CHAPTER 6. CONCLUSIONS AND FUTURE WORK
6.1 Conclusions
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UN
Además de los ingredientes indicados en la página anterior, los medios de comunicación contiene por litro *:
lisina Medio de Ensayo
L-Cistina ... ... 0,1 g
Cistina Medio de Ensayo
L-lisina clorhidrato ... ... 0,5 g *Ajustado y / o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
precauciones
Gran se debe tener cuidado para evitar la contaminación de los medios de comunicación o la cristalería en los procedimientos de ensayo microbiológico. Cantidades
extremadamente pequeñas de material extraño pueden ser suficientes para dar resultados erróneos. Escrupulosamente debe ser utilizado material de vidrio limpio libre de detergentes y otros productos químicos. Material de vidrio debe ser calentada a 250 ° C durante al menos 1 hora para quemar eventuales residuos orgánicos que pudieran estar presentes. Tome precauciones para mantener la esterilización y enfriamiento condiciones uniforme en todo el ensayo.
Instrucciones de Preparación a partir del
producto deshidratado
1. Suspender 10,5 g del polvo en 100 ml de agua purificada. 2. Calentar con agitación frecuente y hervir durante 2-3 minutos para disolver
completamente el polvo.
3. Dispensar en cantidades de 5 mL en tubos, de manera uniforme dispersión del precipitado.
4. Añadir las muestras patrón o de prueba.
5. Ajustar volumen del tubo hasta 10 ml con agua purificada. 6. Autoclave a 121 ° C durante 10 minutos.
Control de calidad del usuario
Especificaciones de identidad
Difco ™ lisina medio de ensayo o cistina Medio de Ensayo
Difco ™ lisina medio de ensayo o cistina Medio de Ensayo
Difco ™ lisina medio de ensayo o cistina Medio de Ensayo
Aspecto deshidratada: De color blanco a blanco, homogéneo, puede tener una tendencia a agruparse.
Solución: solución de 5,25% (fuerza individual), soluble en agua purificada en ebullición. La solución es ligero a medio ámbar, claro, puede tener un ligero precipitado.
Apariencia Preparado: fuerza-Light individual a ámbar medio, claro, puede tener un ligero precipitado La reacción de 5,25% solución a 25 ° C: pH 6,7 ± 0,2
Respuesta del cultivo
Difco ™ lisina medio de ensayo o cistina Medio de Ensayo
Difco ™ lisina medio de ensayo o cistina Medio de Ensayo
Difco ™ lisina medio de ensayo o cistina Medio de Ensayo
Preparar el medio por instrucciones de la etiqueta. Estos medios apoyar el crecimiento de Pediococcus acidilactici ATCC ™ 8,042 cuando se prepara en una sola fuerza y complementado con el aminoácido apropiado.
Preparar el medio por instrucciones de la etiqueta. Estos medios apoyar el crecimiento de Pediococcus acidilactici ATCC ™ 8,042 cuando se prepara en una sola fuerza y complementado con el aminoácido apropiado.
Preparar el medio por instrucciones de la etiqueta. Estos medios apoyar el crecimiento de Pediococcus acidilactici ATCC ™ 8,042 cuando se prepara en una sola fuerza y complementado con el aminoácido apropiado.
Preparar el medio por instrucciones de la etiqueta. Estos medios apoyar el crecimiento de Pediococcus acidilactici ATCC ™ 8,042 cuando se prepara en una sola fuerza y complementado con el aminoácido apropiado.
Preparar el medio por instrucciones de la etiqueta. Estos medios apoyar el crecimiento de Pediococcus acidilactici ATCC ™ 8,042 cuando se prepara en una sola fuerza y complementado con el aminoácido apropiado.
Lisina medio de ensayo debe producir una curva estándar cuando se prueba con L-lisina en 0,0 a 300 g por 10 ml. La cistina medio de ensayo debe producir una curva estándar cuando se prueba con L-cistina en 0 a 50 g por 10 ml. Incubar los tubos con tapas aflojadas a 35-37 ° C durante 16-20 horas. Leer el porcentaje de transmitancia a 660 nm.
Preparación de dilución del inóculo, amino Stock ácido y la solución de trabajo.
Preparación de Estándar Volumen de la norma Final
La dilución del inóculo Preparación de Solución de trabajo Trabajando Aminoácidos
(Suspensión celular + Solución Stock aminoácido (Solución madre + Solución Concentración
Medio de ensayo Prueba de Cultivo Estéril 0,85% de NaCl) (Aminoácido + purificadas H(Aminoácido + purificadas H(Aminoácido + purificadas H 2 2 2 o) o) o) purificó Hpurificó Hpurificó H 2 2 2 o) o) o) (Ml / 10 ml tubo) g / 10 Ml
Ensayo lisina Pediococcus acidilactici 1 ml + 19 ml L-lisina 6 g + 1000 ml 1 ml + 99 ml 0, 0,5, 1, 1,5, 0,0, 30, 60, 90, 120,
Medio ATCCATCCATCC ™ ™ ™ 8042 8042 8042 2, 2,5, 3, 4, 5 150, 180, 240, 300
Ensayo cistina Pediococcus acidilactici 1 ml + 19 ml L-cistina 1 g + 100 ml + 1 ml 1 ml + 99 ml 0, 0,5, 1, 1,5, 0,0, 5, 10, 15, 20,
Medio ATCCATCCATCC ™ ™ ™ 8042 8042 8042 HCl se calentó, después se enfrió, 2, 2,5, 3, 4, 5 25, 30, 40, 50
añadir hasta 1000 ml
Procedimiento
De la cultura y del inóculo
Los cultivos madre de Pediococcus acidilactici ATCC 8042 se preparan por Los cultivos madre de Pediococcus acidilactici ATCC 8042 se preparan por Los cultivos madre de Pediococcus acidilactici ATCC 8042 se preparan por inoculación puñalada en tubos de Lactobacilli Agar AOAC o Micro ensayo de cultivo de agar. Incubar culturas a 35-37 ° C durante 24 horas. de la tienda de valores a 2-8 ° C. Hacer transferencias a intervalos mensuales, por triplicado. El inóculo para el ensayo se prepara mediante el subcultivo del organismo de ensayo en 10 ml Lactobacilli Broth AOAC o Micro Inóculo caldo. Se incuba a 35-37ºC durante 16-24 horas. Después de la incubación, centrifugar las células bajo condiciones asépticas y decantar el sobrenadante líquido. Lavar las células 3 veces con 10 solución de NaCl al 0,85% estéril mL. Después del tercer lavado, resuspender las células en 10 solución de NaCl al 0,85% estéril mL. Se diluye la suspensión celular de 10 ml con la cantidad apropiada de solución estéril de NaCl al 0,85%. (Ver la tabla debajo de Control de calidad del usuario, Respuesta Cultural.) Una gota de la suspensión del inóculo diluida se usó para inocular cada uno de los tubos de ensayo.
Solución de aminoácidos
Preparar soluciones madre de cada aminoácido como se describe en la tabla bajo control de calidad del usuario. Preparar las soluciones madre fresco todos los días.
Cantidades crecientes de la norma o el agua purificada desconocido y suficiente para dar un volumen total de se añaden a los tubos que contenían 5 ml del medio rehidratado 10 ml por tubo. Los volúmenes apropiados de las normas y sus concentraciones finales se enumeran en la tabla.
Amino Acid Ensayo Media, cont.
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sección III sección III UN
Medir la respuesta de crecimiento por turbidimetría o por titulación. lecturas turbidimétricas se realizan después de la incubación a 35-37 ° C durante 16-20 horas. lecturas volumétricos se realizan después de la incubación a 35-37 ° C durante 72 horas.
Es esencial que una curva estándar construirse cada vez que se ejecuta un ensayo. Condiciones de autoclave y la temperatura de incubación que influyen en las lecturas de la curva estándar no pueden siempre ser duplicados.
Resultados previstos
1. Preparar una curva de respuesta a la concentración estándar trazando las lecturas de respuesta frente a la cantidad de estándar en cada tubo, disco o copa.
2. Determinar la cantidad de ácido amino en cada nivel de solución de ensayo por interpolación de la curva estándar.
3. Calcular la concentración de aminoácido en la muestra a partir de la media de estos valores. Utilizar sólo aquellos valores que no varían en más de ± 10% de la media. Utilizar los resultados sólo si dos tercios de los valores no varían en más de ± 10%.
limitaciones del procedimiento
1. El organismo de ensayo utilizado para la inoculación de un medio de ensayo deben ser cultivados y mantenidos en los medios recomendados para este fin.
2. La técnica aséptica se debe utilizar durante todo el procedimiento de ensayo. 3. El uso de los medios alterados o deficientes puede causar mutantes que tienen
diferentes requisitos nutricionales que no darán una respuesta satisfactoria. 4. Para obtener resultados exitosos de estos procedimientos, todas las condiciones del
ensayo se deben seguir con precisión.
referencia
1. Acero, Sauberlich, Reynolds y Baumann. 1949. J. Biol. Chem. 177: 533. 1. Acero, Sauberlich, Reynolds y Baumann. 1949. J. Biol. Chem. 177: 533. 1. Acero, Sauberlich, Reynolds y Baumann. 1949. J. Biol. Chem. 177: 533.
Disponibilidad
Difco ™ lisina Medio de Ensayo
Difco ™ lisina Medio de Ensayo
Difco ™ lisina Medio de Ensayo
Gato. No. 242.210 Deshidratado - 100 g *
Difco ™ Cistina Medio de Ensayo
Difco ™ Cistina Medio de Ensayo
Difco ™ Cistina Medio de Ensayo
Gato. No. 246.710 Deshidratado - 100 g * * Almacenar a 2-8 ° C.
Amino Acid Ensayo Media, cont.