OBJETIVOS 1.5 y 2.5
El estudio electrofisiológico nos permitió evaluar la actividad funcional de la corteza de barriles de los tres grupos experimentales, mediante el análisis de los potenciales evocados (PEs). Teniendo en cuenta que los PEs representan la respuestas corticales a estimulaciones periféricas de la vía somatosensorial, y que los animales A y S habían sufrido la sección irreversible del nervio, la estimulación natural de las vibrisas fue sustituida por la estimulación eléctrica del IoN intacto (nervio, animales C) o del cabo proximal del IoN amputado (neuroma, animales A y S). En los animales C se recogieron, además, los PEs tras la estimulación mecánica de vibrisas con pulsos de aire comprimido.
En total se analizaron 44 registros: 8 de animales C, 8 de animales A y 7 de animales S para intensidad 2x y 7 registros de cada grupo para intensidad 5x (Fig. 16A, B). El patrón de los PEs en todos los animales se caracterizó por la presencia de un primer componente positivo (p1), de muy baja amplitud, seguido por un componente negativo (n1) que dio paso a un segundo componente positivo más largo (p2), de mayor amplitud
que p1 pero menor que n (Fig. 16A). Los componentes N y P estuvieron presentes en todos los animales A y S.
Para el estudio de los registros, comparamos la latencia de aparición de la onda N (lat en Fig. 17A), y el área debajo de la onda N (área azul en Fig. 16A) para estimulaciones con una intensidad de 2 y 5 veces la corriente de estimulación mínima. En el análisis estadístico (ver Fig. 16C para representaciones gráficas) consideramos dos factores de ANOVA: grupo animal e intensidad de la estimulación. Ambos factores mostraron diferencias significativas tanto para la latencia (P = 0,0002 para el factor grupo animal, P = 0,0118 para el factor intensidad) como para el área bajo la curva de N (P < 10-4 para el factor grupo animal, P = 0,0037 para el factor intensidad).
Para intensidad 2x, la latencia de los animales C, A y S fue de 8,04 ± 1,98 ms, 10,69 ± 2,16 ms y 8,46 ± 0,95 ms, respectivamente. Las diferencias significativas se encontraron entre los grupos Control y Amputado (P = 0,002), y Amputado – Estimulado (P = 0,011). No se obtuvo diferencia significativa para la latencia a 2x entre los grupos Control y Estimulado (P = 0,616). En el análisis del área, los valores a 2x fueron de 191,38 ± 83,93 msXmV, 43,88 ± 57,93 msXmV y 122,43 ± 69,46 msXmV para los grupos C, A y S, respectivamente. Las comparaciones a posteriori determinaron diferencia estadísticamente significativa entre los grupos C y A (P = 0,0007), pero no entre C y S (P = 0,11). Entre los grupos A y S se detectó una tendencia a la significación (P = 0,06).
Para intensidad 5x, la latencia de los animales C, A y S fue de 6,97 ± 0,86 ms, 8,89 ± 1,15 ms y 7,87 ± 1,04 ms, respectivamente. Los contrastes a posteriori mostraron que sólo existía diferencia significativa entre los grupos C y A (P = 0,019). No se encontraron diferencias entre los grupos A y S (P = 0, 24) o C y S (P = 0,22). Los valores de área para intensidad 5x fueron 251,00 ± 60,73 msXmV, 88, 57 ± 86,06 msXmV y 192,43 ± 83,87 msXmV para los animales C, A y S respectivamente. Los contrastes a posteriori mostraron que la amputación provocaba una disminución significativa del área bajo la curva N, con respecto tanto a la situación Control (P = 0,0005) como tras la Estimulación (P = 0,02). No se obtuvo diferencia entre los grupos C y S (P = 0,18).
Los resultados mostraron que al aumentar la intensidad de corriente de 2x a 5x, en general se observó una disminución en la latencia de todos los grupos y un aumento del
área bajo la curva N. Esta variación, en función de la corriente, sólo mostró ser estadísticamente significativa para la latencia dentro del grupo Amputado (P = 0,036). Los valores para el área dentro del grupo A fueron similares entre 2x y 5x (P = 0,288). En el caso del grupo C, no se obtuvo diferencia ni en la latencia ni el área con el aumento de la corriente (P = 0,143 y P = 0,158, respectivamente). Análogamente al grupo Control, en los animales Estimulados los valores de latencia y área fueron estadísticamente similares para las dos intensidades (P = 0,498 y P = 0,110, respectivamente).
En los animales C, las respuestas corticales a los estímulos mecánicos aplicados sobre las vibrisas (pulsos de aire comprimido) se caracterizaron por PEs de dos ondas principales, que aparecieron con una latencia de 1,5 a 4,0 ms.
µ + SEM
µ - SEM
Actividad funcional. Potenciales Evocados
A
m s x mV ms C
Fig. 16. Potenciales evocados registrados en la corteza tras la estimulación periférica. A) PE típico de un animal Control, tras estimulación eléctrica del IoN con pulsos de 200 µs, mostrando el valor medio µ (línea azul) y los SEMs (líneas negras) de 25 registros. Los umbrales ϕ1 y ϕ2 se situaron en el valor máximo y mínimo de µ ± SEM (detalle izquierdo) en los 200 ms antes de la aparición del estímulo. Las variables que consideramos en los análisis fueron la latencia de aparición de la onda N (lat en detalle derecha) y el área bajo la curva de N (área sombreada en azul en detalle derecha). B) Superposición de los potenciales medios de los tres grupos experimentales, normalizados respecto a su variación máxima. Puede observarse cómo la latencia del potencial evocado en los animales control y estimulado es similar, mientras que aumenta en el animal amputado. También se observa cómo el área del componente negativo se reduce en el animal amputado respecto del control, mientras que el valor de dicho área en el animal estimulado es intermedio a ambos. C) Izquierda. Representaciones gráficas de los valores medios de latencia (en ms, arriba) y área (en ms x mV, inferior) obtenidos en los registros corticales de los animales C (barra negra), A (barra gris claro) y S (barra gris oscuro) tras estimulación eléctrica de IoN/neuroma a intensidades 2x (izquierda) y 5x (derecha) la intensidad mínima para lo que se obtuvo respuesta cortical. * P < 0,05; ** P < 0,01; Τ 0,1 < P > 0,05. Las barras de error representan el SEM de la distribución. Derecha. Potenciales medios evocados por la estimulación eléctrica del IoN en animales Control, Amputados y Estimulados. La línea negra en cada caso indica el valor promedio de voltaje obtenido a partir de 50 estímulos
mientras que las líneas rojas indican el error estándar en cada punto de muestreo. La línea discontinua vertical indica el comienzo del estímulo eléctrico.