En los cromatogramas se comprueba la producción etanol (Tiempo de retención de 1.48 minutos), por las levadura 30 y 23a en medios que contenían buchón y elodea respectivamente, a las 48 horas de incubación. Con relación a la levadura 30 en medio hidrolizado biológicamente a las 48 horas, se observa además del etanol otros productos de fermentación como el dióxido de carbono, 1-propanol, 2-metil y 1-butanol, 2-metil (Figura 9); al igual para elodea se presentaron productos de la fermentación como el dióxido de carbono, acetato de etilo y 1-butanol, 3-metil (Figura 13). Estos alcoholes se pueden presentar en la fermentación como consecuencia del metabolismo de los azúcares (Madigan et al.,2003; Ramírez, 2006).
Figura 9. Cromatograma de la producción de etanol con la levadura 30 en el medio hidrolizado con
Ϯϰ
Figura 10. Cromatograma de la producción de etanol con la levadura 23a en el medio sin hidrólisis, con un tiempo de retención 1.48 minutos
Por medio de este método se pudo comprobar la producción de etanol de las levaduras escogidas en el medio hidrolizado como sin hidrólisis. Es un método de elección para la determinación de etanol que ofrece alta selectividad y resultados precisos, utilizado en varios estudios (Corrales y Rangel, 1999; Monsalve et al., 2006; Sarmiento y Silva, 2007; Oviedo et al., 2009 y Peña y Arango, 2009).
6.4. Caracterización taxonómica preliminar de las levaduras
Se determinó mediante las pruebas bioquímicas y el MicroScan que la mayoría de las levaduras escogidas como posibles productoras de etanol son cercanas al género Candida sp (Tabla 5, Anexo 12). Los otros géneros encontrados fueron cercanos a
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, y Hansenula sp (Tabla 5, Anexo 12).Ϯϱ
Tabla 3. Identificación preliminar de las levaduras escogidas como mejores productoras de etanol por el método del yodoformo
Código Identificación 1 Brettanomyces sp. 16 Hansenula sp 17 Hansenula sp 23 Candida parasilopsis 23 a C. lusitaniae 30 C. albicans 45 H. polymorpha R C. parasilopsis T C. lusitaniae
Los resultados encontrados tienen relación con lo reportados por varios estudios de aislamiento de levaduras acuáticas, los cuales mencionan que algunas especies del género Cándida pueden encontrase en dichos ambientes (Ochoa y Vázquez, 2004). Adicionalmente especies del género Candida sp. se han reportado como productoras de etanol y algunas a partir de compuestos vegetales prehidrolizados como el buchón de agua (Isarankura et al, 2007., Mishima el al, 2008., Masami et al, 2008., Nigam, 2002;). El género Hansenula sp. también ha sido reportado por algunos autores como productor de etanol (Olena et al, 2008., Voronovsky et al, 2009., Dejelal et al, 2006). Dichas investigaciones dan soporte a los resultados encontrados en este estudio, ya que se determinó que las levaduras identificadas como mejores productoras de etanol, en su mayoría fueron aisladas de las muestras de agua de la Laguna, (1, 16, 23, 23a, 30, R, T) y se determinó que producían etanol a partir de las macrófitas acuáticas hidrolizados y sin hidrólisis.
El hallazgo de levaduras productoras de etanol en dos macrófitas invasoras de la laguna de Fuquene (Masami et al, 2008 y Nigam, 2002), es de importancia como punto de partida para posteriores estudios, como una alternativa amigable con el medio y sustentable económicamente para disponer de los residuos de dichas plantas al ser extraídas mecánicamente de la laguna. Y además si se pueden usar para la producción del biocombustible se va a contribuir al control de la emisión de gases tóxicos a la atmosfera por parte de los combustibles provenientes del petróleo y a mejorar la calidad de vida de los habitantes de la zona de influencia de la Laguna de Fúquene.
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7. CONCLUSIONES
En total de la laguna de Fúquene y de las macrófitas buchón y elodea, se aislaron 49 cepas y trece de ellas que presentaron la mayor producción de etanol fueron identificadas como cercanas a los géneros Candida sp, Brettanomyces sp y Hansenula sp., esto demuestra la diversidad de la Laguna de Fúquene y la importancia de la implementación de medidas para su conservación.
El mejor pretratamiento para buchón y elodea fue el biológico con Pleurotus ostreatus a los diez días de incubación que presentó la mayor liberación de azúcares fermentables con un promedio de 55,303g/l y 30,867g/l para buchón y elodea respectivamente.
Las levaduras C. albicans LJC. lusitaneae produjeron la mayor cantidad de etanol en medios con buchón y elodea hidrolizados y no hidrolizados, los cuales fueron comprobados por cromatografía de gases. El potencial de esas cepas para futuras investigaciones en el campo de los biocombustibles de segunda generación es de gran importancia ya que permite el aprovechamiento de materiales lignocelulósicos.
Con los resultados obtenidos durante este trabajo se cumplió con el objetivo general de la investigación, ya que se aislaron levaduras capaces de producir etanol a partir de las macrófitas acuáticas buchón y elodea, siendo un punto de partida para una posible solución a la disposición final de estos residuos vegetales una vez extraídos mecánicamente de la laguna de Fúquene.
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8. RECOMENDACIONES
Las levaduras C. albicans y C. lusitanie se recomiendan para futuras investigaciones en la producción de biocombustibles en medios con las plantas acuáticas, buchón o elodea, tratadas por métodos biológicos con P. ostreatus.
Es necesario continuar con los estudios de estas macrófitas acuáticas para dar una alternativa industrial a escalas mayores en la producción de etanol.
Continuar con la identificación molecular de las cepas aisladas de la laguna de Fuquene para así conocer las mejores condiciones de fermentación inherentes a la cepa, para el aprovechamiento de buchón y elodea en la producción de etanol.
Se debería investigar los microorganismos que actúan en el pre-secado que realizan la Asociación de pescadores “Los Fundadores” para la producción de bioabono, y utilizada en este estudio, como cepas promisorias en la liberación de azúcares fermentables, al ayudar en la degradación del material constitutivo de la pared celular de las plantas acuáticas, buchón y elodea.
Es recomendable cuantificar la producción de alcohol por métodos cromatograficos y optimizar la producción de biocombustibles de las levaduras aisladas.
Ϯϴ
9. BIBLIOGRAFIA
Abraham, M. y Kurup, G.M. 1996. Bioconversion of tapioca (Manihot esculenta) waste and water hyacinth (Eichhornia crassipes)-Influence of various physicochemical factors. Journal of Fermentation and Bioengineering. 82:259-63.
Angenent, L. T. 2007. Energy biotechnology: beyond the general lignocellulose-to-ethanol pathway. Current Opinion in Biotechnology. 18:191–192.
Aguilar, C. N. y Saucedo, S.E. 2008. Producción de etanol con Cándida kéfir. Reporte del verano de la ciencia. Facultad de ciencias químicas departamento de investigación en alimentos. Universidad Autónoma de Coahuila. 11p.
Aweke, G. 1993. The water hyacinth (Eichhornia crassipes) in Ethiopia. Bulletin des se´ances. Acade´mie royale des Sciences d’outre-mer, Brussels. 39(3):399–404.
Banat, I.M., Nigam, P. y Marchant, R. 2007. Isolation of thermotolerant, fermentative yeasts growing at 52ºC and producing ethanol at 45ºC and 50ºC. World Journal of Microbiology and Biotechnology. 8: 259-263.
Badger, P.C. 2002. Ethanol from cellulose: A general review in J. Janick and A. Whipkey (eds.). Trends in new crops and new uses, ASHS Press, Alexandria, VA. 17-21.
Bell, P. y Attfield, P. 2007. Breakthrough in yeasts for making bio-ethanol from lignocellulosics. Microbiogen Pty Ltd, Macquaie University Campus, Sydney, NSW 2109, Australia. 3p.
Biocombustibles. 2007. I seminario-taller biocombustibles biodiesel – bioetanol 2007. Revista Virtual Pro. Bogotá, Colombia. 33p
Blasina y Tardáguila. 2006. Empresa de EEUU extraerá alcohol y biodiesel del maíz. Diario El Observador- Agropecuario-.10p.
Bon, E. y Ferrara, M. A. 1996. Bioethanol production via enzymatic hydrolysis of cellulosic Biomass. Chemistry Institute, Federal University of Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brazil and Medicines and Drugs Technology Institute. 11p.
Breijo, F.J. y Yufera, E. 1989. Alcohol de biomasa. III. Hidrólisis de la fracción lignocelulolulosica obtenida de residuos agrícolas y cosechas de sorgo. Revista de Agroquímica y Tecnología de Alimentos. 29(4):501-509.
Calixto, M.P. y Basto, M.A. 2005. Análisis preliminar de inóculos microbianos como biofertilizantes y aceleradores del compostaje de macrófitas acuáticas presentes en la Laguna de Fúquene. Tesis de grado para obtener el título de Microbiólogo Industrial. Pontificia Universidad Javeriana. Director Martínez, P. y Codirector Castillo, J. Bogotá, Colombia. 169p. Campo, I.; Alegria, I.; Zazpe, M.; Echeverria, M. y Echeverria, I. 2006. Diluted acid hydrolysis pretreatment of agri-food wastes for bioethanol production. Industrial Crops and Products. 24: 214–221.
Cervantes, M. y Pedroza, A. M. 2007. El pulque: características microbiológicas y contenido alcohólico mediante espectroscopia Raman. NOVA - Publicación Científica en Ciencias Biomédicas. 5(8):101-212.
Chacón, O. y Waliszewski, K. 2005. Preparativos de celulasas comerciales y aplicaciones en procesos extractivos. Universidad y Ciencia. 21(42):111-120.
Corporación Autónoma regional de Cundinamarca – CAR. 2000. Fúquene el Lecho de la Zorra. Primera edición. C`vinni Editorial Ltda. Bogotá, Colombia. 189 p.
Ϯϵ
Corporación Autónoma Regional de Cundinamarca -CAR-. 2009. Fúquene, Cucunuba y Palacio, Riqueza aun y a pesar del cambio ambiental. Editorial Bogotá, Colombia. 20p. Corporación Colombiana Agropecuaria –CORPOICA-. 2009. Biocombustible, de la mano con los agricultores colombianos. Cartilla. Editado por Edición y Comunicación, Edccom. Bogotá, Colombia. 23p.
Corrales, J. y Rangel, C.C.1999. daños por frío y producción de etanol en aguacate (Persea americana Mill.) CV. HASS. Revista Chapingo Serie Horticultura 5:345-351.
Cruz, F. 2004. Compostaje del buchón de agua como alternativa de gestión. Primeros resultados. Universidad de Los Andes, Bogotá, Colombia. 2p.
Cunningham, R y Lopez, G. 1994. Etanol de lignocelulosicos: tecnología y perspectivas. Santiago de Compostela. Universidad, Servicio de Publicación e Intercambio Científico. Programa CYTED. 1p.
Dillon, C.R., Maurice, D.V. y Jones, J.E.1988. Composition of Egeria densa. J.Aquat. Plant Manage. 26:44-45.
Dirección General de Aguas-DGA-, Asociación Interamericana de Ingeniería Sanitaria y Ambiental-AIDIS-, Comité Chileno para el Programa Hidrológico Internacional –CONAPHI-, Sociedad Chilena de Ingeniería Hidráulica-SOCHID- y La Asociación Latinoamericana de Hidrología Subterránea para el Desarrollo-ALHSUD-. 2005. Efectos descontaminantes de la planta elodea del estero Piduco de Talca. Quinto concurso nacional de investigación del recurso agua para jóvenes estudiantes 2005. Consultado online el 5 de noviembre de 2008 en <http://www.dga.cl/secuencias/junior/2005/Trabajos2005/006.pdf>. 8p.
Eslava, M. y García, A. 2001. Evaluación de un inoculo microbiano en el proceso de degradación de residuos en cultivos de flores. Tesis de grado para optar el titulo de microbiólogo industrial. Pontificia Universidad Javeriana. Directores Martínez, P. y Algecira, N. Bogotá, Colombia. 114 p.
Estrada, R.D., Rubiano, J., Quintero, M., Giron, E. y Pernett, X. 2004. Pago por servicios ambientales en la laguna de Fúquene -Colombia-. Consorcio para el Desarrollo Sostenible de la Ecorregión Andina-CONDESAN-. 17p.
Feijo, C.S., Momol, F.R., Bonetto, C.A. y Tur, N.M. 1993. Factors influencing biomass and nutrient content of the submersed macrophyte Egeria densa planch in a pampasic stream. Hydrobiologia. 341: 21-26.
Feijoó, C., García M. E., Momo, F. y Toja, J. 2002. Nutrient absorption by the submerged macrophyte egeria densa planch: Effect of Ammonium and Phosphorus Availability in the Water Column on Growth and Nutrient Uptake. Lirnnetica. 21(1-2): 03-104.
Fernández, C. y Novo, R. 1988. Vida Microbiana en el Suelo, II. Editorial Puebloy Educación, La Habana, Cuba. 220p.
Fletcher, P. J. y Van Staden, J. F. 2003. Determination of ethanol in distilled liquors using sequential injection analysis with spectrophotometric detection. Analytica. Chimica Acta 499. 123–128.
Fuentes, L., Rabelo, S., Maciel, R. y Costa, A. C. 2008. Alkaline and oxidative pretreatment of sugarcane bagasse for bioethanol. Department of Chemical Process – School of Chemical Engineering State University of Campinas-UNICAMP-.Brazil. 14p.
Fujita, Y., Takahashi, S., Ueda, M., Tanaka, A., Okada, H., Morikawa, Y., Kawaguchi, T., Arai, M., Fukuda, H. y Kondo, A. 2002. Direct and efficient production of ethanol from cellulosic material with a yeast strain displaying cellulolytic enzymes. Applied and Environmental Microbiology. 68(10):5136–5141.
ϯϬ
Fundación Humedales. 2001. Complejo de lagunas de Fúquene, Cucunubá y Palacio.
Consultado online el 12 de agosto de 2008 en
<http://www.fundacionhumedales.org/sharedfiles/file/ProgramaFúquene>. 5p.
Fundación Humedales. 2008. Implementación de estrategias productivas que contribuyan al bienestar de las comunidades locales de la Laguna de Fúquene y la promoción de la conservación de su ecosistema. Fondo para el desarrollo humano Fondeshu proyectos comunitarios. 26p.
Gajalakshmi, S., Ramasamy, E., Abbasi, S. 2001. High-rate composting vermicomposting of water hyacinth (Eichhornia crassipes, Mart. Solms). Bioresource Technology. 83(3):235-239. Gajalakshmi, S.; Ramasamy, E. V. y Abbasi, S. A. 2002. Vermicomposting of different forms of water hyacinth by the earthworm Eudrilus eugeniae, Kinberg. Bioresource Technology,. 82(2):165-169.
Galbe, M. y Zacchi, G. 2007. Pretreatment of lignocellulosic materials for efficient bioethanol production. Advances in Biochemical Engineering/ Biotechnology. 108:41–65.
García, J.M. y García, J.A. 2006. Biocarburantes líquidos: biodiesel y bioetanol. Informe de Vigilancia Tecnológica. Fundación para el conocimiento Madrid CEIM. La levadura y la producción de CO2. Obtenido el 12 de agosto de 2008 en <http://usuarios.lycos.es/nachodiscosweb/articulo/levadura.htm>. 125p.
González, A., Mata, Y., Hernández, G., Terrón, M.C., Carbajo, J.M., Santos, S., Eugenio, M.E. y Villar, J.C. 2008. Procesos combinados de tratamiento de la biomasa vegetal para la producción de materias primas para el sector energético y papelero. V congreso iberoamericano de investigación en celulosa y papel. Guadalajara, Jalisco, México.12p.
Gosh, B.K. y Gosh, A. 1992. Degradation of cellulose by fungal cellullase. In Microbial Degradation of Natural Products, ed. G. Winkelmann, VCH Publishers, Inc., New York. 84-126. Gray, K.; Zhao, L. y Emptage, M. 2006. Bioethanol. Current Opinion in Chemical Biology. 10: 141-146.
Gregori, A.; Svagelj, M. y Pohleven, J. 2007. Cultivation techniques and medicinal propertiesof Pleurotus spp. Food Technology and Biotechnology. 45(3):238–249.
Gunnarsson, C.C. y Petersen, C.M. 2007. Water hyacinths as a resource in agriculture and energy production: A literature review Waste Management. 27(1):117-129.
Hadar, Y., Kerem, Z., Gorodecki, B. y Ardon, O. 1992. Utilization of lignocellulosic waste by the edible mushroom, Pleurotus. Biodegradation. 3:189-205.
Hahn-Hägerdal, B., Galbe, M., Gorwa-Grauslund, M.F., Liden, G., Zacchi, G. 2006. Bio- ethanol--the fuel of tomorrow from the residues of today. Trends Biotechnology. 24:549-556. Hernández, M.T. 2001. Tendencias actuales en la producción de bioetanol. Facultad de Ingeniería - Universidad Rafael Landívar Boletín Electrónico No. 08. 17p.
Higuchi, T. 1985. Biodegradation of cellulose: biosynthesis and biodegradation of wood components. Academic Press Inc. Orlando, Florida. 469-503 p.
Horváth, I.S., Sjöde, A., Alriksson, B., Jönsson, L.J. y Nilvebran, N.O. 2005. Criritical conditions for improved fermentability during overliming of acid hydrolysates from spruce Applied Biochemistry and Biotechnology. 124(1-3):1031-1044.
Hronich, J,E., Martin, L., Plawsky, J. y Bungay, H. R. 2008. Potential of Eichhornia crassipes for biomass refining Industrial. Microbiology and Biotechnology. 35:393–402.
ϯϭ
Inga, R.A. 2009. Producción de biotetanol. Monografía presentada para optar el Título de Licenciado en Biología, en el XV Curso de Titulación realizado en la ciudad de Lambayeque, Perú Facultad de Ciencias Biológicas-Universidad Nacional “Pedro Ruiz Gallo”-. 96p.
Instituto Colombiano para el Desarrollo Rural-INCODER-. 2009. Biocompost, una alternativa económica en la laguna de Fúquene. Consultado online el 10 de septiembre de 2008 en <http://www.rds.org.co/oficina.htm?x=1053741>. 1p.
Isarankura-Na-Ayudhya, C., Tantimongcolwat, T., Kongpanpee, T., Prabkate, P. y Prachayasittikul, V. 2007. Appropriate Technology for the Bioconversion of Water Hyacinth (Eichhornia crassipes) to Liquid Ethanol: Future Prospects for Community Strengthening and Sustainable Development. EXCLI Journal. 6:167-176.
Japan Inernational Cooperation Agency- JICA-. 2000. Informe final proyecto Laguna de Fúquene-Informe final CTI Engineering International, Co, Ltda. Bogotá D.C.28p.
Kafarov, V., Ojeda, K. y Sánchez, E. 2007. Diseño de producción conjunta, Biodisel-bioetanol. Revista Energía y Computación. 15(1):9 – 14.
Kovacs, K., Macrelli, S., Szakacs, G. y Zacchi, G. 2009. Enzymatic hydrolysis of steam- pretreated lignocellulosic materials with Trichoderma atroviride enzymes produced in-house. Biotechnology for Biofuels. 2:14.
Karhumaa, K., Garcia, R., Hahn-Hägerdal, B. y Gorwa-Grauslund, M. 2007. Comparación de la xilosa reductasa xylitol-deshidrogenasa y la xilosa isomerasa vías de fermentación de xilosa recombinante de Saccharomyces cerevisiae. Microbial Cell Factories. 6:1-5.
Kumar, A., Singh, L.K. y Ghosh, S. 2009. Bioconversion of lignocellulosic fraction of water- hyacinth (Eichhornia crassipes) hemicellulose acid hydrolysate to ethanol by Pichia stipitis. Bioresource Technology.100:3293–3297.
Lamed, R. y Bayer, E.A.1988. The cellulosome of Clostridium thermocellum. Advances in Applied Microbiology. 33:1-46.
Linares, M. J. y Cuesta, F. 2001. Identificación de levaduras. Revista Iberoamericana de Micología. 11-18.
Lara, G., Yeomas, J; Ulloa, O. y Kojima, K. 2007. Efecto del nuevo sistema de tratamiento de residuos Sépticos en el funcionamiento del humedal artificial del relleno sanitario de la universidad Earth. Tierra Tropical. 3(2):173-181.
Lazaro, L. y Arauzo, J. 1994. Aprovechamiento de residuos de la industria de conservas vegetales. Hidrolisis enzimática. Zumbia. 12:227-240.
Linde. M.; Galbe, M. y Zacchi, G. 2006 .Steam Pretreatment of Acid-Sprayed and Acid-Soaked Barley Straw for Production of Ethanol. Applied Biochemistry and Biotechnology. 129-132:546- 562.
Machinski, M. y Nishiyama, P. 2003. Comparação dos métodos de Atenuação de Energia Radiante e Titulométrico para a determinação de Etanol no sangue. Maringá. 25(2):135-140. Madigan, M. T, Martinko, J. M. y Parker, J. 2003. Brock. Biología de los microorganismos. Decima edición. Prentice Hall. Barcelona, España. 1011p.
Manzano, A.M., León, T., Argüelles, J., Ramos, M., Chinea, R., Guerra, G, Casado, G. Sánchez, M.I. y Gómez, B. 2004. Hongos de la podredumbre blanca con capacidad ligninolítica y acción decolorante sobre el violeta cristal. Revista Biología. 18(2):123-127.
ϯϮ
Martin, C. Klinke, H. y Thomsen, A.B. 2007. Wet oxidation as a pretreatment method for enhancing the enzymatic convertibility of sugarcane bagasse. Enzyme and Microbial Technology. 40: 426–432.
Martínez-Nieto, P. 2004. Evaluación de un inoculo microbiano en el proceso de compostaje de las plantas acuáticas Eichhornia crassipes y Egeria densa presentes en la laguna de Fúquene. Informe final contrato No C-0732-03, Corporación Autónoma Regional de Cundinamarca –CAR- .Subdirección de Patrimonio Ambiental. 90 p.
Martínez-Nieto, P. 2006. Compostaje de elodea, residuos de cebolla y gallinaza. En Avances de resultados de investigación en cebolla de rama en Aquitania, Boyacá. Editores Herrera, H., C. A., Sánchez, G. D. y Peña, V. 27-40 p.
Martínez-Nieto, P. 2007. Producción de bioabono a partir de Jacinto de agua y elodea brasilera en la laguna de Fúquene II fase. Segundo Informe de avance. Fundación Humedales. Convenio INCODER-FH N° 015-2007. 15 p.
Martin, F.M. El bioetanol. Aporte internacional: España. Agro enfoque. 16-19p.
Masami, G., Yukinari, I. y Urano, N. 2008. Ethanol production from the water hyacinth Eichhornia crassipes by yeast isolated from various hydrospheres. Africa Journal of Microbiology Research. 2:110-113.
Masson, L. 1997. Métodos analíticos para la determinación de humedad, alcohol, energía, materia grasa y colesterol en alimentos. Producción y manejo de datos de composición química de alimentos en nutrición. Capitulo 14. 368p.
Masterson, J. 2007. Eichhornia crassipes. Smithsonian Marine Station Submit additional information.3p.
Matiz, A; Torres, C. y Poutou, R. A. 2002. Original producción de etanol con células inmovilizadas de Zymomonas mobilis. Mvz-Córdoba. 7(2):216-223.
Maya, D. L y Castillo, D. 2005. Análisis de la acción colectiva para el Manejo de cuencas. Estudio piloto-cuenca de la Laguna de Fúquene. Equipo de investigación del Depto. de Desarrollo Rural y regional de la Facultad de Estudios Ambientales y Rurales. 21p.
Mejía, L. F., Martínez, H. A., Betancourt, J. E. y Castrillon, C. E. 2007. Aprovechamiento del residuo agroindustrial del mango común (Mangifera indica L.) en la obtención de azucares fermentables. Ingeniera y Ciencia. 3(6):41–62.
Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial -MAVDT-, Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural -MADR-, Ministerio del Interior y Justicia - Dirección de Prevención y Atención de Desastres, Ministerio de Minas y Energía-MME-,Corporación Autónoma Regional de Cundinamarca- CAR-,Departamento Nacional de Planeación: DDUPA, DDRS, DIES. 2006. Estrategia para el manejo ambiental de la cuenca Ubaté –Suárez. Documento Compes. Consejo Nacional de Política Económica y Social, República de Colombia .Departamento Nacional de Planeación. 53p.
Ministerio del Medio Ambiente. 2002. Política nacional para humedales interiores de Colombia, Estrategias para su conservación y uso sostenible. Bogotá D.C. 67p.
Miller, G. 1959. Use of Dinitrosalicylic Acid Reagent for Determination of Reducing Sugar. Analytical Chemistry, ISSN 0003-2700. 31(3):426-428.
Mishima, D.; Kuniki, M.; Sei, K.; Soda, S.; Ike, M. y Fijita, M. 2008. Ethanol production from candidate energy crops: Water hyacinth (Eichhornia crassipes) and water lettuce (Pistia stratiotes). Bioresource Technology. 99:2495-2500.
ϯϯ
Monsalve, J.F., Mediana, V.I. y Ruiz, A.A. 2006. Red De Revistas Científicas de América Latina y el Caribe, España y Portugal. 73(150):21-27.
Morgan, V.H. 2009. Egeria densa. USGS Nonindigenous Aquatic Species Database, Gainesville, FL.1p.
Morrison, R. y Boyd, R. 1998. Química orgánica. Quinta edición. New York University. Pearson Education. 1450p.
Mussatto, S.I., Dragone, G., Fernandes, M., Rocha, G. y Roberto, I. 2006. Efecto de los tratamientos de hidrólisis ácida e hidrólisis alcalina en la estructura del bagazo de malta para liberación de fibras de celulosa. XXII Interamerican Confederation of Chemical Engineering (CIIQ). 10p.
Mussatto, S.I. y Roberto, I.C. 2004. Alternatives for detoxification of diluted-acid lignocellulosic hydrolyzates for use in fermentative processes: a review. Bioresource Technology. 93:1–10. National Renewable Energy Laboratory-NREL-. 2007. Research Advances, Cellulosic Ethanol.
Consultado online el 2 de noviembre de 2008 en
<http://www.nrel.gov/biomass/pdfs/40742.pdf>. 8p.
Nc State University. Brazilian Elodea or Egeria. Consultado online el 17 de septiembre de 2008 en <http://www.cropsci.ncsu.edu/aquaticweeds>. 1p.
Neidleman, S. 1993. Advances in Applied Microbiology. Academic Press. San Diego, California. Volumen 39. 352 p.
Nigam, J. 2002. Bioconversion of water-hyacinth (Eichhornia crassipes) hemicellulose acid hydrolysate to motor fuel ethanol by xylose–fermenting yeast. Journal of Biotechnology. 97:107- 116.
Núñez, C.E. 2008. Pulpa y papel I 7 - Química de la madera. 7.2– Celulosa. Consultado online el 20 de noviembre de 2009 en <http://www.cenunez.com.ar >. 57-65.
Oviedo, L; Lara, C y Mizger, M. 2009. Levaduras autóctonas con capacidad fermentativa en la producción de etanol a partir de pulpa de excedentes de plátano Musa (AAB Simmonds) en el departamento de Córdoba, Colombia. Rev. Colomb. Biotecnol. XI(1) :40-47.
Ozbay, H.; Üniversitesi, K y Fakultesi, F. 2001. Testing growth of elodea nuttallii (Palnch) H. St. John with different culture media. Turk J Bot. 25:239-244.
Ozimek , T; Donk, E.V. y Gulati, R.D. 1993. Growth and nutrient uptake by two species of Elodea in experimental conditions and their role in nutrient accumulation in a macrophytedominated lake. Hydvobiologia. 251:13-18.
Palacios, C. 2007. Plan de negocios para la elaboración de abonos orgánicos a partir de buchón y elodea presentes en la Laguna de Fúquene. Tesis de grado para obtener el titulo de Ingeniero Industrial. II.07 (10) 124. Universidad de los Andes. Asesores Palacios, F.,