Defects Detection via NDT Methods - CONCLUSIONS AND FUTURE WORK

CHAPTER 6. CONCLUSIONS AND FUTURE WORK

A.4 Defects Detection via NDT Methods

BYCE Base de Agar Agar BYCE • • BYCE diferencial Agar Agar selectivo

BYCE (CCVC, PAC, APV) • Legionella Agar Agar Base • Legionella

Enriquecimiento

uso previsto

Estos medios se utilizan en procedimientos cualitativos para el aislamiento de Legionella Estos medios se utilizan en procedimientos cualitativos para el aislamiento de Legionella especies de muestras clínicas y no clínicas (muestras ambientales).

Resumen y explicación

BCYE Agar se basa en la modificación de los medios descritos anteriormente de Edelstein. En 1979, Feely et al. descrito de carbón de extracto de levadura (CYE) Agar como una modificación de un medio existente, FG Agar. 1,2 Se sustituye el almidón en el como una modificación de un medio existente, FG Agar. 1,2 Se sustituye el almidón en el como una modificación de un medio existente, FG Agar. 1,2 Se sustituye el almidón en el FG Agar con carbón vegetal activado y sustituidos extracto de levadura para hidrolizado de caseína, lo que resulta en una mejor recuperación de L. pneumophila. En de caseína, lo que resulta en una mejor recuperación de L. pneumophila. En de caseína, lo que resulta en una mejor recuperación de L. pneumophila. En 1980, Pasculle informó de que CYE Agar podría mejorarse tamponar el medio con ACES Buffer. 3 Un año más tarde, Edelstein aumentó aún más la sensibilidad del ACES Buffer. 3 Un año más tarde, Edelstein aumentó aún más la sensibilidad del ACES Buffer. 3 Un año más tarde, Edelstein aumentó aún más la sensibilidad del medio mediante la adición de alphaketoglutarate (BCYE Agar). 4

medio mediante la adición de alphaketoglutarate (BCYE Agar). 4

Legionella Agar es una modificación de la fórmula BCYE Agar de Edelstein. En la fórmula, la concentración de tampón ACES se redujo de 10,0 g / L a 6,0 g / L.

BCYE diferencial Agar se utiliza para la identificación presuntiva y diferenciación de Legionella spp. basado en su morfología y color. 5 Este medio se basa en la de Legionella spp. basado en su morfología y color. 5 Este medio se basa en la de Legionella spp. basado en su morfología y color. 5 Este medio se basa en la de Legionella spp. basado en su morfología y color. 5 Este medio se basa en la de Legionella spp. basado en su morfología y color. 5 Este medio se basa en la formulación de Vickers et al., 6 y consiste de los colorantes púrpura de formulación de Vickers et al., 6 y consiste de los colorantes púrpura de formulación de Vickers et al., 6 y consiste de los colorantes púrpura de bromocresol y azul de bromotimol añadido a BCYE Agar. BCYE Selective Agar w / CCVC es un medio altamente selectivo que consiste en BYCE Agar suplementado con cefalotina, colistina, vancomicina y cicloheximida. Este medio se basa en la formulación de Bopp et al. 7 Obtuvieron una mejor recuperación de L. se basa en la formulación de Bopp et al. 7 Obtuvieron una mejor recuperación de L. se basa en la formulación de Bopp et al. 7 Obtuvieron una mejor recuperación de L. se basa en la formulación de Bopp et al. 7 Obtuvieron una mejor recuperación de L. pneumophila utilizando el medio selectivo en conjunción con un tratamiento de pneumophila utilizando el medio selectivo en conjunción con un tratamiento de lavado ácido para reducir la flora microbiana contaminantes presentes en las muestras de agua ambientales. BYCE agar selectivo con PAC fue desarrollado por Edelstein de aislamiento de Legionella spp. a partir de muestras que por Edelstein de aislamiento de Legionella spp. a partir de muestras que por Edelstein de aislamiento de Legionella spp. a partir de muestras que contienen flora mixta. 4 Él encontró que BYCE Agar suplementado con polimixina contienen flora mixta. 4 Él encontró que BYCE Agar suplementado con polimixina contienen flora mixta. 4 Él encontró que BYCE Agar suplementado con polimixina B, cefamandol y anisomicina mejora la recuperación de

L. pneumophila a partir de muestras clínicas contaminadas. En conjunción con un L. pneumophila a partir de muestras clínicas contaminadas. En conjunción con un tratamiento de lavado ácido para reducir la flora microbiana, sino que también facilita la recuperación de la bacteria a partir de agua potable.

sesenta y cinco

segundo

BYCE agares, cont.

Control de calidad del usuario

NOTA: Las diferencias en las especificaciones de identidad y pruebas Respuesta del cultivo para los medios ofrecidos ya que ambos Difco ™ y Bundesliga ™ las marcas pueden reflejar diferencias en el desarrollo y prueba de

los medios de comunicación para aplicaciones industriales y clínicos, por las publicaciones referenciadas.

Especificaciones de identidad

Difco ™ Legionella Agar Base

Aspecto deshidratada: gris oscuro, de flujo libre, homogénea. Solución:

solución de 3,7%, insoluble en agua purificada. La suspensión es negro, opalescente.

Apariencia Preparado: Negro, opaco con precipitado.

La reacción de 3,7%

solución a 25 ° C: pH 6,85 a 7,0 (ajustado)

Difco ™ Legionella Agar Enriquecimiento Difco ™ Legionella Agar Enriquecimiento Difco ™ Legionella Agar Enriquecimiento

Apariencia liofilizado: Polvo blanco a blanquecino, con o sin rastros de polvo de color marrón o verde.

Solución: Después de la rehidratación, el blanco con suspensión opaco, lechoso-off blanco,. Cierta evidencia de pardeamiento puede estar presente debido a pirofosfato férrico.

Respuesta del cultivo

Difco ™ Legionella Agar Base

Preparar el medio por instrucciones de la etiqueta. Inocular e incubar a 35 ± 2 ° C bajo una atmósfera humidificada que contenía aproximadamente

2,5% de CO 2 de 46-72 horas.

inóculo

Organismo ATCC ™ATCC ™ UFC recuperación colonia de color

dumoffii Legionella 33279 30-300 Buena Gris o blanquecino

Legionella

pneumophila 33153 30-300 Buena Gris o blanquecino

Legionella Gris o blanquecino

pneumophila 33154 30-300 Buena (puede tener un matiz azul)

Especificaciones de identidad

Bundesliga ™ BYCE Base de Agar

Aspecto deshidratada: fino a grueso, homogéneo, libre de extraños material.

Solución: solución de 3,83%, soluble en agua purificada en ebullición. Solución es oscuro, negro-verde para grayblack, moderadamente nebuloso a opaco.

Apariencia Preparado: Oscuro, negro-verde a gris-negro, moderadamente nebuloso a opaco.

La reacción de 3,83%

solución a 25 ° C: pH 6,85 ± 0,1 (ajustado)

Respuesta del cultivo

Bundesliga ™ BYCE Base de Agar

Preparar el medio por instrucciones de la etiqueta. por E coli, inocular e incubar a 35 ± 2 ° C durante 66-72 Preparar el medio por instrucciones de la etiqueta. por E coli, inocular e incubar a 35 ± 2 ° C durante 66-72 Preparar el medio por instrucciones de la etiqueta. por E coli, inocular e incubar a 35 ± 2 ° C durante 66-72 horas. por Legionella spp., inocular prueba y de control lotes de medio con diluciones en serie de 10 veces horas. por Legionella spp., inocular prueba y de control lotes de medio con diluciones en serie de 10 veces horas. por Legionella spp., inocular prueba y de control lotes de medio con diluciones en serie de 10 veces de los organismos de ensayo y se incuba a 35 ± 2 ° C durante 66-72 horas. El crecimiento en el lote de prueba debe estar dentro de 1 log del lote de control.

inóculo

Organismo ATCC ™ATCC ™ UFC recuperación Fluorescencia

Escherichia coli 25922 1025922 1025922 1025922 10 3- 3- 3- 3- 10 10 10 10 4 4 4 4 Bueno -

Legionella Buena (blanco-gris a

bozemanii 33217 N / A colonias de color azul-gris) azul-blanco

Legionella

pneumophila 33152 N / A Bueno Amarillo verde

Legionella pneumophila

ATCC ™ 33152 ATCC ™ 33152

ATCC ™ 33152

Principios del procedimiento

Estos medios consisten en un medio de base (BCYE) suplementado con antibióticos o colorantes. Los antibióticos mejoran la recuperación de

Legionella spp. por inhibir el crecimiento de organismos contaminantes. Legionella spp. por inhibir el crecimiento de organismos contaminantes. Colorantes facilitan la diferenciación e identificación de

Legionella spp. Legionella spp.

Los medios de comunicación de base (BCYE Agar Base y Legionella Agar Base) contienen extracto de levadura para suministrar los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento bacteriano. L-cisteína HCl, pirofosfato férrico y alfa-cetoglutarato se

incorporan para satisfacer las necesidades nutricionales específicas de Legionella especies. incorporan para satisfacer las necesidades nutricionales específicas de Legionella especies. incorporan para satisfacer las necesidades nutricionales específicas de Legionella especies. El carbón activado se descompone el peróxido de hidrógeno, un producto metabólico tóxico, y puede también recoger dióxido de carbono y modificar la tensión superficial. La adición del tampón ayuda a mantener el pH adecuado para el crecimiento óptimo de Legionella adición del tampón ayuda a mantener el pH adecuado para el crecimiento óptimo de Legionella especies. Los antibióticos incorporados en las diversas formulaciones BCYE tienen diferentes espectros de actividad. La vancomicina inhibe las bacterias gram-positivas; bacterias gram-negativas colistina y polimixina B de inhibición, a excepción de Proteo spp bacterias gram-negativas colistina y polimixina B de inhibición, a excepción de Proteo spp bacterias gram-negativas colistina y polimixina B de inhibición, a excepción de Proteo spp .; y cefalotina y cefamandol inhiben ambas bacterias gram-positivas y gram-negativas. Anisomicina y cicloheximida son agentes antifúngicos. BCYE diferencial Agar contiene los colorantes de bromocresol púrpura y azul de bromotimol para ayudar en la diferenciación e identificación de Legionella especies.

diferenciación e identificación de Legionella especies. diferenciación e identificación de Legionella especies. BCYE agar selectivo con PAV es similar a la fórmula Edelstein, anterior,

excepto que la concentración de polimixina B se reduce a la mitad, y la vancomicina es sustituido por cefamandol.

sección III

segundo BYCE agares, cont. segundo BYCE agares, cont.

fórmulas

Difco ™ Legionella Agar Base

Fórmula aproximada * por litro

Extracto de levadura ... ... 11,5 g ACES Buffer ... ... 6,0 g de carbón, Activado ... ... 1,5 g de alfa-cetoglutarato, monopotásico .... ... 1,0 g Agar ... ... 17,0 g

Difco ™ Legionella Agar Enriquecimiento Difco ™ Legionella Agar Enriquecimiento Difco ™ Legionella Agar Enriquecimiento

Fórmula aproximada * por vial

L-cisteína HCl ... ... 0,35 g pirofosfato férrico ... ... 0,14 g

Bundesliga ™ BYCE Base de Agar

Fórmula aproximada * por litro

Extracto de levadura ... ... 10,0 g pirofosfato férrico ... ... 0,25 g ACES Buffer ... ... 10,0 g de carbón, activado ...

... 2,0 g de alfa-cetoglutarato ...

... 1,0 g Agar ... ... 15,0 g

*Ajustado y / o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.

Instrucciones de Preparación a partir del

producto deshidratado

Difco ™ Legionella Agar Base

1. Disolver 18,5 g del polvo en 500 ml de agua purificada.

2. Ajuste a pH 7.1 a 7.2 con 1 N de KOH. No caliente antes de la esterilización en autoclave.

3. Autoclave a 121 ° C durante 15 minutos.

4. Enfriar a 45-50 ° C y añadir asépticamente 5 ml rehidratadas Difco ™ 4. Enfriar a 45-50 ° C y añadir asépticamente 5 ml rehidratadas Difco ™ 4. Enfriar a 45-50 ° C y añadir asépticamente 5 ml rehidratadas Difco ™

Legionella Agar enriquecimiento. Mezclar bien.

5. Comprobar el pH. Si es necesario, asépticamente ajustar el pH a 6,85 a 7,0 con HCl 1 N o 1 N de KOH.

6. Dispensar en placas de Petri. Agitar mientras que la dispensación para mantener carbón en suspensión.

7. Las muestras de ensayo del producto acabado para el rendimiento utilizando cultivos de control estables, típicos.

Bundesliga ™ BYCE Base de Agar

1. a 500 ml de agua purificada, añadir 2,4 g de gránulos de KOH y se mezclan para disolver.

2. Añadir 38,3 g del polvo y 500 ml de agua purificada. Mezclar

bien.

3. Calentar con agitación frecuente y hervir durante 1 minuto para disolver completamente el polvo.

4. Autoclave a 121 ° C durante 15 minutos.

5. Enfriar a 45-50 ° C y añadir 4 ml de una solución al 10% esterilizada por filtración de HCl de L-cisteína.

6. Mezclar bien. Verificar el pH; si no 6,85 ± 0,1, ajustar usando HCl N 1 o KOH.

7. Distribuir en placas de Petri. Agitar mientras que la dispensación para mantener carbón en suspensión.

8. Las muestras de ensayo del producto acabado para el rendimiento utilizando cultivos de control estables, típicos.

Procedimiento

Usar procedimientos estándar para obtener colonias aisladas a partir de muestras y muestras.

Incubar las placas en una posición invertida (agar hacia arriba) a 35 ± 2 ° C durante un mínimo de 3 días. El crecimiento suele ser visible dentro de 3-4 días, pero puede durar hasta 2 semanas en aparecer.

Resultados previstos

En BCYE Agar, Legionella Agar y los medios de comunicación selectivo,

Legionella pneumophila produce pequeño a grande, lisa, de incoloro a azul-gris colonias Legionella pneumophila produce pequeño a grande, lisa, de incoloro a azul-gris colonias mucoides ligeramente pálidos,, que presentan fluorescencia amarillo-verde bajo luz UV de onda larga. Consultar las referencias para la morfología y el color de la fluorescencia de otras especies. 8,9

otras especies. 8,9

En BYCE diferencial Agar, L. pneumophila produce colonias de color azul claro con un En BYCE diferencial Agar, L. pneumophila produce colonias de color azul claro con un En BYCE diferencial Agar, L. pneumophila produce colonias de color azul claro con un tinte de color verde pálido. L. micdadei produce azul-gris a colonias de color azul oscuro. tinte de color verde pálido. L. micdadei produce azul-gris a colonias de color azul oscuro. tinte de color verde pálido. L. micdadei produce azul-gris a colonias de color azul oscuro.

La tinción de Gram, pruebas bioquímicas y procedimientos serológicos se debe realizar para confirmar los hallazgos.

referencias

1. Feely, Gibson, Gorman, Langford, Rasheed, Mackel y Baine. 1979. J. Clin. Microbiol. 10: 437. 1. Feely, Gibson, Gorman, Langford, Rasheed, Mackel y Baine. 1979. J. Clin. Microbiol. 10: 437. 1. Feely, Gibson, Gorman, Langford, Rasheed, Mackel y Baine. 1979. J. Clin. Microbiol. 10: 437. 2. Feely, Gorman, Weaver, Mackel y Smith. 1978. J. Clin. Microbiol. 8: 320.

2. Feely, Gorman, Weaver, Mackel y Smith. 1978. J. Clin. Microbiol. 8: 320. 2. Feely, Gorman, Weaver, Mackel y Smith. 1978. J. Clin. Microbiol. 8: 320.

3. Pasculle, Feely, Gibson, Cordes, Myerowitz, Patton, Gorman, Carmack, Ezzell y Dowling. 1980. J. Infect. Dis. 191: 727.

J. Infect. Dis. 191: 727. J. Infect. Dis. 191: 727.

4. Edelstein. 1981. J. Clin. Microbiol. 14: 298. 4. Edelstein. 1981. J. Clin. Microbiol. 14: 298. 4. Edelstein. 1981. J. Clin. Microbiol. 14: 298.

5. MacFaddin. 1985. Medios para el aislamiento, cultivo a la identificación de mantenimiento de las bacterias médicos, 5. MacFaddin. 1985. Medios para el aislamiento, cultivo a la identificación de mantenimiento de las bacterias médicos,

vol. 1. Williams & Wilkins, Baltimore, Md.

6. Vickers, Brown y Garrity. 1981. J. Clin. Microbiol. 13: 380. 6. Vickers, Brown y Garrity. 1981. J. Clin. Microbiol. 13: 380. 6. Vickers, Brown y Garrity. 1981. J. Clin. Microbiol. 13: 380. 7. Bopp, Sumner, Morris y Wells. 1981. J. Clin. Microbiol. 13: 714. 7. Bopp, Sumner, Morris y Wells. 1981. J. Clin. Microbiol. 13: 714. 7. Bopp, Sumner, Morris y Wells. 1981. J. Clin. Microbiol. 13: 714.

8. Edelstein. 2007. En Murray, Baron, Jorgensen, Landry y Pfaller (ed.), Manual de Microbiología Clínica, 8. Edelstein. 2007. En Murray, Baron, Jorgensen, Landry y Pfaller (ed.), Manual de Microbiología Clínica, 8. Edelstein. 2007. En Murray, Baron, Jorgensen, Landry y Pfaller (ed.), Manual de Microbiología Clínica,

Noveno ed. Sociedad Americana de Microbiología, Washington, DC

9. Weaver. 1978. En Jones y Herbert (ed.), “Legionarios”: la enfermedad, la bacteria y la metodología. 9. Weaver. 1978. En Jones y Herbert (ed.), “Legionarios”: la enfermedad, la bacteria y la metodología. 9. Weaver. 1978. En Jones y Herbert (ed.), “Legionarios”: la enfermedad, la bacteria y la metodología.

DHEW, Centro para el Control de Enfermedades, Atlanta, Ga.

Disponibilidad

Difco ™ Legionella Agar Base

Gato. No. 218.301 Deshidratado - 500 g

Difco ™ Legionella Agar Enriquecimiento Difco ™ Legionella Agar Enriquecimiento Difco ™ Legionella Agar Enriquecimiento

Gato. No. 233.901 Vial, 5 mL - Pkg. de 6 *

Bundesliga ™ BYCE Base de Agar

SmWW

Gato. No. 212.327 Deshidratado - 500 g

Bundesliga ™ BYCE Agar

BS12 CmPH2 mCm9

Estados Unidos y Canadá

Gato. No. 221808 placas preparadas - Pkg. de 10 *

Europa

Gato. No. 257321 placas preparadas - Ctn. de 120 *

Japón

Gato. No. 252164 placas preparadas - Pkg. de 20 *

Bundesliga ™ BCYE Agar diferencial

Gato. No. 297881 placas preparadas - Pkg. de 10 *

Bundesliga ™ BYCE agar selectivo con PAC

BS12 CmPH2 mCm9

Gato. No. 297879 placas preparadas - Pkg. de 10 *

Bundesliga ™ BYCE agar selectivo con PAV

BS12 mCm9

Gato. No. 297880 placas preparadas - Pkg. de 10 *

Bundesliga ™ BYCE agar selectivo con CCVC

Bundesliga ™ BYCE agar selectivo con CCVC Gato. No. 297878 placas preparadas - Pkg. de 10 *

segundo

In document ThinkIR: The University of Louisville's Institutional Repository (Page 164-172)