7.4 Case Study 3: Detecting Unusual Chords
7.4.3 Feature Representation and Model Parameter Analysis
Colombia
Darwin Olinto Parada*, Helmer Ramírez, Andrés Araujo, Arcesio Salamanca
Resumen
La ehrlichiosis monocítica canina es una enfermedad ocasionada por la rickettsia Ehrlichia canis, que es transmitida por la garrapata Rhipicepha- lus sanguineus. En el torrente sanguíneo ataca a los leucocitos, por lo que hace más complicado detectar este hemoparásito a través del método de frotis sanguíneo. El objetivo de la presente investigación fue determinar la presencia de Ehrlichia canis en perros callejeros (pc) en el barrio El Horcón de la Comuna 5 del municipio de Arauca. Se realizó un censo preliminar con el propósito de determinar la posible población de perros callejeros. Se determinó el tamaño muestra con un nivel de significan- cia de 0,05. Se utilizaron 20 perros callejeros criollos de diferente edad y sexo. A cada animal se le extrajeron 4 ml de sangre de la vena cefálica, previa desinfección del lugar. Las muestras fueron depositadas en tubos vacutainer y almacenadas en cavas de polietileno refrigeradas a 8 °c, y transportadas al Laboratorio de Microbiología para su respectivo análisis. A cada muestra se le realizó un frotis directo y se observó al microscopio. Los resultados obtenidos se expresaron a través de cálculos porcentua- les. No se evidenció presencia de Ehrlichia canis en ninguna muestra, sin embargo 18 caninos presentaron bajo nivel de plaquetas (<4x105), y algunos caninos presentaban sintomatología característica de esta enfer- medad. Se podría deducir que el método utilizado no es confiable para la determinación de la presencia de Ehrlichia canis, por lo que se deben rea- lizar otras pruebas complementarias. Es posible que los caninos presenten otro tipo de parasitismo.
Palabras clave: hemoparásito, leucocitos, frotis directo, Rickettsia.
1Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Cooperativa de Colombia, sede Arauca. *[email protected]
34 Investigaciones Terminadas
Avances de investigación en medicina veterinaria y producción animal
Introducción
Las garrapatas son vectores de diferentes tipos de virus, protozoarios y otros microorganismos, dentro de los cuales pueden encontrarse procariotas Gram negativas de los géneros Rickettsiales, Ehrlichia,
Anaplasma y Borrelia, las cuales afectan a humanos
y animales en diferentes partes del mundo. E. canis
Moshkovski fue la primera Rickettsiales descrita
en perros y es el agente causante de la ehrlichiosis monocítica canina (emc), la cual presenta una distri- bución mundial, particularmente en regiones tropi- cales y subtropicales, y es transmitida por garrapatas de la especie Rhipicephalus sanguineus. Esta bacteria perteneciente a la familia Anaplasmataceae orden Rickettsiales, presenta especial tropismo por mono- citos y macrófagos causando infecciones prolongadas y persistentes (Rojas-Triviño et al., 2013). La infec- ción por E. canis es frecuente en zonas tropicales y subtropicales donde está presente el vector.
Las técnicas utilizadas tradicionalmente para el diagnóstico de Ehrlichia son: inmunofluorescen- cia indirecta (ifi), Elisa, cromatografía en capa sólida, frotis directo (extendido de sangre), y la reacción en cadena de la polimerasa (pcr). Entre estas, Elisa, la cromatografía en capa sólida y el frotis directo son las más utilizadas en Medellín y Colombia. Recientemente se encontró una seropositividad contra E. chaffensis de 31,8% en caninos de Villeta (Cundinamarca) (Cartagena, Ríos y Cardona, 2015).
Estudios han confirmado el hallazgo de E. canis en humanos. En Venezuela se encontró en un estu- dio que, de 20 pacientes humanos que ingresaron con signos clínicos compatibles con ehrlichiosis monocí- tica humana, seis resultaron positivos a E. canis por pcr (Cartagena et al., 2015). En Perú se encontró una seroprevalencia de 9,2%, y en Colombia, en el depar- tamento de Sucre, se encontró una seroprevalen- cia de 3,3% por la técnica de Elisa para Ehrlichia sp. (Anaya, Moron, Jaramillo, Mendoza y Roman, 2009). Así mismo, en Colombia la emc ha sido diagnosti- cada en diferentes lugares y por diferentes técnicas. En un estudio en perros en la ciudad de Villavicencio encontraron alta prevalencia de Ehrlichia spp., apli- cando la técnica de elisa, y también se detectó que el 89,28% de los caninos reflejaron trombocitopenia, y el 10,71% (400,000cel/μl) presentaron valores nor- males (Parrado, Vargas, Hernández y Vergara, 2003).
Los cambios hematológicos que pueden encon- trarse son: trombocitopenias, anemia (por lo gene- rano regenerativas), y leucopenias. También puede
observase la hiperglobulinemia. Puede confirmarse la infección por la visualización de las mórulas en los monocitos en frotis sanguíneos o aspirados de bazo teñidos con Giemsa, pero solo aparecen en el 4% de las pacientes enfermos, por lo cual no debe ser el método de elección (Laboratorios Mayors, s. f.).
Además, los estudios previos no desagregan la prevalencia hallada según características de base de la población tales como la edad, el sexo, el tamaño y la raza del canino, las cuales resultan determinantes para conocer la distribución de la infección y estable- cer posibles grupos de riesgo (Cartagena et al., 2015). La finalidad de la presente investigación fue deter- minar la presencia de E. canis en la Comuna 5, en el barrio El Horcón del municipio de Arauca.
Materiales y métodos
La presente investigación se realizó en el municipio de Arauca, al oriente del departamento homónimo. El municipio presenta un clima tropical lluvioso cuya temperatura varía entre los 25,4 °c en el periodo seco (verano), y los 28,8 °c en el periodo lluvioso (invierno). Estos registros han variado y muestran un aumento ostensible que llega hasta los 34 °c en horas del mediodía, con una percepción mucho mayor en ambientes exteriores que rodean los 40 °c.
Se realizó un censo preliminar con el fin de deter- minar el número de perros en el barrio El Horcón del municipio de Arauca, lo cual arrojó una población de 37 perros, de los cuales 21 fueron perros callejeros (pc), y 16 son perros mascota (pm). Posteriormente se realizó un muestreo probabilístico, con un mar- gen de error del 5% y un nivel de confianza del 95%, dando como resultado un tamaño de muestra de 20 (pc). Para la toma de muestras se tuvieron en cuenta las normas de bioseguridad a fin de evitar una posi- ble contaminación, contagios hacia las personas que realizaban el proceso y evitar algún tipo de mal- trato con los animales. De cada animal se recolec- taron 4 cm de sangre por venopunción, en la vena cefálica. La sangre fue depositada en tubos tapa lila y fueron transportadas refrigeradas en una cava de polietileno para ser procesadas en el Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Se realizó un frotis directo tinturándolo con la sustancia de multicolor, la cual nos ayuda a previa identificación de células blancas en las cuales se alberga el hemoparásito. Los resultados obtenidos
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se expresaron a través de cálculos porcentuales de animales positivos y negativos.
Resultados y discusiones
En la tabla 1 se observan los resultados del estudio. En el total de muestras no se evidenció la presen- cia de E. canis. En la literatura revisada, Giovanna (2006) comenta sobre el examen directo de un frotis de sangre periférica teñido con Romanowsky (puede ser Giemsa o Diff-Quik); para hallar mórulas o cuer- pos de inclusión de Ehrlichia, es simple y poco cos- tosa de realizar (Rikihisa, 1991).
Tabla 1. Resultados de la ausencia (negativo) o presencia
(positivo) de Ehrlichia canis en perros callejeros (pc) en el barrio El Horcón del municipio de Arauca
Perros callejero n
Ehrlichia canis
Positivos Porcentaje Negativos Porcentaje
20 0 0% 20 100%
Se puede inferir que el frotis directo no es un método efectivo para detectar Ehrlichiosis (Cartagena et al., 2015). Aunque no era objeto de estudio, se pudieron notar otros signos muy evidentes que nos llevan a sospechar que hay presencia del hemopará- sitos, por ejemplo, se observó una disminución en el recuento de trombocitos.
Conclusiones
Las pruebas realizadas con frotis sanguíneos teñidas con Giemsa no son el mejor método de identificación
de Ehrlichia canis, pero se puede resaltar que con este tipo de muestra se puede corroborar la sintomatolo- gía para la aplicación de otra prueba que ayude a una mejor detección de esta enfermedad en caninos.
Referencias
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perimental y Salud Pública, 26(1), 54-57.
Cartagena, L., Ríos, L. A. y Cardona, J. A. (2015). Seropre- valencia de Ehrlichia canis en perros con sospecha de infeccion por patogenos transmitidos por garrpatas en Medellín, 2012-2014. Revista Medicina Veterinaria, 9, 51-62.
Contrera, A. M. (2006). Estudio retrospectivo de caso control
de ehrlichiosis canina en la Facultad de Medicina Veteri- naria de la Universidad Mayor de San Marcos: periodo 2002-2005. (Tesis Médico Veterinario). Universidad
Nacional de San Marcos, Lima.
Laboratorios Mayors. (s. f.). Ehrlichiosis canina. Recuperado de http:// mayorslab.com.ar/veterinarios/wpcontent/ uploads/2015/11/ehrlichiosiscanina.pdf
Parrado, M., Vargas, F., Hernández, G. y Vergara, H. (2003). Asociación de los resultados de una prueba serológica (Elisa) y frotis sanguineo en caninos con sontomato- logía compatible de ehrlichiosis. Revista Orinoquia,
7(1), 6-11.
Rojas-Triviño, A., Rueda-Hurtado, A., Díaz-Molano, D. M., Mesa-Cobo, N. C., Benavides-Montaño, J. A., Imba- chi-López, K., . . . López-Bermudez, R. (2013). Iden- tificación de Ehrlichia canis (Donatien & Lestoquard) Moshkovski mediante pcr anidada. Revista Veterina-