La sensibilidad de esta prueba es superior a la del pliegue ano-caudal, y se aplica con el fin de obtener una mayor seguridad en la eliminación de bovinos infectados, en rodeos en los que ya se ha comprobado la infección, como por ejemplo confirmar luego de 60 días a los animales que reaccionaron en forma dudosa a la prueba anocaudal.
El lugar de inoculación es el tercio medio del cuello. Se corta el pelo para indicar el lugar donde se aplicó la inyección en un área de 5 cm de diámetro y se mide con un calibre el espesor de la piel.
Se inyectan 0,1 mL de PPD bovina en las capas superficiales de la piel mediante la inserción de la aguja a 45º de la piel en toda su longitud.
La lectura se realiza a las 72 h. Se palpa la zona de inoculación para ver si existe induración y se mide con calibre el espesor de la piel.
Positivo: engrosamiento igual o mayor a 3 mm Negativo: engrosamiento menor a 3 mm.
3. Prueba cervical comparativa (con PPD bovina y aviar).
“Esta prueba se debe utilizar cuando en un establecimiento se detectan con la prueba ano-caudal, animales sospechosos en un área en erradicación o libre”.
El lugar de inoculación es en el tercio medio del cuello. Se corta el pelo para indicar el lugar donde se aplicó la inyección en un área de 5 cm de diámetro para cada una, a 10 cm del ligamento nucal PPD aviar y a 12 cm por debajo del mismo PPD bovina y se mide con un calibre el espesor de la piel.
Se inyectan 0,1 mL de PPD aviar y 0,1 mL de PPD bovina en las capas superficiales de la piel mediante la inserción de la aguja a 45º de la piel en toda su longitud.
La lectura se realiza a las 72 h. Se palpa la zona de inoculación para ver si existe induración y se mide con calibre el espesor de la piel.
La interpretación se debe realizar de acuerdo a los siguientes parámetros:
a) Por diferencia de mm anterior y posterior a las inoculaciones se debe determinar la respuesta final de cada PPD.
b) La interpretación debe estar basada en el tamaño de la respuesta a la tuberculina bovina comparada con la aviar.
Positivo: aquel animal con 4 mm o más de respuesta a la PPD bovina que a la PPD aviar. Sospechoso: con más de 2 mm hasta 4 mm de respuesta a la PPD bovina que a la PPD aviar. Negativo: con una respuesta igual o menor a 2 mm.
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En otras especies
PORCINOS
Los cerdos son susceptibles a la infección con Mycobacterium bovis, M. tuberculosis y
M. avium complex (MAC) por lo que en la prueba deben usarse ambas tuberculinas, PPD de
origen bovino y PPD de origen aviar.
Se realiza la prueba en la base de oreja. Si esta región estuviera traumatizada o tuviera algún defecto, se pueden hacer las pruebas en los labios de la vulva de la cerda o en la conjunción de la piel y mucosa del ano del macho. Se debe inyectar 0,1 mL de PPD bovino en el lado derecho y 0,1 mL de PPD aviar en el lado izquierdo.
La lectura se hace a las 48 h. Toda reacción tisular comprobada por palpación se clasifica como reaccionante, debiéndose anotar si la misma se debe a tuberculina bovina o aviar.
CAPRINOS
Prueba ano-caudal de rutina (con PPD bovina) o prueba cervical simple (con PPD bovina). Se siguen las especificaciones del protocolo definido para bovinos.
OVINOS
Prueba axial comparativa con tuberculinas PPD bovina y PPD aviar, debido a que los ovinos son también susceptibles a la infección con M. avium subsp paratuberculosis.
Se inocula 0,1 mL de PPD bovina en la axila derecha y 0,1 mL de PPD aviar en la axila izquierda. La lectura se realiza a las 72 hs por palpación y medida con el calibre. La interpretación se realiza de acuerdo a lo establecido para la prueba cervical comparativa de los bovinos.
AVES
Las aves son susceptibles solamente al Mycobacterium avium por lo que en esta prueba se utiliza exclusivamente PPD aviar. El reactivo se inyecta vía intradérmica en una de la barbillas, la dosis es de 0,05 mL. La lectura se realiza a las 48 h de aplicada la inyección y toda edematización de la barbilla se interpreta como reacción positiva.
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In vitro
Prueba de interferón gamma
Es una prueba diseñada para detectar gamma interferón biológicamente activo, en el plasma bovino para el diagnóstico de tuberculosis a partir de muestras de sangre. Los animales infectados con Mycobacterium bovis tienen linfocitos circulantes sensibilizados a los antígenos micobacterianos. Éstos podrían responder in vitro a la estimulación con tuberculina PPD secretando gamma interferón, la que puede detectarse por esa prueba. Los linfocitos de animales no infectados no responden a la producción de gamma interferón y de ahí que la detección de la misma se correlaciona con la enfermedad.
Otra aplicación de este sistema para demostrar in vitro inmunidad mediada por células incluye el diagnóstico de otra enfermedad causada por Mycobacterium que es la enfermedad de Johne, conocida como Paratuberculosis. Se ha demostrado que el ganado infectado con
Mycobacterium paratuberculosis puede identificarse detectando gamma interferón en el
plasma recogido a partir de sangre cultivada con Johnina PPD como antígeno estimulante. La prueba da gamma interferón provoca la estimulación de las células T previamente sensibilizadas por la infección con Mycobacterium bovis.
Para esta prueba se incuban pequeñas cantidades de sangre entera heparinizada con antígeno de PPD. Después de 24 horas de incubación se elimina el plasma y se prueba para gamma interferón usando un anticuerpo monoclonal de enzima inmuno ensayo.
Pruebas a campo realizadas en Australia durante 1989 y 1990 sobre 10.000 bovinos demostraron que el ensayo es significativamente más sensible y específico que la prueba de tuberculina sobre la piel.
Se puede realizar repetidas veces sobre animales sospechosos sin tener que esperar 60-90 días como en el caso de la tuberculina, y además los animales pueden analizarse todas las veces que sea necesario. Además se evita la interpretación subjetiva de la lectura de la prueba dérmica.
Es importante tener en cuenta que para realizar la prueba de gamma interferón los animales no se hayan sometido a la prueba intradérmica en los últimos 60 días. Las muestras de sangre se deben colocar en tubos heparinizados y transportarse a temperatura ambiente, debiéndose procesar dentro de las 16 horas siguientes a su obtención.
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ACTIVIDAD