Es una prueba de aglutinación en tubo, con las mismas características que SAT pero con el agregado de una concentración constante de 2 mercapto-etanol. Se trata de una
39 prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG. Se basa en que la IgM, con configuración de pentámero, se degrada en cinco subunidades semejantes debido a la acción del 2-Mercapto Etanol. Estas subunidades conservan sus características de antigenicidad pero al combinarse con el antígeno no originan complejos suficientemente grandes como para aglutinar. La prueba se usa, por lo tanto, como evidencia presuntiva de la presencia de IgG. Interpretación: la lectura se efectúa de la misma manera que para la prueba de aglutinación en tubo y debe hacerse siempre en forma paralela con la prueba de aglutinación en tubo
(SAT). La presencia de IgG se asocia generalmente con infección activa, por lo que toda
reacción a esta prueba debe ser considerada como indicativa de infección. Los animales reaccionantes a esta prueba se deben considerar infectados.
Tabla de interpretación diagnóstica de brucelosis bovina Hembras no vacunadas, machos mayores de 6 meses
BPA Wright/ SAT 2-ME Condición
- No se realiza No se realiza Negativo
+ 25 UI - Negativo
+ ≥ 50 UI - Sospechoso
+ 100 UI - Positivo
+ ≥ 25 UI ≥ 25 UI Positivo
Hembras vacunadas con Brucella abortus cepa 19, mayores de 18 meses BPA Wright/ SAT 2-ME Condición
- No se realiza No se realiza Negativo
+ ≤ 50 UI - Negativo + I 100 UI - Sospechoso + 100 UI - Sospechoso + I 200 UI - Sospechoso + 200 UI - Positivo + ≥ 25 UI ≥ 25 UI Positivo
UI: unidades internacionales I: incompleto
Técnica de Polarización de Luz Fluorescente (FPA)
Más recientemente se ha desarrollado un método para detectar anticuerpo anti-PSO (polisacárido O) de Brucella por polarización de fluorescencia (FPA). Se trata de un inmunoensayo en el cual los anticuerpos, al unirse al antígeno, cambian la velocidad de rotación de la molécula. Al incidir en ella un haz de luz fluorescente polarizada, el ángulo de difracción cambia en función del anticuerpo unido. Este cambio es medido por un detector que lo traduce en una señal.
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ELISA por competición
La técnica consiste en la adsorción del antígeno lipopolisacárido liso (LPS) sobre una placa de 96 pocillos. A continuación se añade la dilución de los sueros a analizar y el anticuerpo monoclonal de ratón, específico para un epítope de la cadena O del LPS. Luego, el conjugado de anticuerpo de cabra anti-ratón conjugado con enzima peroxidasa y el substrato/ cromógeno.
En ausencia de anticuerpos anti-Brucella (sueros negativos), el anticuerpo monoclonal se liga al epítope de la cadeno O del LPS, lo cual es indicado en la prueba por el desarrollo de color. En el caso de que el suero problema contenga anticuerpos (suero positivo), éstos compiten con el anticuerpo monoclonal por sitios del epítope e inhiben el enlace del anticuerpo monoclonal con la porción de cadena O, manifestándose por la ausencia de color en el ensayo.
Otras pruebas para el diagnóstico serológico de brucelosis bovina Técnica de Fijación del Complemento
Es una prueba de interacción terciaria que permite la detección y cuantificación relativa de los anticuerpos específicos antibrucélicos capaces de fijar el complemento (IgG1), cuya presencia en determinados niveles posee una gran correlación con el estado de animal infectado.
Interpretación: la determinación cuali-cuantitativa se realiza midiendo la cantidad de complemento consumida por la relación antígeno-anticuerpo y dicha reacción se manifiesta, indirectamente, por la ausencia de hemólisis de los glóbulos rojos.
ELISA indirecto
Permite detectar la presencia de anticuerpos contra Brucella abortus en animales domésticos y salvajes. La técnica consiste en la adsorción del antígeno lipopolisacárido liso (LPS) sobre una placa de 96 pocillos. A continuación se añade la dilución de los sueros a analizar y luego de una incubación de 30 minutos, se añade un anticuerpo monoclonal de ratón anti-IgG1 bovina conjugado con una enzima peroxidasa. Luego de una segunda incubación de 30 minutos, se agrega un substrato/cromógeno y se lee la reacción por fotometría.
Si el suero problema contiene anticuerpos anti-Brucella (suero positivo), éstos se adhieren al antígeno LPS y al anticuerpo monoclonal anti-IgG1, por lo tanto al agregar la solución substrato/cromógeno, se producirá un cambio de color cuya intensidad estará directamente relacionada con la concentración de anticuerpos presentes en la muestra.
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Prueba de anillo en leche (PAL)
Es una prueba rápida en tubo, cualitativa, de rodeo que detecta la presencia de Ac en leche entera. Estos Ac reaccionan con el antígeno coloreado con hematoxilina formando un complejo antígeno-anticuerpo que queda adherido a los glóbulos grasos de la leche y asciende con ellos a la superficie, formando una capa o “anillo” de crema de color púrpura azulada, de intensidad variable según el grado de la reacción, desapareciendo parcial o totalmente la tinción de la columna de leche. Si la muestra no contiene anticuerpos específicos, el antígeno no se fijará a los glóbulos grasos y permanecerá uniformemente distribuido, coloreando la columna de leche, mientras que la capa de crema forma un “anillo” de color blanco natural. El porcentaje de grasa de la muestra influye en la prueba, ya que la formación del anillo de crema en la superficie dependerá del tenor graso de la leche.
La PAL se usa como diagnóstico presuntivo para descubrir rebaños infectados en los cuales se consideran el número de animales para determinar los diferentes volúmenes de leche de tanque a emplear. La prueba es modificada para tanques muy grandes: para hacer la prueba más sensible se aumenta la cantidad de leche, manteniendo constante la cantidad de antígeno. También se emplea en la vigilancia epidemiológica en áreas de control de la brucelosis.
Interpretación: anillo color violáceo en el extremo superior de la columna líquida indica presencia de anticuerpos anti-Brucella en leche.
- : anillo de crema, blanco; columna de leche, azul.
+ : anillo de crema y columna de crema del mismo color o casi igual. ++ : anillo de crema de color más pronunciado que la columna de leche.
+++ : anillo de crema, azul oscuro; la columna de leche tiene aún un poco de color. ++++: anillo de crema, azul oscuro; la columna de leche es blanca.
Los animales de rodeos positivos a la PAL deben ser examinados por las pruebas serológicas para identificar los infectados individualmente.
Modificación de la prueba para tanques muy grandes
Para aumentar la sensibilidad de la prueba, aumentar la cantidad de leche, manteniendo constante la cantidad de antígeno:
< 150 vacas 1 ml de leche
150 a 450 vacas 2 ml de leche
451 a 700 vacas 3 ml de leche
Para utilizar esta prueba en el diagnóstico individual de un animal, se deben realizar diluciones de la muestra de leche.
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BRUCELOSIS OVINA