The features and process of MTEF at provincial level

MÉTODO DE RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA

POBLACIÓN EN ESTUDIO

Para el presente trabajo se procedió a la toma de muestra (Obtención de la muestra sangre por punción venosa) en la población elegida de la Junta de Pro Mejoras del Caserío Artezón del Cantón Pelileo, los datos fueron recogidos por la autora del trabajo de tesis , los datos obtenidos son la base para el cumplimiento de los objetivos y desarrollo de la propuesta donde se trabaja con 47 agricultores que participan dentro de este trabajo de tesis

MUESTRA EN ESTUDIO

Es un estudio que no se trabaja con una muestra si no se toma en cuenta toda la población.

2.5- MÉTODOS, TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE INVESTIGACÍON

2.5.1. MÉTODOS DEL NIVEL EMPIRICO DEL CONOCIMIENTO

 OBSERVACIÓN CIENTÍFICA : El método de la observación científica es aplicada para determinar los factores que fomentan la intoxicación en los agricultores expuestos a pesticidas en el cultivo de tomate de árbol

 EXPERIMENTO:El método de experimento es aplicado en el Análisis de Laboratorio Clínico mediante un examen de Colinesterasa en sangre para determinar el nivel de contaminación en los agricultores expuestos a pesticidas  ANÁLISIS DOCUMENTAL: En el método de análisis documental se aplica un

análisis de resultados obtenidos en la investigación para correlación de resultados del examen bioquímico con los métodos y técnicas aplicados en el trabajo de investigación.

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2.5.2. MÉTODOS DEL NIVEL TEÓRICO DE CONOCIMIENTO

 HISTÓRICO –LÓGICO: El método Histórico Lógico es aplicado en el marco teórico para que mediante la bibliografía podemos obtener la información necesaria para enriquecernos en conocimiento sobre nuestro tema a tratar.

 EXPERIMENTAL: El método experimental es aplicado en el marco metodológico en la realización de una prueba de laboratorio de la determinación de los niveles de Colinesterasa sérica en sangre para determinar el nivel de contaminación en los agricultores expuestos a pesticidas

 INDUCTIVO- DEDUCTIVO: El método Inductivo – Deductivo se aplica en la problemática del tema este método es de gran importancia debido a que mediante este podemos determinar la problemática del tema es decir la idea a defender y el porqué de la elección de este tema, así como sus causas y efectos

 ANALÍTICO-SINTÉTICO: El método Analítico- Sintético es aplicado en los resultados de Técnicas de Investigación haciendo Análisis de resultados tanto de encuestas como de entrevistas y a la vez de la prueba de laboratorio a realizar para concatenar datos y proponer solución a la problemática.

MÉTODOS Y TÉCNICAS DEL NIVEL EMPÍRICO DEL CONOCIMIENTO

 ENCUESTA: La encuesta se aplica mediante un Cuestionario y está dirigida a los agricultores miembros de la Junta Pro-Mejoras del Caserío Artezón – PELILEO  OBSERVACIÓN: La observación se aplica mediante una Guía de Observación y

está dirigida a los procesos donde se utilizan los Pesticidas en su trabajo en el cultivo de tomate de árbol

 ENTREVISTA: La entrevista se aplica mediante una Guía de Entrevista y está dirigida a los agricultores expuestos a Pesticidas en el cultivo de tomate de árbol, autoridades de salud y profesionales de la agricultura.

 TÉCNICA DE ANÁLISIS: La técnica de análisis se aplica mediante un análisis en el laboratorio clínico mediante una prueba de análisis bioquímico a los agricultores como parte de la población involucrada en el proyecto

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INSTRUMENTOS DE LA INVESTIGACÍON

MÉTODOS, TÉCNICAS Y PROCEDIMIENTOS DEL BIOANÁLISIS

La investigación de campo fue de gran ayuda para la realización de la presente tesis se procedió a recolectar muestras de sangre de pacientes de la Junta de Pro-Mejoras del Caserío de Artezón en cuatro tomas en el mes de Diciembre del 2013

La muestra recolectada a partir de sangre venosa, por punción venosa; siendo sometida la sangre total a centrifugación para la obtención de suero con el cual se procedió a realizar los análisis que permitieron obtener valores o la cantidad de la enzima Colinesterasa en la población elegida para determinar la intoxicación por parte de pesticidas que puede estar afectando a la salud e las personas que se encuentran en contacto directo con estas sustancias en el cultivo de tomate de árbol .

TECO DIAGNOSTICS CHOLINESTERASE (PTC) REAGENT SET (KINETIC PROCEDURE)

KIT DE COLINESTERASA

La determinación de Colinesterasa se puede realizar por varios métodos como son potenciométrico, conductimétrico, por titulaciones, entre otros. Para este estudio se utilizará el método de Ellman que es una técnica cinética colorimétrica, en la que se empleará el reactivo de la casa TECO.

DESTINADO A:

El reactivo de colinesterasa es usado in vitro en el diagnostico cinético cuantitativo de la determinación de Colinesterasa en suero, plasma o sangre total o completa de personas o seres humanos.

INTRODUCCÍON:

La medición de colinesterasa en suero ha sido usada para evaluar la función del hígado y supervisar la excesiva exposición a pesticidas, insecticidas, organofosforados. esta prueba es útil para la predicción a la susceptibilidad prolongada después de la administración de la succinilcolinesterasa y a la investigación de variantes hereditarios de enzima colinesterasa.

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Hay muchos métodos para la medición de la actividad de la enzima Colinesterasa como métodos ,monométricos , titrimétricos y photométricos , El proceso colorimétrico basado en la reacción de Ellman es sensible y sencillo , por lo tanto esta técnica constituye la base de nuestro reactivo .

PRINCIPIO

Las reacciones de la determinación de Colinesterasa son las siguientes: CHOE

PROPIONICOLINA + H2O ACIDO PROPIONICO + TIOCOLINA TIOCOLINA + DTNB 5-TIO- 2- NITROBENZOATO

La Colinesterasa hidroliza a Propioniltiocolina (PTC) en Tiocolina y ácido Propiónico que reacciona con ácido 5,5'-Ditiobis-2-Nitrobenzoico (DTNB), y produce un compuesto amarillo de 5-Tio-2-Nitrobenzoato con una absorbancia máxima a 405 nm (nanómetros) de longitud de onda. Por consiguiente el rango en el cambio de la absorbancia a 405 nm es directamente proporcional a la actividad de colinesterasa.

RECOGIDA Y ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA

La actividad de la Colinesterasa es estable sin diluir el suero puede durar 2 semanas a temperatura de 2-8ºC y hasta 3 meses a una temperatura -20ºC, el suero debe ser eliminado o removido enseguida, El anticoagulante EDTA no inhibe la actividad de la Colinesterasa.

PROCESO MANUAL

1. Reconstituir el reactivo de acuerdo a las instrucciones

2. Pipetea 1.0 ml de reactivo en los tubos apropiados y equilibrar a una temperatura de 30ºC o de 37º C

3. Encerar el espectrofotómetro con agua a 405 nm

4. Añadir 10 uL de muestra ( suero , plasma , o hemolisado ) mezclar bien

5. Después de 15 segundos , medir la absorbancia A1 y el tubo regresa a la temperatura de 30ºC o de 37º C por otros 30 segundos y se lee la segunda medición de la absorbancia A2

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6. Calcular la A por 30 segundos , restando A1 desde A2 multiplicar por 2 y se obtiene A por minuto

7. Calculara la actividad de la Colinesterasa (U/L) de la muestra y multiplicar por A /min. veces 7426

VALORES ESPERADOS

El rango esperado de suero de la actividad de Colinesterasa a una temperatura de 30 ºC determinada es la siguiente:

SUERO 3100- 7700 u/L PLASMA 1700- 4100 u/L SANGRE ENTERA 3300- 5500 u/L ERITROCITOS 4400- 8200 u/L

MATERIALES DE LABORATORIO EQUIPOS

 Centrifuga (Centrifuge PLC Series)

 Espectrofotómetro (ThermoScientificGenesys 20) MATERIALES  Tubos rojos  Jeringuillas 3 ml  Torniquete  Gradillas  Tubos de ensayo  Pipetas  Cronometro  Guantes  Torundas  Puntas  Pizeta

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REACTIVOS

 Kit de CHOLINESTERASE (PTC) REAGENT SET (KINETIC PROCEDURE)

 Alcohol  Agua destilada

RECOLECCIÓN DE LA INFORMACIÓN

En esta investigación para la obtención de la información necesaria , adecuada y verídica se recolectaran los datos basándose en los siguientes parámetros :

 Aplicación de los métodos , técnicas e instrumentos de investigación  Análisis de datos

 Tabulación de datos

 Presentación del análisis y cuantificación de datos, mediante diagramas de pastel o barras.