ..B
.2
.b
.2
.P
h
ot
o s e n sit
i
vit
y
B
.2
.C.C h
r o ni
cI l l
n e s si i i
i
vX
x
i
1
3
4
4
4
6
7
10
1
1
12
12
14
1 5
15
17
17
18
18
19
2
0
2 1
B
.3
.b
.M
e ch
a ni
sm
of A
ct
i
o nB
.3
.C.C
el l
ul
a rE f f
e ct
sC
.C
o nf
o c al
M
i
c r o s c op y
C
.1
.C
o n c ep t
sC
.2
.F l
u or e s c e
nt
P
r ob
e sC
.3
.L i
m
i
t
at
i
on
si
n
M
e
t
h
od
ol
og y
D
.C
el l C
u
l
t
ur
eD
.1
.C
o n c ep
t
sD
.2
.M
e
d i
a/ C
on
d i
t
i
o n
sD
.3
.H
um
a nF i b
r ob l
a st
sI V
.M
at
e ri
al
s an
d
M
et
h
od
sA
.O
ut
l i
n
e of E
xp
e ri
m
en
t
al
P
r ot
o
c ol
B
.C
el l C
ul
t
u r
e an
d T
e st
C h
em
i
c al
sB
.l
.C
el l C
u
l
t
u r eM
at
e ri
al
sB
.1
.a.D
ul b
ec
c o'
s
M
od i f
i ed E
ag l
e sM
ed i
u
m
B
.1
.b
.H
a nk
s'
B
al
an
c ed S
al
t
S
ol
ut
i
o nB
.l
.c.T
ry
p
si
n/ E D T A
B
.2
.C
e
l l
M
ai
n
t
en
a n c eB
.3
.C
el l
P
r ep
a r at
i
on
f
o rC
on
f
o c al
M
i
c r o s c op y
B
.4
.T
e st
C h
em i
c al
sB
.4
.a.I
nt
e rl
e uk i
n
-
2
B
.4
.b
.C
a
rb
o ny
l
cy
a ni d
ew
-c
h l
o r op h
e ny
lh
y
d
r a z o n e.(
C C C P
)
B
.4
.C.O l i g
om
y
ci
n
2 4
2 5
2 6
2 6
2 8
3 0
3 1
3
1
3 3
3 5
3 6
3 6
3 7
3 7
3 7
3 7
3
7
3 8
4 0
4 1
4 1
4 1
C
.C
o
nf
o c al
M
i
c r o s c op y
4 1
C
.1
.
P
r ep
a r at
i
o n of T
et
r am
et
h
y
k h
od
am i
n
em
et
h
y
l
e st
e r(
T
M
R
M
)
F
l
uo
r e s c en t
P
r ob
eS
ol
ut
i
o n s4 2
C
.2
.P
re
p
a r at
i
o no
f C
o ve
r sl i p C
o nt
a
i
n
i
ng F i b
r ob l
a st
sf
o rM
i
c r o s c op
eC h
am
b
e r . . . . ".
4 2
C
.3
.B
i
o-
R
a
d
M
R C
-6 0
0
C
o nf
o c al
M
i
c r o s c op
e
O
p
e r at
i
on
.4 3
C
.3
.a.S
t
a
rt
-
u
p P
r o c ed
u r e4 3
C
.3
.b
.I
m
ag
eA
cq
ui
si
t
i
o nP
r o c ed
u
r e4 3
C
.3
.C.A d d i
t
i
on
of T
e st
C h
em i
c al
s4 4
C
.3
,d
.Sh
ut
-
d
ow
n
P
r o c ed
u r e4 4
D
.I m
ag
eA
n al y
s
i
s4 4
D
.l
.L F I
M
A G E S
o
ft w
a r e44
D
.1
.a.D
et
e rm
i
n
eB
a ck g
r o un
d L
ev
el
s of I m
ag
e4 5
D
.l
.b
.H i
st
og
r am
C
el l
ul
a rA
r e a4
5
D
.2
.L
o ok
up
T
ab l
e s(
L
U T
)
4 5
D
.3
.C
o nf
o c al A
s si
st
an
t
S
o
ft w
a r e4 6
D
.3
.a
.P
r og
r am
I
n
i
t
i
at
i
on
4 6
D
.3
.b
.M
e
m b
r a n eP
ot
e nt
i
al P
s eu
d
o c ob
ri
n
g
4 6
E
.H i
s
t
og
r am
A
n al y
si
so
f
M
em b
r a n eP
ot
e nt
i
al I m
ag
e4 8
F
.S
t
at
i
st
i
c al A
n al
y
si
s4 9
G
.D
e s c rip
t
i
o n of E
xp
e ri
m
e nt
s5 0
G
.l
.C
o nd i
t
i
o n s5 0
G
.2
.D
e s c ri
p
t
i
on
of E
xp
e ri
m
e nt
al
M
et
h
od
s5 0
G
.3
.E
xp
e ri
m
e nt s t o
D
et
e rm i
n
eB
a s el i
n
eC h
a r ac
t
e ri
z at
i
o n of
U
nt
r e at
ed F i b
r ob l
a st
s5 1
G
.3
.a.M
e a nA
r e a s a nd A
v e r ag
eP
o
t
e nt
i
al
s5 1
G
.3
.b
.S
p
e ci
m
e nV
a r
i
ab i
l
i
t
y
5
2
G
.3
.b
.1
.V
a ri
at
i
on
B
et
w
ee n
S
am
p
l
e s .. .5 2
G
.3
.b
.3
.V
a ria
t
io
n
W
it
h in
C l
i am
b
e r s . . .G
.3
.C.T i
m
eD
ep
en
d
e
nc
eG
.3
.d
.E f fe c
t
s of L
a s e rL
i g h
t
on
F l
u o r e s c e n c eG
.3
.e.C
om
p
ei ri
s on
of D i f fe r e
n t
Z
o om
F
a ct
o r sG
.4
.C
o ntr o
l
sG
.4
.a.D
et
e rm i
n a
t
io n
of C
on
f
o c al A b i l i
t y t
oD
et
e ct
C h
an
g
e
in
M
it
o ch
o nd
ri
al
M
em
b
r a n eP
ot
e nt
ia
l
G
.4
.b
.D
ete r
m
in
at
io
n
of C C C P E f fe
c t
s on
M
i
t
o ch
o nd
ria
l
M
em
b
r an
eP
ot
e nt
ia
l
G
.4
.C.D
ete r
m i
n at
io n
of O l ig
om
y
ci
n
E f f
e ct
s o nM
it
oc
h
o
ndr
i
a
l
M
em
b
ra n e
P
ot
en
t
ia
l
G
.5
.D
et
e rm i
n
at
io n
of I
nt
e rle u
k i
n-2 E f fe c
t
s o nM
i
t
o ch
o nd
ria
l
M
em
b
ra
n eP
ote
n
t
ia
l
G
.5
.a.D
et
e rm i
n
at
io n
of I L
-
2
an
d C C C P E f fe c
t
s on
M
i
to
c
h
on
dr
i
al
M
em
b
r an
eP
ot
e
nt
ia
l
R
e su
lt
sA
.C ha
r a ct
e ri
z at
io n
of U
n
tr e
a
te
d H
um
an
F i br o
b la
st
sA
.1
.M
e a nP
e r c e nt A
r e a a nd A
v e r ag
eP
ot
e nt
ia
l
A
.2
.V
a ri
ab i l i
t y
A
.2
.a.B
et
w
e e n al l Sa
m
p
le s
A
.2
.b
.B
e
t
w
e e nC h
am b
e r sA
.2
.C.W
it
h in
I
n
d i
vi d
u
al C ha
m
b
e r sA
.3
.C h
a ng
e o v e rT
i m
eA
.4
.L
a s e rP h
ot
ob le a c
h i
n
g
A
.5
.C
om
p
a ri
s on
of
M
ic
r o s c op
eZ
o om
C h
an
g
e
sA
.6
.C
on
t
r ols
A
.6
.a.E
vi d
e n c e of C
o nf
o c al A b i l i
t
y
t
oD
et
e ct
C h
an
g
e sin
P
e r c e nt
A
r e a an
d A
v e r ag
eP
ot
e nt
ia
l
52
52
5 3
5 3
53
5 3
5 4
54
5
4
5 5
5 6
5 6
5 6
5
7
5 7
5 8
6 2
6 4
6 6
6 8
6 9
V I
.V I I
.V
I I
I
.I X
.X
.A
.6
.b
.E
vi d
e n
c e of C
o nf
o ca
l A b i l i
t y t
oD
et
e ct
C h
a ng
e
sC
a use
d b
y
C C C P
A
.6
.C.E
vi d
e
n c e of C
o nf
o c al A b i l i
t y
to
D
et
e ct
C h
an
g
e sC
au se
d by O l i g
om y
ci
nB
.I
nt
e rle u
k
in
-
2 E
f
f
e ct
s on
U
nt
r e ate
d H
u
m
a nF i b
r ob la s
t
sB
.l
.M
et
h
od 1
"N
ew C
el l
s
"B
.l
.a.U
n
t
re a
t
ed
v
sI
n
t
e rle
u
k in
-2
B
.l
.b
.2 4 H
ou
r sB
.l
.c.C C C P
B
.2
.M
e
t
h
od 2
"N
ew
-S
a
m
eC
el l
s"B
.2
.a
.U
n
t
re a
t
ed
v
sI
n
t
e
rle
uk i
n
-2
B
.2
.b
.2 4 H
ou
r sB
.2
.C.C C C P
B
.3
.M
et
h
od 3
"N
ew
-Sa
m
e o v e rT im
eC
el l
s"B
.S
.a.U
n
t
r ea
t
ed
v sI
n
t
e rle u
k in
-2
B
.3
.b
.2 4 H
o u r sB
.3
.C.C C C P
D i
s c u s sio n
A
.C h
a r a ct
e riz a
t
i
o n of U
nt
r e at
ed F i br o
b l
a st
sB
.I
n
t
e rle u
k in
-
2 E f f
ec t
s o nU
nt
r e at
ed
F
i br o
b l
a st
sC
.R
e vi
ew
of
M
et
h
od
olo
g y
C
on
clu
si
o n sF
ut
u r eR
e s e a r ch
R
ef
e r en c
e sA p p
en
d i
c e
sA
-C
I m
ag
e a nd
W
o rk
sh
e et
I
nf
o rm
at
io
n
A p
p
en
d i
x
A
E
xp
e rim
e nt
al
M
et
h
od
1
"N
ew
"F
i b
r ob la s
t
sA p p
en
d i
xB
E
x
p
e ri
m
en
t
al
M
et
h
od 2
"N
ew
-Sa
m
e"F i b
r ob l
a s
t
sA p p
en
d ix
C
E
x
p
er
im
e nt
al
M
e
t
h
od 3
"N
ew
-S
a
m
e
X T im
e s ". . .
70
7 1
7
2
7 2
7 2
7 4
7 5
7 7
7 7
7 9
8 0
8 1
8 1
8 5
8 7
8 8
8 9
9 1
9 4
9 6
9 8
9 9
1 1 1
1
1 1
1 16
D
-G
R
aw D
a
t
afr
om
E
x
p
e ri
m
en t
sA p p
e nd ix
D
E
xp
e ri
m
e nt
al
M
et
h
od 1
"N
ew
"F i b
r ob la s
t
s12 1
A p p
en
d ix
E
E
xp
e ri m
e nt
al
M
eth
od 2
"N
ew
-Sa
m
e"F i b
r ob l
a st
s12 7
A p p
en
d ix
F
E
x
p
e ri
m
e nt
al
M
et
h
od 3
"N
ew
-Sa
m
e
X T i
m
e s"13 0
A p
p
e nd ix
G
M
e a n s of
C
h
am
b
e r s1 3 4
3
-2
D
ia
g
r am
of
M
it
o ch
o nd
ria
l
S t
r u ctu r e
8
3
-3
P
i
ct
u r e of
M
i
t
o ch
o nd
ria
l C
el l
u
nd
e rF
l
u o r e s c e nt
M
ic r o s c o
p y
8
3
-4
D i
ag
ra
m
of
M
i
t
o ch
o nd
ria
l Si
t
e
s o
f I
nh i b i
t
io n
/ U
n c ou
p l i
ng
13
3
-5
D ia
g
r am
of C
on
f
o c al
M
i
c r o s c op
eO p
t
ic s
2 7
3
-6
T
et
r am
et
h
y
h h
od
am i
n
em
et
h
y
l
e st
e r(
T
M
R
M ) M
ol
e c ula r
St
r u ct
u r e ...2 9
4
-1
E
x am
p l
e of C
o nfo c a
l A
s si
st
an t
P
s e ud
o c olo
ri
n
g
of
F
i b
r ob l
a st
4
7
5
-1
P ic
tu
r e s of T yp i
c al V
ar
i
ab i l it
y i
n
H
u
m
an
F i br o
b l
a st
s5 9
5
-2
Sc a
t t
e r
p l
o
t
sR
ep
r e s en
t
in
g T
y
p i
c a
l V
a
ri
a
b i l i
t
y i
n
H
u
m
an
F i b
ro
b la st
s
..6 0
5
-3
H is
t
og
ra
m
F
r eq
u
e n cie s o
f N
ew H
um
an
F i br o
b l
a st
s6 1
5
-4
G
r a
p h
of C h
a ng
ei
n
A
r e a an
d
P
ot
en t
i
al
of
"N
ew
" c el l
s o v e rT
i
m
e6 4
5
-5
G
r ap h
of C h
a ng
ei
n
A
r e a an
d P
ot
en
t
i
al fr
om Ph
ot
ob le a c
h i
n
g
6 6
5
-6
P i
ct
u r e s of P h
ot
ob le a c
h i
n
g
6 7
5
-7
P i
c
t
u r e s of
M
i
c r o s c op
eO b
j
e ct
iv e
Z
o om C ha
n
g
e s6 8
5
-8a
P i
c
t
u r es o
f C
on
f
o c al A b i l i
t y t
oD
et
e ct
M
em
b
r an
eP
ot
en
t
ia
l I
n
c r e a s e .6 9
5
-8b
P i
ct
u r e s
o
f C
o
nf
o ca
l A b i l it
y
to
D
et
e c
t
M
e
m
b
r an
eP
ot
e nt
ia
l D
e c r ea
s e .6 9
5
-9
P ic
t
u re
s o
f F i b
r ob la s
t
aft
e rA d d it
io
n
of C C C P
70
5
-10
P ic
t
u r e s of F i b
r ob la s
t
aft
e rA d d it
io n
of O li g
om
y
ci
n
7 1
5
-1 1
L i
n e
G
r ap h
o
f C
o
m
p
a ris
o n s o
f
M
e a n s "M
et
h
od 1
"I
L
-2 E
xp
e ri
m
e nt
s ..7 3
5
-1 2
P
i
ct
u r e s of C
om
p
a ri
s o n of C C C
P
an
d C C C
P
/
I
L
-2 T
r e a
t
ed C
el l
s76
5
-13
B
ar
G
r a
p h
s of C
om
p
a ris o n
of
M
e
a n s "M
et
ho
d 2
"I L
-2 E
xp
e ri
m
e nt
s ..7 8
5
-14
B
a r
G
r ap h
s of
M
e a n s "M
et
h
od 2
"2 4 H
o u rE
xp
e ri
m
e nt
7 9
5
-15
B
a rG
r ap h
s of
M
e a n s "M
et
h
od 2
"C C C P E
xp
e ri
m
e nt
s80
5
-16
aG
r ap h
s of
P
e r c e nt
C ha
n
g
e "M
et
ho
d 3
"I L
-2 10
n
g /
m
l E
xp
e ri m
e nt
s .. .83
5
-16 b
G
r ap
h
so
f Pe r c e
n
t
C h
an
g
e "M
e
th
od 3
"I L
-2 10 0
ng /m l E
xp
e ri
m
en t
s ...8
4
5
-17
G
r
ap h
so
f P
e r c en
t
C h
a ng
e "M
e
th
o
d 3
"2 4 H
o u rE
xp
e ri
m
e nt
8 6
5
-18
G
r ap h
s of P
e r c en
t
C ha n
g
e"
M
e
th
od 3
"
L i
st
of T
ab le
s
4
-1
D
u
l b
e c c o s'sM
od i f i
e
d E
ag l
e sM
ed i
um
(
D
M
E
M )
I
ng
r ed i
en
ts
3 8
4
-2
M
em
b
r a
n
eP
o
te
n
t
ia
l P
s eu
d
oc
olo r
in
g
B i
n
s4 7
4
-3
P
r ep
a r at
i
o n of 24 H
o u rE
xp
e rim
en
t
5 5
5
-1
M
e
an
P
e r c e nt
A
r e aa
nd A
ve
r ag
e
P
ot
e
nti
a
l
"N
ew
"U
n
t
re a
t
ed F i b
r ob l
a
st
s5 6
5
-2
D
e
s c ri p
t
i
v eSt
a
t
is
t
i
c
s of V
a ria
b i l it
y
o
f
"N
e
w
"U
n
t
re a
t
e
d F i b
ro
b l
a s
t
s
. ..5 8
5
-3
D
e s c rip
t
i
v eSt
at
is
t
i
c s of V
a ria
b i l i
t y
B
et
w
e e nC h
am
b
e rs
5 8
5
-4
D
e s c ri p
t
i
v eSt
at
is
t
ic s o
f V
a ri
ab i l i
t
y
W
i
t
h i
n
C h
am
b
e r s6 2
5
-5
T
-T
e st
St
at
i
st
ic s
f
o r "N
ew
"U
nt
r e at
ed F i br o
b la s
t
sC h
an
g
eO
ve
rT i
m
e . . .6 5
5
-6
T
ab l
e
N
u
m
be
r of Sa
m
p l
e sM
eth
od 1 F i br o
b la s
t
s o v e rT im
e7 2
5
-7
T
-T
e s
t
St
at
i
st
ic s
f
o rM
et
ho
d 1 I L
-2 T
r e at
ed F i b
r ob la s
t
s o v e rT im
e
7 2
5
-8
T
ab le o
f N
um
b
e r o
f S
am
p l
e sM
et
ho
d 1 2 4 H
o u rE
xp
e rim
e
nt
74
5
-9
T
-T
e
st
St
at
i
st
ic s
M
et
ho
d
1 2 4 H
o
u rE
xp
e r
i
m
e n
t
7 4
5
-10
T
ab le
o
f N
u
m
b
e r of S
am p l
e sM
et
h
od 1 C C C P E
xp
e rim
e nt
s75
5
-1 1
T
-T
e s
t
St
ati
s t
ic s
M
et
ho
d 1 C C C P E
xp
e rim
e nt
s7 5
5
-12
T
a
b le
of N
um
b
e rSa
m p l
e sM
et
h
od 2 F i b
r ob la s
t
sO
v e rT
i
m
e77
5
-13
aT
ab le
St
a rt
m
g
C h
a r a ct
e ris
t
i
c sM
et
h
od 3 I L
-2 1 0
ng
/
m
l E
xp
e rim
e nt
s82
5
-13 b
T
ab le
St
a rt
in
g C h
a r a ct
e ri
st
i
c sM
et
h
od 3 I L
-2
1
0 0
ng
/ m l
E
xp
e ri m
en t s
. . .82
5
-14
T
a
b le
St
a
rt
i
n
g C h
a r a ct
e ris
t
i
c sM
et
h
od 3 2 4 H
o u rE
xp
e rim
en
t
8 5
5
-15
T
T h
r e e u n r el
a t
ed
s ci
en
t
i f i
cd
e v el
op
m
e nt s
h
a ve
o c cu
r r ed i
n
t
h
ep
a
st t
w
e nt y
-fi
v ey
e a r st
h
at
p
r om p
t t
h
et
y p
e of
e xp
e ri
m
e nt
al w
o rk d
e s c rib
ed i
n t
hi
st
e ch
n
i
c al
r ep
o rt
.T
h
e ad
v an
c em
en t
of
t
h
ef i
el d
of I m
m
u n
olo
g
y h
as
p
r ov
i d
ed
t
h
ek
n
ow l
ed
g
et
h
a t
i m
m
u n oc
h
em
ic a
ls a r
e
p
r od
u c ed b y
t
h
ew hi
t
eb l
o od
c el l
sin
r e sp
on
s et
oi
m m
un
es
t
i
m
ul
at
i
o
n.T h
e s e ch
em i
c al
s, c ol le c
t
i
v el
y
k
n
ow
n
a s cy t
ok i
n e s, a r el ik
e n ed
t
oh
o rm
o n e si
n
b
ot
h
t
h
ei
r r e c ep
t
o
r st
r u ct
u
re
an
d
fo
n
ct
io
n
i
n
g
, an
d
t
he
ir
ab i l i
t y t
o
p
ro
d
u
c e r e a ct
i
o
n sf
a rfr
o
m
t
h
e
i
r s
i
t
eo
f p
r od
uc
t
i
on
i
n
t
h
e
b
o
d y
.W
e
l l
o v e ro n
eh
un
d
re
d d i f f
e r e nt
c
y t
ok i
n e
sh
a
v eb
e e
nd is c o v e r e
d
an
d
t
h
e
m
aj
o ri
t
y
o
f
t
h
em
re
m
a
i
n
p
o or
l y
u nd
e
r st
o o
d
.T h
e cy
t
ok i
n
ei
n
o u r st
u
d y
,I
nt
e rl
e uk i
n
-2
,
i
sk
n
ow
nt
o c a u s e a ct
i
v at
i
on
a nd
p
r oli f
e r at
i
on
of w h i
t
eb lo o
d
c el l
s(
sp
e ci f i
c al l
y
,T
-c e
l l
s)
,
i
n
r e sp
o n s et
o a ni m
m
u n e a s s a ul
t
.I
t
ha s a
l
s ob
e e nd is c o v e r e
d
t
oh
a v e s om
e an
t
i
-c a
n
c e r ef f
e ct
s.I
t
s'
m
e ch
a ni
sm
of
op
e r at
io n
a
n
d i
n
t
e rn
al
m
et
h
od
of
c el l
ula r
s
i
g
n al i
n
g
t
ot
h
e n u cle
u
si
sn
ot
u nd
e r st
o
od
at
al l
.I
t
i
sk
n
ow
n t
oh
a v e a c el l
s u rfa c e r e c e
p
t
o rt
h
at
is e x
p
r e s s ed
at
t
h
et
i
m
e of
a nt
i
g
e n r e c og
ni
t
i
on
a n
d i
t
is s u
s
p
e ct
ed
t
ha
t t
hi
s r e c ep
t
o r c om p l
e xm
ay b
ei
n
t
e
r na
l i
z ed
a nd
a
ct
i
va
t
e ap h
o s
p h
o ry
l
a
t
io
n
p
a
t
h w
a
y
.T h
e se
sp
ec
ul
at
i
on
s st
i l l
r eq
uir e
m
o r e r e s e a r ch
.Wh
e na
d
m
i
n
i
s
t
e
r ed i
n
ch
e
m
ot
h
e
r ap
y t
ria
l
s,I
n t
e rl
e
uk i
n
-
2 i
s
k
n
ow
nt
o c au
se
e x
t
re
m
ef
at
i
g
u e a nd w
e ak
n
e s s.I
t
h
a sa
l
s ob
e en
f
o un
d i
n
abn o r
m
al
am
o im
t
sin
v a rio u s
c
h
r on
ic
i l l
n
e s ss
t
at e
s.T h
e c on
d i
t
i
o no
f f
at
i g
u ei
s al
s
o c om m
o nin
d i
s o rd
e r si
n
v ol
vi
n
g
m
i
t
o ch
o ndr
ia
l d
y
sf
u
n ct
i
on
.T h
e si
t
e of m i
t
o cho n
d
ria
l A T P
(
ad
e n o sin e
t
ri
p
h
o sp
h
at
e)
p
r od
u ct
io n
is c r
i
t
i
c al
t
o n o rm
al fu n c
t
i
o ni
n
g i
n
l i
vin
g
o rg
an
is
m
s.T h
el i
st
of m i
t
o cho n
d
ria
l
d
ef
e
ct
si
m
p l i
c at
ed i
n
va
rio u s
i l l
n
e s se s
h
a sg
r ow
n
t
o o ve
r o ne
h
un
dr e
d
s
in c e
t
h
ef ir
s
t
f i
n
d i
n
g
of
"L
uf l
"d is e a s e
in
t
h
e19 6 0
'
s.
W
h i le
t
h
em
e ch
a nis
m
of
m
i
t
oc
ho n
d
ri
al fi
m
ct
io n
i
sn
ow fe ir
l
y
w
el l
u
nd
e r st
o od
,t
h
e re
h
a sb
e e nl i
t t
l
e r e s e a rc
h d
o n e o nt
h
e ef f
e ct
s of
c
y
t
o
k i
n
es
o nm i
t
oc
h
on
d
ri
al fi
m
ct
io
n
.N
o rm
al fi
m
ct
io
n
m g
m
i
t
o ch
o nd
r
i
a a r e ab le
t
og
e n e r a
t
e
A T P
,o u r e n
er
g y
c u r r e n c
y
,b y
m
a
i
n
t
a
i
n
i
ng
a
t
y p
e o
f
el
e
ct
r oc
h
em i
c a
l g
r ad i
e n
t
t
h
a
t
i
n
t
u r np
r o vi d
e s
t
h
e en
e rg
y t
o
c r e at
eA T P fr
om A D P
(
ad
e n o si
n
ed ip h
os
p
h
a t
e)
.T hi
sd
e at
h
si
n c et
h
e c el l h
a s n oA T P w i
t
h w h i
ch
t
o c o nt
i
n
u eit
sm
ai
nt
e n a n c e of l i f
e.A d
v a n c e si
n t
h
efi
el d
of m i
c r o s c op y
h
a v ep
r o vi d
ed
t
h
e ab i l i
t
y t
o vi
ew l i
vin
g
c el l
sa
n
d
m
o r e sp
e ci fi
c al l
y
,t
h
ei
rm i
t
o ch
o nd
ri
a.F l
u o r e s c en t
d
y
e sh
a v eb
e e nm
an
uf
a ct
u r ed
w h i
ch w i l l
a c c um
ul
at
ei
nt
h
em i
t
o ch
on
d
ri
al
a r ea
s c r ea t
ed b y
t
h
ei
r el
e ct
r o ch
em i
c al
g
r ad i
en t
.T h
e s efl
u o r e s c en t
a r e a s c a nb
ei m
ag
ed w it
h
a c on
f
o c al
m
i
c r o s c op
e,w h i
ch h
a sth
e ab i l it
y
t
o vi
ew
a c r o s s- s e ct
i
on
of
al i
vin
g
ce
l l
a nd
st
o r et
hi
si
m
ag
ein
c om
p
ut
e rf
o rm
at
.C
om
p
ut
e rp
r og
ra
m
s
ex
i
st
w h i
ch
c a n c al
cu
l
at
et
h
ei
nt
e n sit
y
o
f fl
u o r e s c en
c ea
nd d
et
e rm i
n em
em b
r a n ep
ot
e nt
i
al
s a nd p
e r c e nt
of
t
h
e a r e a of
t
h
e c el l
t
h
at
i
s c o n si d
e r ed
t
ob
ea t
c