Realizar fenotipificación celular en la fase inicial pos obtención de ADAS, previo al inicio del cultivo.
Por la variabilidad encontrada en el número de células/gr de grasa se deben tener en cuenta se deben tener en cuenta algunos factores que pueden afectar la relación células/gr tales como índice de masa corporal, edad y género del paciente.
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12 ANEXOS
12.1 ANEXO A
DOCUMENTO DE CONSENTIMIENTO INFORMADO
COMPARACIÓN DEL NÚMERO VIABLE Y FENOTIPO DE CÉLULAS MADRE MESENQUIMALES EN TEJIDO ADIPOSO POR MÉTODO DE LIPOSUCCIÓN CONVENCIONAL Y MÉTODO DE LIPOSUCCIÓN POR ULTRASONIDO (VASER®)
BANCO DE CÉLULAS STEM DE COLOMBIA
Fecha:
Sr(a): ________________________________________________________ CC: ________________ Edad: ______ Dirección: _________________ Departamento: _____________________________
Teléfono: _______________ _______________
Declaro que:
Entiendo que el tejido adiposo que voy a donar será utilizado para investigación que aporte conocimiento a la biología, funcionamiento y utilización de las células stem obtenidas de tejido adiposo.
Entiendo que la información referente a mi persona será tratada de forma confidencial y codificada de manera que mi identidad quede protegida.
Entiendo que la donación es altruista y que no derivará en ninguna compensación.
Conservo la posibilidad de renunciar a este consentimiento después de obtenerse el tejido adiposo de desecho y antes de que se realicen los ensayos de investigación.
He leído y comprendido toda la información dada, estoy satisfecho(a) de la información recibida, he podido formular todas las preguntas que he creído conveniente y me han aclarado las dudas planteadas.
En consecuencia, doy mi consentimiento para la donación de tejido adiposo obtenido de liposucción.
Nombre y firma del informador Firma de la donante
12.2 ANEXO B
REGISTRO DE SEGUIMIENTO
PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRA DE TEJIDO ADIPOSO
Fecha: Número de muestra:
A. Tejido adiposo
Médico
Código del paciente Clínica
Volumen de muestra
B. Lavado de la muestra
Nº de lavados Observaciones Correcciones
C. Disociación de la muestra de tejido adiposo
Volumen de colagenasa Tipo II a 37° C Volumen de grasa
Tiempo y temperatura
Condiciones para la centrifugación
Volumen de DMEM para reconstituir sedimento Volumen final
Recuentos Posición 1 (Cel./ ml) Posición 2 (Cel./ ml) Posición 3 (Cel./ ml) Posición 4 (Cel./ ml) Concentración (Cel/ml) 1 2
E. Registro del cultivo de las células progenitoras
A. Células y condiciones de cultivo
Inóculo (cel/cm2) Fecha de finalización Fecha inicio de cultivo Área de cultivo (cm2) Volumen de medio (ml) Tipo de Medio Suplemento (v/v) % Control esterilidad medio
B. Cambio de medio
Fecha Volumen (ml) Observaciones
Motivo finalización cultivo: ___Contaminación ___Final experimento ___Congelamiento celular
Ávila-Portillo L.M.
2009
1
COMPARACIÓN DEL NÚMERO VIABLE Y FENOTIPO DE CÉLULAS MADRE
MESENQUIMALESEN TEJIDO ADIPOSO POR MÉTODO DE LIPOSUCCIÓN
CONVENCIONAL Y MÉTODO DE LIPOSUCCIÓN POR
ULTRASONIDO (VASER
®)
Ávila-Portillo L.M
1, Muñoz C
2, Ávila J.P
1, Pérez S.
3, Romero D.
3, Rosales A.
3, Becerra
A
1, Gómez C
1, Madero JI
1.
1.
Grupo de Investigación Banco de Células Stem de Colombia.
2.
Estudiante Pontificia Universidad Javeriana.
3.
Cirujanos Plásticos.
Correspondencia: [email protected]
RESUMEN
En el tejido adiposo humano encontramos una población celular con características de
células madre mesenquimales (MSCs), las cuales tienen capacidad de autorenovación casi
ilimitada y diferenciación hacia células especializadas de diferentes tipos; estas se han
denominado como ADAS (Adipose tissue-Derived Adult Stem cells). Durante los últimos
años ha aumentado el interés por esta fuente debido a su fácil obtención mediante la
liposuccion, representando un riesgo mínimo para el paciente y obteniéndose un gran
número de ADAS. Por esta razón, se ha descrito como una fuente alternativa para la
obtención de células con gran potencial terapéutico en medicina regenerativa, cirugía
plástica y estética.
Ávila-Portillo L.M.
2009
2
La cirugía plástica ha evolucionado desarrollando diferentes tipos de liposucción siendo las
más utilizadas la liposucción Manual o Convencional y la liposucción por método de
ultrasonido (VASER
®) facilitando la extracción del tejido adiposo. En este estudio se
aislaron células ADAS a partir de los dos tipos de liposucción, con el fin de comparar el
número, viabilidad y fenotipo.
Se procesaron 15 muestras obtenidas por liposucción Manual y 15 por liposucción con
equipo VASER
®, estas muestras fueron procesadas siguiendo el protocolo de aislamiento
de MSCs, se realizó recuento celular en cámara de Neubauer y viabilidad con azul de
Tripán para su posterior cultivo en medio DMEM-LG suplementado con lisado de plasma
AB
+al 10%, antibiótico, y se caracterizaron fenotípicamente por citometría de flujo (CD34
-CD45
-, CD105
+, CD90
+, CD73
+).
Se aisló una mayor cantidad de células por gramo de grasa del tejido adiposo obtenido por
liposucción Manual respecto a VASER
®, ambos métodos mostraron resultados de
viabilidad similar con una media del 92%. Las células cultivadas presentan confluencia del
70% en un tiempo similar en liposucción Manual y liposucción VASER
®, además no se
observaron diferencias fenotípicas entre las células obtenidas por los dos métodos de
liposucción.
PALABRAS CLAVE: ADAS, Fenotipificación, Liposucción Manual, MSCs, Tejido
Adiposo, VASER, Viabilidad.
Ávila-Portillo L.M.
2009
3
ABSTRACT
In the human adipose tissue a cellular population can be found, with characteristics of
Mesenchymal Stem Cells (MSC) that have the ability of almost unlimited self renewal and
differentiation towards specialized cells of different types; these cells have been named
ADAS (Adipose tissue-Derived Adult Stem cells).
During the last few years, interest toward this source of adult Stem Cells has grown due to
the possibility of obtaining a great amount of them, with no hassle, during liposuction and
still presenting a minimum risk for the patient. This is why adipose tissue has been
described as an alternative source for obtaining Stem cells with high therapeutic potential in
regenerative medicine, plastic and aesthetic surgery.
Plastic surgery has evolved by developing different types of liposuction, being manual or
conventional liposuction and liposuction using ultrasound (VASER), the more often used,
facilitating the extraction of adipose tissue. In this study, ADAS cells were separated using
both types of procedure by means of comparing the quantity, viability and phenotype.
15 samples obtained by each method were processed following the MSCs isolation
protocol. The cellular recount was done in the Neubauer chamber and the viability with
Tripan blue for further culture in DMEM-LG supplemented with plasma AB+ lysate at
10%, antibiotic. The cells obtained where phenotypically characterized by flow cytometry
(CD34-, CD45-, CD105+, CD90+, CD73+).
In comparison with the VASER method, by manual liposuction, a greater amount of cells
per gram of fat in the adipose tissue was isolated. Both methods showed similar viability
results with an average of 92%. The cultivated cells show 70% confluence in a similar
Ávila-Portillo L.M.
2009
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