Defining Regulations

La linealidad se conoce como la capacidad (dentro de un ámbito dado) de un procedimiento analítico en obtener resultados de una prueba determinada y que estos sean directamente proporcionales a la concentración de analito en la muestra. Posteriormente, el intervalo se refiere al ámbito entre la menor y la mayor concentración del analito donde se ha demostrados que se cuenta con precisión, exactitud y linealidad (Instituto de Salud Pública de Chile 2010; Ministerio de Salud [MINSA] 2005a).

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Para poder establecer ambos elementos, es necesario trabajar de manera consecutiva, por varios días y obtener cierta cantidad de valores mediante la lectura del blanco y varios patrones a diferentes concentraciones conocidas (Instituto de Salud Pública de Chile 2010; International Conference on Harmonization 2005; Magnusson 2014). La literatura recomienda diversos rangos dependiendo de la naturaleza del procedimiento analítico, los cuales se indican a continuación:

a. Ensayo de un principio activo. Se recomienda un rango entre el 80% a 120% de la concentración esperada del analito en la prueba.

b. Determinación de una impureza: Se recomienda un rango de 50% a 120% de la especificación.

c. Ensayo de uniformidad de Contenido: Se debe considerar la naturaleza de la forma farmacéutica, pero en términos generales se recomienda un rango de entre el 70% a 130% de la concentración de trabajo.

d. Pruebas de Disolución: ± 20 % sobre la especificación. Cabe aclarar que, en los casos de fármacos con liberación controlada, en que existe una especificación mínima al inicio de la prueba y una máxima al finalizar, el intervalo debe ser menos un 20% de la especificación mínima y más 20% de la especificación máxima (Ministerio de Salud [MINSA] 2005a; USP Convention 2018d).

Ahora bien, para el caso de los perfiles de disolución comparativos, no hay una recomendación por parte de diversos entes regulatorios ni farmacopeas consultadas. Por lo que basado en las recomendaciones anteriores y conociendo la naturaleza de este método analítico en particular, se debe verificar que el intervalo por seleccionar permita asegurar que el procedimiento analítico cuente con precisión, exactitud y linealidad aceptables. De esta manera, en un PDC usualmente se espera obtener un rango de concentraciones que permitan describir el comportamiento del medicamento por analizar, debido a que estas dependen directamente de la cantidad disuelto de principio activo en cada tiempo de muestreo.

Por último, la evaluación de los datos obtenidos debe ser mediante el uso de herramientas estadísticas, tales como el análisis de varianzas de la regresión lineal de los datos obtenidos, identificación de tendencias mediante la distribución aleatoria de los residuos y pruebas de Homocedasticidad (como la prueba de Hartley) (Ministerio de Salud [MINSA] 2005a).

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2.7.2 Precisión

Este parámetro indica la proximidad de coincidencia (grado de dispersión) entre un grupo de mediciones obtenidas de múltiples muestreos de una misma muestra homogénea, bajo condiciones establecidas. Es usualmente expresada como la desviación estándar relativa (% DSR) o coeficiente de variación de una serie de mediciones (Ministerio de Salud [MINSA] 2005a; USP Convention 2018d).

Este parámetro en particular está comprendido en tres niveles, los cuales son:

a. Precisión intermedia. Es la obtenida dentro del laboratorio y puede ser variando los analistas, los equipos o días distintos, pero con la misma muestra homogénea.

b. Repetibilidad (repetitividad). Se obtiene al obtener una serie de resultados analíticos bajo las mismas condiciones de operación en un intervalo corto de tiempo (mismo día), por un mismo analista, en la misma muestra homogénea y en el mismo equipo.

c. Reproducibilidad. Expresa la precisión entre laboratorios como resultado de estudios interlaboratoriales diseñados para estandarizar la metodología (Ministerio de Salud [MINSA] 2005a).

De acuerdo con la International Conference on Harmonization (ICH) (2005), las pruebas de ensayo y desempeño ejecutadas en un mismo laboratorio pueden ser evaluadas mediante los parámetros de precisión intermedia y repetibilidad. Para ello, el Ministerio de Salud de Costa Rica (2005), recomienda que este procedimiento deba ejecutarse en tres niveles distintos de concentración (80%, 100% y 120%), con tres muestras independientes en cada nivel (para un total de 9 lecturas); o bien, seis muestras independientes a la concentración usual de trabajo del procedimiento analítico (International Conference on Harmonization 2005; Ministerio de Salud [MINSA] 2005a).

No obstante, se debe considerar que las recomendaciones de las concentraciones están basadas en el rango de trabajo usual para una prueba de ensayo, por lo tanto, análisis de desempeño (como en el caso de las pruebas de disolución), deben valorarse según los niveles recomendados desde la definición del rango de linealidad establecido.

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2.7.3 Exactitud

Este parámetro expresa la cercanía entre el resultado obtenido y el valor real, expresado en porcentaje de recuperación (%R). Asimismo, recomienda que el análisis de este parámetro deberá realizarse mediante una determinación de 9 lecturas en tres concentraciones distintas (por triplicado) (International Conference on Harmonization 2005).

De acuerdo con el Ministerio de Salud de Costa Rica (2005), se considera que este parámetro puede evaluarse mediante la comparación entre métodos (contra un método oficial, validado o estandarizado), por adición de un estándar de referencia, comparando curvas de regresión lineal de estándar contra placebos enriquecidos o comparando los resultados de un estándar o material de referencia certificado (Ministerio de Salud [MINSA] 2005a).

2.7.4 Límite de detección (LD)

Este parámetro expresa la cantidad más pequeña del analito que puede ser detectada (mas no necesariamente cuantificada) por una única medición, con un nivel de confianza determinado. Es comúnmente expresado como concentración del analito (Ministerio de Salud [MINSA] 2005a).

De acuerdo con Miller & Miller (1993), se considera que el límite de detección es la cantidad de concentración de analito que proporciona una señal igual a la señal del blanco, yB, más dos veces

la desviación estándar del blanco, sB. Lo anterior se podría traducir en la Ecuación 10,

− = 3 Ecuación 10. Límite de detección

Ahora bien, el mismo autor indica que los términos yB y SB se pueden obtener a partir del análisis de regresión lineal de una curva de calibración, mediante el cálculo de mínimos cuadrados para cada uno de los puntos de la gráfica, permitiendo así calcular la variación distribuida normalmente (solo en la dirección del eje y) con un error estándar estimado por Sy/x (Miller and Miller 1993).

Por otra parte, el cálculo de yB, también puede ser obtenido, mediante el valor del intercepto (a), siendo este último valor una estimación más exacta de la señal del blanco. Por lo tanto, se podría considerar que una manera de cálculo del límite de detección, mediante la regresión lineal y expresado en términos de concentración, la Ecuación 10 podría expresarse como:

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= 3 ∗ Ecuación 11. Límite de detección

mediante regresión lineal

Donde, m es la pendiente de la recta obtenida mediante la regresión lineal. (Miller and Miller 1993)

2.7.5 Límite de cuantificación (LC)

El límite de cuantificación se define como, la cantidad más pequeña del analito en una muestra que puede ser cuantitativamente determinada con una exactitud aceptable. Este se considera un parámetro del análisis cuantitativo para concentraciones bajas de compuestos en matrices de muestra y se usa particularmente para impurezas y productos de degradación. Se expresa como concentración del analito (Ministerio de Salud [MINSA] 2005a).

Adicionalmente, Thomson et al (2002) definen este parámetro como la concentración que permite una precisión suficiente para poder determinar la concentración del analito. En algunas ocasiones, se define como 10 veces la desviación estándar relativa, o bien como 2 veces el valor del límite de detección (Instituto de Salud Pública de Chile 2010; International Conference on Harmonization 2005; Thompson et al. 2002).

De esta forma, el cálculo para obtener el LC se expresa según la siguiente ecuación:

= + 10 Ecuación 12. Límite de

cuantificación

Aplicando las mismas consideraciones que con el límite de detección, se puede adecuar la Ecuación 12 a la regresión lineal, lo cual genera la Ecuación 13:

= 10 ∗

Ecuación 13 Límite de cuantificación mediante

regresión lineal

Donde, m es la pendiente de la recta obtenida mediante la regresión lineal (Miller and Miller 1993).

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2.7.6 Especificidad.

De acuerdo con la formulación de los medicamentos, el principio activo se encuentra múltiples componentes (excipientes) los cuales conforman la matriz del medicamento. Para todo análisis cuantitativo o cualitativo, es fundamental poder diferenciar inequívocamente el analito en presencia de sus posibles interferentes (impurezas, productos de degradación u otros componentes de la formulación) (Instituto de Salud Pública de Chile 2010; International Conference on Harmonization 2005; Ministerio de Salud [MINSA] 2005a; USP Convention 2018d). Aunque, la prueba de especificidad puede diseñarse de distintas maneras para procedimientos analíticos categoría I y III, se implementa la comparación del comportamiento de la matriz con respecto al comportamiento del estándar, cuando se cuente con disponibilidad de la matriz. En esta comparación, se prepara una solución estándar del analito a la concentración esperada en el procedimiento de ensayo y se compara con una solución de matriz a la misma concentración relativa. Para esta prueba en particular, se esperaría que en la matriz (o blanco) no exista ninguna señal que interfiera con la longitud de onda en la que se cuantifica el analito en el ensayo respectivo (si la técnica es por medio de espectrofotometría) (Ministerio de Salud [MINSA] 2005a).

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