1 Frasco para muestra de agua.
a.- Lavar y secar perfectamente un frasco de boca ancha de 500 ml con tapa.
b.- Si la muestra proviene de agua que no ha sido clorada esterilizar el frasco en estufa a 170º C, por una hora o a 121º C durante 15 min.
c.- Si la muestra de agua posee cloro residual los frascos se deben esterilizar en estufa a 170º C, por una hora o en autoclave a 120º C durante 15 min, los cuales deben contener 0.1 ml de tiosulfato de sodio al 3% por cada 125 ml de capacidad de los mismos.
d.- Cubrir la tapa la boca del frasco con papel Kraft y asegurando con una liga. e.- Esterilizar por medio de calor húmedo a 121ºC durante 15 minutos.
f.- Después de esterilizar, dejar enfriar y colocarlo en una bolsa de plástico nueva
g.- Para muestrear hielo, traer una bolsa si es posible, en caso de no utilizar frascos de vidrio de boca ancha de 500 a 1000 ml de capacidad.
2. Muestreo
2.1.- En bomba de mano o grifo del sistema de distribución.
a.- El agua de los grifos debe provenir directamente del sistema de distribución. No debe efectuarse toma de muestra en grifos que presenten fugas entre el tambor y el cuello, ya que el agua puede correr por la parte exterior del grifo y contaminar la muestra. Deben removerse los accesorios o aditamentos externos como mangueras, boquillas y filtros de plástico o hule antes de tomar la muestra.
b.- Debe limpiarse el orificio de salida con una torunda de algodón impregnada de solución de hipoclorito de sodio con una concentración de 100 mg/l.
c.- Debe dejarse correr el agua aproximadamente 3 min o hasta asegurarse que el agua que contenían las tuberías ha sido vaciada totalmente.
d.- Cerca del orificio de salida, deben quitarse simultáneamente el tapón del frasco y el papel de protección, manejándolos como unidad, evitando que se contaminen el tapón, o el papel de protección, o el cuello del frasco. e.- Debe mantenerse el tapón hacia abajo para evitar contaminación y procederse a tomar la muestra sin pérdida de tiempo y sin enjuagar el frasco; se debe dejar el espacio libre requerido para la agitación de la muestra previa al análisis (aproximadamente 10% de volumen del frasco). Efectuada la toma de muestra, deben colocarse el tapón y el papel de protección al frasco.
2.2.- En captación de un cuerpo de agua superficial o tanque de almacenamiento.
a.- Deben lavarse manos y antebrazos con agua y jabón,
b.- Debe quitarse el papel de protección evitando que se contamine, y
c.- Sumergir el frasco en el agua con el cuello hacia abajo hasta una profundidad de 15 a 30 cm, abrir y enderezar a continuación con el cuello hacia arriba (en todos los casos debe evitarse tomar la muestra de la capa superficial o del fondo, donde puede haber nata o sedimento y en el caso de captación en cuerpos de agua superficiales, no deben tomarse muestras muy próximas a la orilla o muy distantes del punto de extracción); si existe corriente en el cuerpo de agua, la toma de muestra debe efectuarse con la boca del frasco en contracorriente. Efectuada la toma de muestra debe colocarse el tapón, sacar el frasco del agua y colocar el papel de protección.
d.- En el caso de tanques de almacenamiento, si no es posible la toma de muestra como se indica en este punto, debe procederse como se menciona a continuación.
2.3.- En pozo profundo.
a.- Si el pozo cuenta con grifo para toma de muestra, debe procederse como en inciso b del 4.2.1
b.- Si el pozo no cuenta con grifo para toma de muestra, debe abrirse la válvula de una tubería de desfogue, dejarse correr el agua por un mínimo de 3 min. y a continuación se procede como en el oinciso d y e del 4.2.1
2.4 En pozo somero o fuente similar.
a.- Cuando no es posible tomar la muestra con la extensión del brazo, debe atarse al frasco un sobrepeso usando el extremo de un cordel limpio.
b.- Deben quitarse simultáneamente el tapón y el papel de protección, manejándolos como unidad, evitando que se contaminen el tapón, o el papel de protección, o el cuello del frasco.
c.- Debe mantenerse el cuello del frasco hacia abajo y se procede a tomar la muestra, bajando el frasco dentro del pozo, y desenrollando el cordel lentamente, evitando que el frasco toque las paredes del pozo.
d.- Efectuada la toma de muestra, deben colocarse el tapón y el papel de protección al frasco.
Si el tiempo de llegada es largo la muestra debe colocarse en hielera con bolsas refrigerantes o bolsas de hielo para su transporte al laboratorio, de preferencia a una temperatura entre los 4 y 10ºC, cuidando de no congelar las muestras, el periodo máximo que debe transcurrir entre la toma de muestra y el análisis microbiológico es de 6 horas.
2.6 Identificación y Control de Muestras
Para la identificación de las muestras deben etiquetarse los frascos y envases con la siguiente información: a.- Número de registro para identificar la muestra.
b.- Fecha y hora de muestreo.
c.- Identificación del punto o sito de muestreo d.- Temperatura ambiente y temperatura del agua e.- pH
f.- Cloro residual si es posible. g.- Tipo de análisis a efectuar
Tomado de: NORMA OFICIAL MEXICANA. NOM-014-SSA1-1993 "Procedimientos sanitarios para el muestreo de agua para uso y consumo humano en sistemas de abastecimiento de agua públicos y privados
DETERMINACIÓN DE ORGANISMOS MESOFÍLICOS AEROBIOS EN ALIMENTOS.
Las bacterias mesofílicas aerobias son las que crecen a 35 ± 2°C, de 24 a 48 ± 2 horas, en agar cuenta estándar o en agar triptona extracto de levadura, este grupo esta formado por cocos o bacilos Gram positivos, Gram negativos, así como un amplio grupo de especies como: cromógenos, proteolíticos, fermentativos, lipolíticos, psicrotróficos, patógenos, saprofitos, etcétera.
En muchos alimentos este grupo de microorganismos arroja los máximos recuentos, aunque dependiendo de la naturaleza de los ingredientes, así como de las condiciones higiénicas en las que se prepararon y conservaron los alimentos se puede predecir la vida de anaquel.
También llamadas bacterias indicadoras ya que se utilizan como indicadores de la calidad sanitaria, del valor nutricional de alimentos perecederos, del agua potable, equipo y otros productos, así como indicadores de la posible presencia de microorganismos patógenos.
Cuando se requiere investigar el contenido de microorganismos viables en un alimento, la técnica comúnmente utilizada es la cuenta por vaciado en placa, donde la técnica ni pretende poner en evidencia a todos los microorganismos, pues tenemos una variedad de especies y tipos diferenciables por sus necesidades nutricionales, temperatura requerida para su crecimiento, oxígeno disponible, etc., hacen que el número de colonias contadas constituyan una estimación de la cifra realmente presente y la misma refleja si el manejo sanitario del producto ha sido el adecuado.
PROCEDIMIENTO
1.- Pesar 10 g del alimento en condiciones de esterilidad y tratarla como indica la NOM-110-SSA1–1994, Bienes y servicios. Preparación y dilución de muestras de alimentos para su análisis microbiológico.
2.- Realizar diluciones hasta 10-4 en frascos que contengan 90 mL del diluyente.
3.- Colocar 1 mL de la dilución que le indiquen en una caja de Petri y realizar el procedimiento por duplicado. 4.- Agregar de 15 a 20 ml de agar cuenta estándar, mantenido a 45°C.
5.- Homogenizar mediante 6 movimientos de derecha a izquierda, 6 en el sentido de las manecillas del reloj, 6 en el sentido contrario y 6 de atrás a adelante, sobre una superficie lisa y horizontal hasta lograr una completa incorporación del inoculo en el medio, cuidar que el medio no moje la cubierta de la caja.
6.- El tiempo transcurrido desde el momento en que la muestra se incorpora al diluyente hasta que finalmente se adiciona el medio de cultivo a las cajas, no debe exceder de 20 minutos.
7.- Dejar solidificar el medio e incubar a 35 °C por 24 horas o si es necesario hasta las 48 horas. 8.- Colocar una Placa de Petri como testigo de esterilidad del medio
9.- Después de la incubación, contar las placas que se encuentren en el intervalo de 25 a 250 colonias, usando el contador de colonias. Las placas de al menos una de tres diluciones deben estar en el intervalo de 25 a 250. Para los casos no contemplados seguir las recomendaciones de la NOM 092
Después de contabilizar las colonias en las placas seleccionadas, multiplicar por la inversa de la dilución para obtener el número de UFC por mililitro o gramo de la muestra Redondear la cifra obtenida en la cuenta de manera que sólo aparezcan dos dígitos significativos al inicio de esta cifra. Para redondear, elevar el segundo dígito al número inmediato superior cuando el tercer dígito de la derecha sea cinco o mayor (por ejemplo 128 redondear a 130). Si el tercer dígito es cuatro o menos, reemplazar el tercer dígito con cero y el segundo dígito mantenerlo igual (Por ejemplo: 2417 a 2400):