Case-Study Organisations

Los animales seleccionados se alojaron en la zona de experimentación de la Granja Experimental Clinobs distribuidos en jaulas individuales habiendo realizado previamente una limpieza exhaustiva de las mismas.

Se inició entonces el periodo de adaptación de 7 días antes del inicio del experimento al objeto de eliminar el factor estrés producido por el cambio de ubicación y transporte, y para que todos los animales empezaran el estudio en idénticas condiciones. Durante este periodo de adaptación, los animales dispusieron de pienso y agua ad libitum. En la fase de adaptación, los animales fueron controlados en cuanto al peso inicial y final y la ganancia de peso media diaria.

El pienso consumido durante este periodo fue el pienso estándar completo para cerdos de engorde comercial. Durante este periodo de adaptación no se observó en los cerdos ningún síntoma de enfermedad.

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3.1.1. Estudio farmacocinético de oxitetraciclina tras administración única oral en cerdos

A los animales del Grupo 1 (4 cerdos, 2 machos y 2 hembras) se les administró oralmente vía pienso una dosis de 5 mg oxitetraciclina/kg p.v. Durante el tratamiento, los animales seleccionados siguieron condiciones normales de cría. Se pesó a los animales al inicio del tratamiento. También se hicieron observaciones de control del estado de salud general (aspecto, tonalidad de la piel, erupciones...). En el período de tiempo indicado no se observó en los animales ningún indicio de alteraciones zootécnicas o de enfermedad que aconsejara su exclusión.

Para el tratamiento, los animales fueron alimentados con el mismo pienso basal al que se incorporó la cantidad necesaria de oxitetraciclina para conseguir que cada animal recibiera una dosis de 5 mg oxitetraciclina/kg p.v. Antes de realizar el experimento se verificó la concentración de oxitetraciclina en el pienso medicado mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).

Se preparó un pienso medicado, incorporando la cantidad necesaria de oxitetraciclina al pienso basal estándar, de forma que, cada cerdo recibió una dosis exacta de 5 mg de oxitetraciclina/kg p.v. en función de su peso corporal y su consumo medio durante la fase de adaptación. La concentración del pienso administrado fue de 1 g oxitetraciclina/kg pienso. A cada cerdo de 60 kg de peso se le suministró diariamente una cantidad de pienso igual al 0,5% del peso vivo medio, es decir, 300 g de pienso medicado, tomando como 60 kg el peso vivo medio, por lo tanto cada animal recibe oralmente 300 mg oxitetraciclina/60 kg p.v. Este pienso medicado se preparó en forma de bolo apetecible y se comprobó que fue consumido en su totalidad. Antes de la administración, los animales se sometieron a un ayuno de 12 horas.

Después del tratamiento y una vez comprobado que todos los animales consumieron el pienso medicado, los animales volvieron a disponer de pienso blanco basal y agua ad libitum.

Se eligió para este estudio la dosis de 5 mg oxitetraciclina/kg p.v. para obtener datos farmacocinéticos preliminares de oxitetraciclina que ayudaran a elegir una dosis terapéutica.

Tras el tratamiento, de cada animal se tomaron muestras de sangre (4ml) a diferentes intervalos de tiempo de la vena yugular previa cateterización de la misma y

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manteniéndola con un tapón heparinizado para evitar la continua venopunción. Se recogieron muestras de sangre a los 15 y 30 min., 1, 2, 4, 6, 8, 12 y 24 horas tras la administración.

Estas muestras de sangre se recogieron individualmente en tubos heparinizados y debidamente etiquetados; seguidamente se centrifugaron las muestras a 10.000 r.p.m. a 4ºC durante 10 minutos y se aisló el plasma que se congeló a -45 ºC hasta el posterior análisis de la concentración de oxitetraciclina por HPLC.

3.1.2. Estudio farmacocinético de oxitetraciclina tras administración múltiple oral en cerdos

A los animales del Grupo 2 (4 cerdos, 2 machos y 2 hembras) se les administró oralmente vía pienso una dosis de 30 mg oxitetraciclina/kg p.v./día durante 7 días consecutivos. Durante el tratamiento, los animales seleccionados siguieron condiciones normales de cría. Se pesó a los animales al inicio y al final del periodo de adaptación (correspondiente al primer día de tratamiento), todos los días de tratamiento y el día antes del sacrificio. También se hicieron observaciones diarias de control del estado de salud general (aspecto, tonalidad de la piel, erupciones...). En el período de tiempo indicado no se observó en los animales ningún indicio de alteraciones zootécnicas o de enfermedad que aconsejara su exclusión.

Para el tratamiento, los animales fueron alimentados con el mismo pienso basal al que se incorporó la cantidad necesaria de oxitetraciclina para conseguir que cada animal recibiera una dosis de 30 mg oxitetraciclina/kg p.v./día. Antes de realizar el experimento se verificó la concentración de oxitetraciclina en el pienso medicado mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).

Se preparó un pienso medicado, incorporando la cantidad necesaria de oxitetraciclina al pienso basal estándar, de forma que, cada cerdo recibió una dosis exacta de 30 mg de oxitetraciclina/kg p.v./día durante 7 días en función de su peso corporal y su consumo medio durante la fase de adaptación. La concentración del pienso administrado fue de 6 g oxitetraciclina/kg pienso. A cada cerdo de 60 kg de peso se le suministró diariamente una cantidad de pienso igual al 0,5% del peso vivo medio, es decir, 300 g de pienso medicado/día, tomando como 60 kg el peso vivo medio, por lo tanto cada animal recibe oralmente 1,8 g oxitetraciclina/60 kg p.v./día, durante siete días

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consecutivos. Este pienso medicado se preparó en forma de bolo apetecible y se comprobó que fue consumido en su totalidad.

Antes de la administración, los animales se sometieron a un ayuno de 12 horas. Después del tratamiento y una vez comprobado que todos los animales consumieron el pienso medicado, los animales volvieron a disponer de pienso blanco basal y agua ad libitum.

Se eligió para el estudio la dosis de 30 mg oxitetraciclina/kg p.v. en base a los datos cinéticos preliminares obtenidos tras la administración de 5 mg/kg, al objeto de obtener datos farmacocinéticos mas apropiados para predecir una eficacia clinica.

Durante el primer día de tratamiento y el último día de tratamiento o séptima administración se recogieron muestras de sangre (4 ml) a los 15, 30 min., 1, 2, 4, 6, 8, 12 y 24 h, después de la administración de la dosis diaria oral, de manera que la toma de muestra de las 24 h se realizó siempre inmediatamente antes de administrar a las 8 h a.m. la dosis oral diaria del día siguiente.

Durante los días intermedios, días 2, 3, 4, 5 y 6 de tratamiento, se recogieron muestras de sangre (4 ml) a los 30 min., 2, 4, 8 y 24h, de manera que la toma de muestra de sangre de las 24 h se realizó siempre inmediatamente antes de administrar a las 8 h a.m. la dosis oral diaria del día siguiente.

Las muestras de sangre se tomaron a diferentes intervalos de tiempo de la vena yugular previa cateterización de la misma y manteniéndola con un tapón heparinizado para evitar la continua venopunción. Las muestras de sangre se recogieron individualmente en tubos heparinizados y debidamente etiquetados; seguidamente se centrifugaron las muestras a 10.000 r.p.m. a 4ºC durante 10 minutos y se aisló el plasma que se congeló a -45 ºC hasta el posterior análisis de la concentración de oxitetraciclina por HPLC. La Tabla 17 expresa el esquema del muestreo de sangre realizado para el estudio farmacocinético tras administración múltiple oral de 30 mg oxitetraciclina/kg p.v./día, durante 7 días consecutivos.

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Tabla 17. Muestreo de sangre realizado para el estudio farmacocinético tras administración múltiple oral

de 30 mg oxitetraciclina/kg p.v./día, durante 7 días consecutivos

DÍA DE MUESTREO Tiempo de muestreo Tiempo de muestreo (acumulado)

Día 1 Tratamiento

1ª dosis 30 mg oxitetraciclina/kg p.v. vía oral pienso 0,25 h 0,50 h 1 h 2 h 4 h 6 h 8 h 12 h 24 h 0,25 h 0,50 h 1 h 2 h 4 h 6 h 8 h 12 h 24 h Día 2 Tratamiento

2ª dosis 30 mg oxitetraciclina/kg p.v. vía oral pienso 2 h 4 h 8 h 24 h 26 h 28 h 32 h 48 h Día 3 Tratamiento

3ª dosis 30 mg oxitetraciclina/kg p.v. vía oral pienso 2 h 4 h 8 h 24 h 50 h 52 h 56 h 72 h Día 4 Tratamiento

4ª dosis 30 mg oxitetraciclina/kg p.v. vía oral pienso 2 h 4 h 8 h 24 h 74 h 76 h 80 h 96 h Día 5 Tratamiento

5ª dosis 30 mg oxitetraciclina/kg p.v. vía oral pienso 2 h 4 h 8 h 24 h 98 h 100 h 104 h 120 h Día 6 Tratamiento

6ª dosis 30 mg oxitetraciclina/kg p.v. vía oral pienso 2 h 4 h 8 h 24 h 122 h 124 h 128 h 144 h Día 7 Tratamiento

7ª dosis 30 mg oxitetraciclina/kg p.v. vía oral pienso 0,50 h 1 h 2 h 4 h 6 h 8 h 12 h 24 h 144,5 h 145 h 146 h 148 h 150 h 152 h 156 h 168 h

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